新生山羊肾小管上皮细胞的原代培养与鉴定

【目的】建立新生山羊肾小管上皮细胞(Renal tubular epithelial cell,RTECs)的分离培养方法。【方法】采集刚出生未哺乳健康山羊的肾脏,分别采用胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅳ消化法分离培养RTECs,选择孔径0.15 mm的筛网对RTECs进行纯化,观察各组RTECs的生长情况;对分离的RTECs进行免疫组化和碱性磷酸酶染色鉴定,并进行透射电镜观察;用流式细胞仪检测RTECs的增殖周期和凋亡情况。【结果】胶原酶Ⅳ对RTECs的消化效果优于胶原酶Ⅰ,所得的细胞团块多,纯度高,细胞生长快,经孔径0.15 mm的筛网过滤后,RTECs的纯度达95%以上,并可连续传至第12代。分离获得的细胞经免疫组化法和碱性磷酸酶染色法鉴定呈阳性;透射电镜观察显示,细胞表面有微绒毛和桥粒连接。用流式细胞仪检测的结果显示,第4代新生山羊RTECs中G1期和S期细胞分别占细胞总数的25.01%和74.99%,G2/G1为1.97%,第10代细胞中G1期细胞和S期细胞均占50.00%,G2/G1为1.88%;第4代细胞的早期凋亡率在0.32%左右,而第10代可达3.7%,远高于第4代细胞。【结论】建立了增殖快、细胞活力高的山羊RTECs分离培养方法。     

鸡肾病综合征及其防治措施

鸡肾病综合征是由多种病因引起的肾脏机能障碍的总称,包括肾结石、肾炎、痛风症、输尿管结石和尿毒症等。主要表现为肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管出现尿酸盐沉积,严重者引起肾结石和内脏型、关节型痛风。患鸡生长受阻,生产性能降低,还常出现大量死亡。近年来,该病已成为养殖生产中不可忽视的重大疾病之一,在集约化饲养及散养禽场中,发生率呈现不断攀升趋势,常常导致鸡群发生较高的死亡率,给养鸡业造成了严重的经济损失。     

低氧诱导因子-1α对牦牛肾小管上皮细胞上皮-间质转化的影响

本研究旨在探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对牦牛肾小管上皮细胞上皮-间质转化（EMT）的影响。首先对牦牛肾小管上皮细胞进行培养鉴定,并选取第三代细胞对其分别进行药物处理（DMOG组）和不做药物处理（对照组）,检测EMT相关基因在mRNA和蛋白水平的表达变化,并观察细胞形态变化。结果表明：使用Ⅰ+Ⅱ型胶原酶可以更好地获得肾小管上皮细胞;免疫荧光结果细胞CK18表达呈阳性,Vimentin和CD31呈阴性表达;qRT-PCR和Western blot结果表明,DMOG组中的HIF-1α,TGF-β1,α-SMA在mRNA和蛋白水平均较对照组有极显著增加（P<0.01）,而E-cadherin的表达显著降低（P<0.05）;经药物干预后,细胞形态由铺路石样转变为长梭形,经鉴定长梭形细胞为间质细胞。本研究成功建立了牦牛肾小管上皮细胞的分离培养体系,并发现HIF-1α表达上调可以促进牦牛肾小管上皮细胞上皮-间质转化。     

灯盏花乙素(Scu)对猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)细胞热休克蛋白72(HSP72)及凋亡相关基因表达的影响

灯盏花乙素(scutellarin,Scu)具有清热解毒、扩张心脑血管、改善微循环等作用。通过观察不同浓度Scu对猪肾小管上皮细胞(pig kidney proximal tubular,LLC-PK1)热休克蛋白72(heat shock protein72,HSP72)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cellymphoma/leukemia-2,Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)表达的影响,探讨灯盏花乙素提高细胞耐热性的可能机制。将培养的LLC-PK1细胞随机分为37℃空白对照(Ⅰ组),42℃单纯热应激1 h(Ⅱ组),以及分别用不同浓度(1×10-5、1×10-6和1×10-7mol/L)Scu处理并42℃热应激1 h组(分别为Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组),提取各组细胞总RNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HSP72、Bcl-2和Bax基因及蛋白的表达量。结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ组LLC-PK1细胞HSP72和Bax的mRNA及蛋白表达量显著升高(P0.05),Bcl-2/Bax mRNA和蛋白比值显著降低(P0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白表达量并无显著差异(P0.05)。与Ⅱ组相比,Ⅳ和Ⅴ组LLCPK1细胞HSP72 mRNA和蛋白的表达量均显著升高(P0.05),Ⅲ组无显著差异(P0.05);Ⅳ组细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均显著升高(P0.05),Ⅲ和Ⅳ组并无显著差异(P0.05);Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组Bax mRNA和蛋白表达量均显著降低(P0.05);Ⅳ和Ⅴ组Bcl-2/Bax蛋白比值显著升高(P0.05)。研究结果表明,热应激条件下Scu可诱导LLC-PK1细胞HSP72表达,提高Bcl-2/Bax比值。结果提示,Scu可增强细胞的抗热休克作用。本研究丰富了体外培养细胞热应激反应的理论,为在实践中增加细胞抗热休克能力提供了理论依据。     

铅和（或）镉对大鼠肾细胞的毒性损伤及硒的拮抗作用

为探讨铅和（或）镉的毒性机制及硒的拮抗作用,在大鼠肾细胞培养过程中添加不同浓度的铅、镉和硒,在显微镜下观察细胞形态,测定细胞凋亡率和细胞周期及上清液脂质过氧化指标。结果表明：（1）20μmol/L以上铅、镉单独染毒组细胞损伤严重,加硒后细胞的形态损伤有降低的趋势;（2）铅、镉单独和联合染毒组GSH-Px、SOD活性随染毒剂量的增加,呈逐渐下降趋势（P〈0.05）,而MDA含量和细胞凋亡率则呈升高趋势（P〈0.05）,具有明显的剂量-效应关系和剂量-时间关系;（3）在铅、镉单独和联合染毒组加硒,脂质过氧化指标呈下降趋势（P〈0.05）,说明硒对铅、镉及其联合暴露所致的脂质过氧化损伤有一定的保护作用（P〈0.05）。     

连翘酯苷诱生干扰素-γ对AAⅠ诱导的RTECs转分化的影响

体外培养小鼠RTECs,将其随机分为6组,CCK-8法测连翘脂苷对RTECs的增殖率及存活率的影响,ELISA检测转化生长因子β1（TGF-β1）和干扰素-γ的含量,RT-PCR和Western blot检测CK18和Smad7等相关因子的表达变化。结果显示连翘酯苷质量浓度为160mg/L以下对RTECs无毒性,且诱生干扰素2.392μg/L;用药E组与模型B组比较TGF-β1表达显著下降（P〈0.01）;用药组与模型组相比Smad7mRNA极显著高表达（P〈0.01）、CK18mRNA显著高表达（P〈0.05）,而vimentin、α-SMA mRNA抑制表达（P〈0.01）;Western blot结果表明上调了Smad7的表达量。试验表明连翘脂苷可以提高Smad7的表达量,阻止Smad2/Smad3磷酸化,抑制TGF-β1/Smads信号通路,有效改善AAI诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

鸡维生素D缺乏症的防治

维生素D的主要作用是促进肠粘膜对钙、磷的吸收,增加其在血液中的含量,同时具有抑制甲状旁腺,增加肾小管对磷的再吸收。因此,维生素D是调节鸡体钙、磷代谢的重要因素之一。1.病因维生素D不足或缺乏,在一定程度上与日粮中钙、磷含量有关。当日粮中维生素D含量不足或鸡本身患有胃     

肾型传染性支气管炎防制误区与对策

近年来,以肾脏肿大、苍白、肾小管充满尿酸盐的"花斑肾"为主要病理变化的肾型传染性支气管炎(以下称肾型传支)流行比较广泛,蛋鸡育雏中后期和肉鸡群出栏之前一段时间内发病和死亡严重,造成较大损失,因此该病受到了饲养者普遍关注.本文就该病的防制误区与对策开展讨论,以期达到提高中小型饲养场(户)对肾型传支的防控能力.     

鸭球虫病的防治

1病原据记载,鸭球虫病约有18种之多,其中有2种寄生于肾小管上皮细胞内,其余16个寄生于肠道粘膜上皮细胞内。鸭球虫属孢虫纲,球虫目,艾美耳科。其中危害我国家鸭的主要致病球虫有两种:毁灭泰泽球虫:寄生于小肠粘膜上皮细胞     

IL-18对人近端肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨白细胞介素18(IL-18)对肾小管上皮细胞增殖及凋亡的作用以进一步明确其在慢性肾病进展中的作用。方法在体外实验中应用不同质量浓度(0.1、1、10、100 mg/L)的IL-18分别处理人类近端肾小管上皮细胞株(HK-2)24、36、48、72h,应用改良的MTT法检测细胞增殖,应用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡。结果同一质量浓度不同作用时间,随时间的延长其光吸收值(A值)增加,两两比较差异有统计学意义(均P<0.05);同一作用时间不同质量浓度时的A值,各组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);IL-18作用24、36、48h随时间增加凋亡百分数与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),IL-18作用72h细胞凋亡明显增多,且随质量浓度增加而增加,凋亡百分数与对照组相比差异有统计学义(P<0.01)。结论慢性肾病状态下IL-18可能具有促进肾小管萎缩以至丢失的作用。