一种高效提取棉花细胞核的技术

[目的]研究一种高效提取棉花细胞核的技术,为棉花大片段基因组文库的构建和全基因组测序提供技术。支持。[方法]采用“刀切法”,在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利刀片切割发育1周的棉花黄化子叶以释放细胞核,并经过100、50、和30μm的膜过滤后离心收集细胞核,同时选取棉花幼嫩叶片和黄化处理时间不同的子叶分别用研磨法和刀切法作对照。[结果]刀切法所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达100％。[结论]建立了一种简单、高效快捷、无毒害的棉花细胞核提取技术。     

分离缓冲液对水稻细胞核悬液DNA分辨率效应的比较

为制备高纯度水稻细胞核悬液供FACSCalibur流式细胞仪使用,选用6种细胞核分离缓冲液制备样品,对其DNA分辨率效果进行比较,Otto buffers和Marie’s nuclearisolation buffer表现分辨率较高,细胞G0/1峰产生的变异系数较低(CV分别为3.57%和3.41%);其中Otto buffers的组分较Marie’s nuclear isolation buffer简单、成本低,且能在正常室温条件下分析和保存。虽然在细胞核悬液中Tris-MgCl2buffer显示最低的CV值(3.19%),但产生较多的背景碎片。而其余3种缓冲液(Lysis buffer LB01,Galbraith’s buffer和Arumuganathan’sbuffer)的变异系数均较高(分别为4.75%,6.28%和6.73%)。结果表明采用Otto buffers分离缓冲液制备细胞核悬浮液,能实现苗期对水稻花粉植株的不同倍性(单倍体、二倍体、三倍体等)快速鉴定。     

供体细胞来源及预处理对牛体细胞核移植效率的影响

以牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体细胞,比较了不同同步化诱导方式(血清饥饿法与接触抑制法)、供体细胞冷冻与否、供体动物性别与年龄等因素对体细胞核移植效率的影响。结果表明,接触抑制法处理的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于饥饿法(P<0.05);未冷冻的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于冷冻供体细胞(P<0.05);成年母牛供体的囊胚率显著高于成年公牛(P<0.05);不同年龄供体细胞的核移植胚囊胚率差异不显著(P>0.05)。试验表明,以接触抑制法诱导未冷冻成年母牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体,有利于核移植胚囊胚的发育。     

线粒体损伤对山羊-绵羊异种核移植胚早期发育的影响

【目的】研究线粒体损伤对核移植胚早期发育的影响。【方法】用经光敏化染料罗丹明-123损伤的山羊胎儿成纤维细胞和绵羊卵母细胞,构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,于38.5℃、相对湿度100%、体积分数5%CO2条件下培养,统计其2-细胞期、8-细胞期和囊胚期的发育率。【结果】山羊核供体线粒体损伤并不影响囊胚期前核移植胚的发育率(P0.05);绵羊卵母细胞线粒体损伤,使核移植胚2-细胞期的发育率下降(P0.05),但不影响8-细胞期和囊胚期的发育率(P0.05);核供体和卵母细胞线粒体都损伤的核移植胚发育率的变化规律与卵胞质受体线粒体损伤的核移植胚一致。【结论】在异种核移植胚的早期发育中,核供体线粒体损伤不影响核移植胚的发育,但卵母细胞受体线粒体损伤明显影响核移植胚的发育率。     

楚油杂79

审定编号:国审油2011016品种名称:楚油杂79选育单位:湖北荆楚种业股份有限公司品种来源:楚07AB×楚-09特征特性:甘蓝型半冬性细胞核雄性不育两系杂交种。幼苗半直立,子叶肾形,叶色绿,有蜡粉,叶片较大,叶缘锯齿状,裂叶2～3对。花瓣黄色、呈侧叠状。种子褐色,近圆形。全生育期平均219天,比对照中油杂2号晚熟1天。株高163.7cm,一次有效分枝数6.7个,单株有效角果数258.5个,每角粒数19.7粒,千粒重     

胚胎移植时机对牛体细胞克隆胚胎妊娠率的影响

以活体取卵OUP来源的牛卵母细胞为受体胞质,以Holstein奶牛的牛耳成纤维细胞作为供核细胞进行体细胞克隆．并将发育7d的克隆囊胚和体内胚分别及体外胚进行移植,观察移植时机对受孕率的影响。依据代孕牛排卵后天数的不同分为3个实验组,组1：排卵后5-6d（不含6d）;组2：排卵后6—7d;组3：排卵后7～8d（不含7d）。结果显示：对于体外胚胎而言,第2组的受孕率高于第1组（P〉0．05）,第3组的受孕率最低（Pt0．05）,且120d的受孕率为0。与此相反,对于体内胚胎。第3组的受孕率高于其他2组。通过实验可以证明对于7d的体外胚胎选择在代孕牛排卵后6—7d移植可以得到较高的受孕率：而对于体内胚胎而言则应选择在受体牛排卵后7—8d移植,可得到较高的妊娠率。     

沼液浸种增强早稻秧苗耐冷效应─—叶肉细胞超微结构动态观察

经沼液浸种的早稻秧苗比对照组秧苗，具有较强的耐冷性，通过电镜对叶肉细胞超微结构动态观察证实，在低温（５°／５℃）下，叶绿体结构和细胞核结构，随着冷害天数的延长，伤害在不断加重，叶绿体结构会出现空洞，基质片断裂，直至崩溃。细胞核染色体凝集，核膜破裂，核内容物丧失等现象出现。而经沼液浸种的秧苗伤害程度有较明显的减轻。     

活体采卵时间间隔对牛克隆胚胎发育的影响

采用活体穿刺技术（ovum pick up,OPU）,分别间隔3／4（1周2次）、5、7、10、14d对同一批荷斯坦奶牛进行穿刺采卵,根据优势卵泡直径和所有卵丘细胞-卵母细胞复合体的状态确定采卵时卵泡所处的发育阶段,从而确定卵泡波的发育动态变化。并以间隔不同时间采卵获得的卵母细胞成熟后进行体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）制备克隆牛胚胎。重构胚体内培养7d后,通过比较克隆囊胚的发育率判定卵母细胞质量的差异,从而确定最佳的采卵时间间隔。结果显示：①穿刺采集所有直径超过3min的卵泡后,可起始1个新卵泡波,大约5d后从属卵泡开始进入凋亡阶段,7d后进入晚期凋亡阶段,第7～10d又起始1个新的卵泡波,第14d时第2个卵泡波中的从属卵泡起始凋亡。②间隔不同时间组克隆囊胚发育率存在差异,间隔3／4d（1周2次）为23．1％,间隔5d组为15．0％,间隔7d组为10．9％,间隔10d组为4．9％,间隔14d组为29．0％。结果显示：间隔不同的时间采卵,卵泡所处的发育状态存在差异。并对卵母细胞质量具有显著的影响。     

由Cu(Ⅱ)促进的肌红蛋白选择性水解切割反应

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,研究了中性条件下[CuL(Cl)](C lO4)与马心肌红蛋白的选择性水解切割反应,L为2-[二(2-氨乙酸)氨基]乙醇.结果表明,[CuL(Cl)](ClO4)对马心肌红蛋白显示出较高的切割选择性和切割效率,且切割效率与浓度、介质条件、温度、温育时间有一定的相关性.     

体细胞核移植的不完全核重编程与克隆动物的发育异常

体细胞核完全的重编程是成功生产克隆动物的先决条件,体细胞核的不完全重编程是克隆动物发育异常的主要原因。本文主要通过对DNA甲基化、组蛋白乙酰化、端粒、X染色体失活和印记基因表达几个方面的论述,来探讨造成克隆动物发育异常的原因。