重叠延伸PCR技术在单碱基定点突变中的作用

氨基酸通透酶(amino acid permease,AAPs)是一种跨膜转运蛋白,广泛参与植物体内氨基酸的吸收与转运.本试验通过重叠延伸PCR技术对氨基酸通透酶基因进行单碱基定点突变,以便为今后研究植物对外源氮的吸收与利用率奠定基础.本研究根据Tair数据库中拟南芥AtAAP1基因序列,利用Primer Premie...     

解析近期鉴定的基因组及转录组中的核苷酸变异

哺乳动物基因组信息能够比核苷酸序列提供更多的信息。每个成年人的身体包括大于200个截然不同的细胞型,尽管这些细胞型在形态和作用上有显著差异,但是他们具有相同的基因组序列。表观遗传修饰在这种多效性中起着重要的作用。核苷酸变异,特别是那些与表观遗传功能相关的变异,能够提供比从简单的基因组序列中得到的更多关键的调控信息,而这些变异也定义了高等生物中的细胞状态。近期,芝加哥大学生物物理动态研究所及北京大学合成与功能生物分子中心     

鸡滑液囊支原体对常用抗菌药的耐药性研究

为研究常用抗菌药对滑液囊支原体的敏感性及耐药基因的流行分布,试验使用微量肉汤微稀释法确定了截短侧耳素类、大环内酯类、氟喹诺酮类药物对21株鸡滑液囊支原体临床分离株的最小抑菌浓度,并且对相关耐药基因进行探讨.结果显示:1株分离株对截短侧耳素类抗生素耐药(4.76％),7株对泰乐菌素耐药(33.3％),5株对替米考星耐药(...     

欧拉藏绵羊MSTN基因单碱基编辑体系的建立

肌肉生长抑制素（Myostatin,MSTN）基因突变时会导致肌纤维增粗,肌肉细胞增多,表现出双肌性状。为敲除欧拉藏绵羊MSTN基因以获得产肉性状更优的欧拉藏绵羊,利用胞嘧啶碱基编辑系统（CBE）在欧拉藏绵羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子。在MSTN基因3个外显子区域上各设计1条sgRNA,分别连接至pEF1a-BE4max-NG-mU6-gRNA-blast质粒并转染欧拉藏绵羊耳成纤维细胞,通过Sanger测序和T-A克隆检测,成功筛选出1条靶向外显子I的符合预期的sgRNA,编辑效率20%。本研究成功通过单碱基编辑技术在欧拉藏绵羊耳成纤维细胞MSTN基因编码区进行定点编辑,为通过分子育种培育产肉性状更佳的欧拉藏绵羊新品种奠定基础。     

5-甲基胞嘧啶到5-羟甲基胞嘧啶的转变过程参与小鼠雄原核的DNA主动去甲基化

利用5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,5mC）和5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethylcytosine,5-hrnC）特异性抗体对小鼠原核时期胚胎进行免疫荧光染色。同时使用荧光定量PCR方法检测Tet（Ten eleven translocation）基因在小鼠早期胚胎中的表达。免疫荧光染色结果显示早期原核阶段（PN1到PN3）,雄原核中5mC的含量逐渐减少,而5hmC的含量逐渐增加。但是雌原核中5mC和5hmC的含量基本不变。在原核后期阶段（PN4到PN5）5hmC主要存在于雄原核中。荧光定量结果显示在小鼠MⅡ卵母细胞和植入前胚胎中Tet 1和Tet 2基因表达量较低,但是Tet 3在卵母细胞和原核时期表达量较高,随着胚胎的发育其表达量逐渐降低。结果表明,在小鼠原核时期阶段5mC到5hmC的转变过程主要是由TET3蛋白催化的,并且此过程参与小鼠雄原核的DNA主动去甲基化。     

ALS抑制剂类除草剂抗性水稻功能标记的开发与验证

【目的】培育具有乙酰乳酸合酶(ALS)抑制剂类除草剂抗性的品种是防治水稻直播田杂草危害最经济、有效的途径之一,而利用分子标记辅助选择有助于提高其品种选择效率。【方法】在明确除草剂抗性突变体黄华占M-1 ALS基因编码区碱基差异的基础上,利用四引物扩增受阻突变体系PCR(Tetra-primer ARMS-PCR)技术,设计引物对不同品种(品系)和淮稻5号/黄华占M-1的F₂群体进行基因型检测,并结合除草剂的田间试验对标记的准确性进行验证。【结果】ALS基因编码区序列比对分析表明,尽管籼、粳稻之间具有多处差异碱基,但只有第1642和1643碱基TG到AT的变异能导致位于高度保守域的第548位编码氨基酸由色氨酸突变为甲硫氨酸,进而使水稻产生对ALS抑制剂类除草剂的抗性。依据PCR扩增产物的电泳带型,可以准确区分出3种不同的基因型,其基因型与苗期除草剂抗性的表型完全一致。【结论】利用Tetra-primer ARMS-PCR技术,可以实现对两个连续变异碱基位点基因型的快速检测,从而加快ALS抑制剂类除草剂抗性水稻品种的选育进程。     

单碱基编辑技术在动物中的应用

近年发展起来的人工核酸酶技术可引起特定位点的DNA双链断裂,断裂后通过同源重组修复机制使精准单碱基编辑成为可能。基于CRISPR/Cas9将Cas9n与胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶融合而开发出的单碱基编辑系统可进一步提高单碱基编辑的效率和精确度,在不造成DNA双链断裂的情况下实现精准单碱基编辑。对动物进行单碱基编辑不仅有望提高其生产性能,而且能为人类疾病研究作出重要贡献。文章回顾了单碱基编辑系统的发展历程,重点介绍了单碱基编辑系统在动物中的应用,并对单碱基编辑系统在动物中的应用前景进行了展望,以期为动物基因编辑技术的研发和应用提供理论依据和应用案例。     

在Excel表中进行多元方差分析

应用函数编辑器和简单的复制、粘贴功能即可在Excel表中实现较为复杂的多元方差分析,可用到的命令有求和命令“SUM”,计数器命令“COUNT”,求平均值命令“AVERAGE”,对应数据相乘的积的求和命令“SUMPRODUCT”,矩阵相乘命令“MMULT”以及求解矩阵的行列式的值的命令“MDETERM”。并给出了一个在Excel表中进行双因素不等重复处理的多元方差分析和多重比较的例子。     

基于ArcGIS的土地利用类型符号库的设计与实现

本设计以广西龙滩水库地类符号库的建立为例,论述了其在ArcGIS环境下的设计方法,并分别讨论了点状符号、线状符号和面状符号的实现方式。     

鹿、牛基因组不同区域的微小变异研究

本研究借助鹿和牛基因组序列,通过同源序列比较的方法研究远缘物种基因组不同区域的微小变异,包括单碱基突变、小片段插入和删除.研究结果验证了基因组功能区的点突变和删除变异相对非功能区是保守的普遍性结论.点突变变异与删除变异在鹿、牛基因组不同区域上表现强的正相关性.比较近缘物种人、黑猩猩基因组点突变变异数据,表明牛、鹿基因组的功能区和非功能区突变速率各自保持大致恒定,符合分子钟理论