新疆部分地区致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性测定

为确定新疆石河子、沙湾、阿克苏、博乐4个地区6个规模化牛场初生犊牛腹泻死亡与大肠杆菌的相关性,采集6个规模化牛场因腹泻死亡犊牛的肠系膜淋巴结等病料进行细菌分离鉴定。结果:从60份样品中分离并经生化鉴定获得53株呈β溶血的大肠杆菌;49株携带K99、F41菌毛基因及STa肠毒素基因;10株不同地区来源代表株均能迅速致死小鼠;多数分离株对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢拉啶、庆大霉素、环丙沙星等耐药,对阿米卡星、头孢西丁等敏感。研究表明,携带K99、F41菌毛及STa的产毒性大肠杆菌是引起这6个牛场初生犊牛腹泻并造成死亡的主要病原之一。     

国内外猪源产肠毒素大肠杆菌疫苗研究进展

仔猪腹泻是全球规模化猪场最常见的疾病之一,给养猪业带来了巨大的损失。产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起仔猪腹泻的主要病原菌,黏附素和肠毒素是其重要的致病因子,ETEC通过黏附素定植于小肠上皮细胞,在增殖过程中不断产生肠毒素,引起大量水和电解质进入肠腔,导致仔猪腹泻。目前,疫苗免疫是预防ETEC最有效的方法,然而许多商品化大肠杆菌疫苗的临床免疫效果不佳,且地域局限性明显。因此,研制安全、高效、广谱的ETEC疫苗对养猪业具有重要意义。近年来,许多新型试验性ETEC疫苗被相继报道,如ETEC菌毛黏附素和肠毒素疫苗;一些新开发的疫苗,如亚单位疫苗、菌影疫苗、植物载体疫苗和囊泡疫苗等,具有不同的优势,在不同的动物试验中均表现出良好的免疫保护效果。文章简述了国内外学者在ETEC疫苗领域的研究进展,对猪源ETEC各类疫苗的优劣及应用研究情况进行了综述,以期为今后猪源ETEC疫苗的研究提供参考。     

黄白散对鸡耐热肠毒素大肠杆菌病的疗效观察及其机理研究

目前,我国鸡大肠杆菌耐药性严重而复杂[1],几乎对所有的抗菌药物都已经产生了耐药性。鸡大肠杆菌耐药性产生的速度极快,与我国目前的鸡养殖环境、养殖方式和技术水平密切相关。研究人员认为,耐热肠毒素大肠杆菌(ST)可激活小肠上皮细胞内鸟苷酸环化酶(GC),使细胞内cGMP浓度升高,影响电解质分泌而引起腹泻[2-3],这也是幼畜腹泻的主要原因。因此,研究抗耐热肠毒素大肠杆菌的药物是非常必要的。     

L-茶氨酸对产肠毒素大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肠道的保护作用研究

以SPF级Balb/c雌性小鼠为实验动物,对其适应性饲养3 d后连续30 d灌喂不同剂量L-茶氨酸,然后腹腔注射产肠毒素大肠杆菌E44813诱导免疫应激,5 h后取样,分析研究了L-茶氨酸对小鼠体重,回肠组织谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(Homogenate catalase,CAT)与诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)活性,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、空肠组织病理学变化,以及血清肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间粘附分子1(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和白介素1β(Interleukin-1β,IL~(-1)β)表达量的影响,以探明L-茶氨酸对产肠毒素大肠杆菌免疫应激小鼠肠道的保护作用。结果表明,各剂量L-茶氨酸均能显著增加小鼠体重,可减轻产肠毒素大肠杆菌E44813引起的肠道组织病变程度,升高回肠组织GSH-Px和CAT酶活性,降低MDA含量和i NOS酶活性,在不同程度上抑制血清TNF-α、IL~(-1)β和ICAM-1的表达量。说明L-茶氨酸可通过抑制炎性细胞因子表达水平、降低脂质过氧化程度和提高抗氧化能力来维护肠道组织形态与结构的完整性,并达到保护肠道的作用。     

产肠毒素大肠杆菌毒力变化的原因简述

产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli,ETEC)感染是幼龄动物(主要是猪和小牛)大肠杆菌病的最常见型,是引起发展中国家旅行者和儿童腹泻的重要原因。ETEC的主要毒力属性是黏附素和肠毒素,它们主要受大型质粒的调节。研究表明,几乎所有的ETEC细菌都可以通过它们的蛋白表面附属物(菌毛、菌毛)或通过非膜蛋白黏附在动物小肠上皮的受体上,而且不引起显著的形态学改变。此外,它们可分泌蛋白毒素(肠毒素),以减少营养吸收以及增加小肠上皮细胞液体和电解质的分泌。读者可参考较早的更为广泛的综述(Nagy和Fekete,1999)了解有关动物ETEC感染和腹泻的流行病学、发病机制、诊断和预防的细节。本文旨在总结相关基本知识,并着重介绍兽医学中ETEC感染的最新研究进展和最实际的研究课题。最近,人们开始关注ETEC新毒力因子和新遗传载体的研究。我们还将讨论动物ETEC腹泻的诊断和预防方面的技术。     

在断奶仔猪中蛋白和免疫的相互作用

蛋白质是影响经济增长,影响猪群整体健康的一个关键因素,并影响断奶仔猪的免疫状态。一些研究调查表明低蛋白水平对仔猪肠道健康的影响会起到有益的作用。众所周知,仔猪在断奶时特别容易受到疾病的威胁。断奶后腹泻是由产肠毒素大肠杆菌引起的,当其找到有利时机时会突然发生变化,这些有利的诱导因素包括:物理环境(从母体分离);营养(替代奶,提供了一个强有力的免疫保护,     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位与产气荚膜梭菌β1、β2毒素融合基因的构建及表达

为了构建含大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与产气荚膜梭菌β1、β2毒素融合基因的表达菌株,试验将亚克隆LTB基因融合到β2-β1毒素基因的上游,构建了pET30a-LTB-β2-β1原核表达载体,经IPTG诱导表达,对其表达产物进行SDS-PAGE检测和Western-blot分析。结果表明:重组菌株可以表达LTB-β2-β1融合蛋白,且该融合蛋白可以被相应的抗体识别。     

ETEC K88菌毛蛋白抗体PPA-ELISA检测方法的建立

以纯化的大肠埃希菌K88菌毛蛋白为包被抗原,建立了检测大肠埃希菌K88IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件,即最佳抗原包被浓度为1μg/mL,兔抗体稀释倍数为1∶10,猪抗体稀释倍数为1∶100,确定最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5h,血清反应时间0.5h,二抗反应时间1h,底物室温反应时间为15min,阴阳性临界值兔血清为0.33、猪血清为0.45。证实该间接PPA-ELISA方法特异性强、重复性好、敏感度高,可以作为疫苗效力检验和流行病学调查的参考方法。     

大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基K63突变体表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

采用PCR方法从产肠毒素大肠杆菌(ETEC)44815菌株基因组中扩增不耐热肠毒素A亚基(LTA)编码基因,并将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因插入到含有人CD5信号肽序列的pcDNACD5sp真核表达载体中,构建成pcDNACD5sp/LTA分泌性真核表达载体,然后采用定点突变方法将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基第63位的丝氨酸改变为赖氨酸,构建成pcDNACD5sp/LTAK63突变体,经磷酸钙介导将pcDNACD5sp/LTAK63质粒转染HEK293T细胞进行表达.结果表明:试验克隆的大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因与GenBank中大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因序列相比,碱基序列、氨基酸序列同源性均达99%;表达产物经Western-blot检测,结果说明构建的含有人CD5信号肽的LTAK63基因能够在真核细胞中进行分泌性表达.     

猪水肿病

猪水肿病是由致病性溶血性产肠毒素大肠杆菌引起的一种断奶仔猪多发的肠毒血症。以胃壁、结肠系膜、眼睑和全身水肿为主要特征。本病呈地方性流行,发病率为5%～15%,病死率为90%以上。