用改进的方法提纯禽脑脊髓炎病毒

将AEV VR株种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚复壮,然后取复壮的病毒作为种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚扩大培养病毒,继续孵化至18日龄,收取病变明显的鸡胚脑组织、胰腺和小肠,充分研磨后经差速离心和CsC l密度梯度离心提纯AEV,取经密度梯度离心后的样品进行电镜观察其纯度,并经脑内接种1日龄SPF雏鸡观察其致病情况及其病理变化,结果证明获得了纯化的AEV。     

抗鸡传染性腺胃炎酶标抗体的制备和应用

在前期从患病鸡腺胃内分离到呼肠孤病毒的基础上，以该病毒为免疫原对兔进行免疫制备高免血清，分离纯化IgG，进行辣根过氧化物酶（HRP）标记，并用ELISA双抗体夹心法对山东省青岛、枣庄、泰安等地区采集的传染性腺胃炎的腺胃样品进行检测，结果表明制备的抗鸡传染性腺胃炎呼肠孤病毒的酶标抗体检测传染性腺胃炎特异性强、灵敏度高、较简便。     

猪白细胞介素-2重组蛋白的原核表达及其生物学活性分析

用已构建好的重组表达载体pET30-IL2转化BL-21E.coli,挑取单克隆,利用诱导剂IPTG诱导表达;通过改变诱导剂的浓度、诱导的时间来摸索最佳诱导条件,在最佳诱导条件下大量表达,并利用镍层析柱纯化重组蛋白,用MTS法测定其生物学活性。结果表明,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出25ku的融合蛋白,表达产物主要以包涵体的形式存在,最佳的诱导剂浓度为0.1mM,最佳的诱导时间为4h;对表达产物的包涵体处理后,用镍琼脂糖凝胶FF纯化,所得蛋白的纯度约在90%以上。通过透析除去部分尿素,复性后在体外利用MTS法检测其生物学特性,结果表明其仍具有较好的生物学活性,这为进一步大量制备和研究猪IL-2重组蛋白奠定了基础。     

红叶石楠提取类胡萝卜素的工艺条件研究

在单因素试验基础上,采用正交试验优化红叶石楠绿叶中类胡萝卜素的提取工艺条件,并用柱层析分离纯化粗提液中的类胡萝卜素。结果表明,在40℃下以丙酮∶乙醇=1∶1为提取剂,料液比1∶10,浸提时间1.5 h,类胡萝卜素含量可达51.26μg/g。该类胡萝卜素粗提液经过柱层析法初步分离纯化,纯化倍数可达1.41。     

诱导Paracin1.7生成的刺激因子的分离与纯化

旨在分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中能够诱导细菌素Paracin1.7分泌的刺激因子,并探明其对副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei) HD1.7细菌素生成量及群体感应相关基因luxS表达的影响。本研究通过60%硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow弱阳离子交换柱层析中度纯化及Superdex 75凝胶层析精度纯化,将获得的层析分离物与L. paracasei HD1.7共培养,检测共培养发酵液的抑菌活性及luxS基因的转录水平,并用SDS-PAGE与Native-PAGE检测分离物质。结果表明L. paracasei HD1.7抑菌活性为126.68%;luxS基因上调表达,为对照菌株的2.43倍;刺激因子的表观分子量约为30 kDa。本研究利用三步法初步分离纯化出诱导Paracin1.7生成的刺激因子,明确该刺激因子可以启动种间群体感应相关基因luxS,为L. paracasei HD1.7的群体感应研究奠定了理论和技术基础。     

大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。     

葛根素的大孔树脂纯化及抗氧化性研究

主要研究了大孔树脂纯化葛根素工艺及抑菌性质。以葛根素吸附率为指标,通过正交试验确定大孔树脂纯化葛根素最佳工艺条件,即上样液浓度0.8 g·m L-1,吸附流速9 BV·h-1,乙醇浓度80%,洗脱流速4 BV·h-1。同时试验结果表明,葛根素对羟自由基具有较强清除能力,因此,葛根素具有较好的抗氧化活性。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇提取、纯化及含量检测

本试验通过提取和纯化方法的优化,旨在获得高纯度的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。首先将禾谷镰刀菌孢子液接种于玉米培养基,于27℃30%湿度的条件下培养25d,收集产毒培养基,制成毒素粗提液。经过层析柱2次洗脱,分段收集洗脱液,用薄层色谱法(TLC)确定含DON的洗脱液,合并洗脱液,运用多重结晶法进行纯化,获得DON的纯品,高效液相色谱法(HPLC)进行分析确认。采用该培养方法,每千克玉米培养基可产生DON 56.65 mg,纯化后可得到DON 29.5mg,纯度达到98.1%;HPLC检测条件为:Waters C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(16∶84),流速0.8mL/min,紫外波长218nm,色谱柱柱温30℃;本方法加标回收率为86.9%~100.6%,日内相对标准偏差≤9.42%,日间相对标准偏差≤5.79%。本试验建立的DON提取与纯化方法简单,不需要任何特殊的试剂与设备,且该检测方法回收率高,准确度和精密度均能满足试验要求,为DON纯品的定量提供了技术支撑。     

关于制药新技术应用的分析

我国社会经济的快速发展促进了国内科学技术发展，医药行业更加重视制药的质量和效率。随着科技进步，许多先进的科学技术手段和设备层出不穷，为我国的制药行业带来了巨大的机遇，先进的科技是保障制药行业质量和安全的重要条件，也是社会经济快速发展必不可少的重要组成部分。在制药领域内使用最新的科技手段，不仅可以提高行业的制药效率，也可以从根本上提高药品的质量和安全。     

重组白细胞介素-2高效纯化方法建立

依次通过离子交换法、凝胶过滤法纯化重组白细胞介素-2(IL-2)粗品,利用SDS-PAGE电泳和hIL-2 Elisa kit检测纯化后重组IL-2的纯度和浓度。结果表明,纯化后的重组IL-2纯度和浓度高。本纯化方法简单、稳定、纯化效果好,可为重组IL-2的生产工艺提供技术支持和依据。