两种虎红平板凝集试验检测羊布鲁氏菌病效果比较

为比较常规和改良虎红平板凝集试验（RBPT）的羊布鲁氏菌病检测效果,对239份免疫、非免疫场绵羊和阴性绵羊血清进行检测,并通过竞争ELISA试验（cELISA）和试管凝集试验（SAT）进行确诊。结果显示：常规RBPT检测非免疫血清的敏感性为68.85%,特异性为93.55%,与cELISA的符合率为77.17%;检测免疫羊血清的敏感性为75.81%,特异性为73.33%,与cELISA的符合率为75.00%。改良RBPT检测非免疫羊血清的敏感性为91.80%,特异性为70.97%,与cELISA的符合率为84.78%;检测免疫羊血清的敏感性为98.39%,特异性为10%,与cELISA的符合率为69.57%。两种RBPT和cELISA的阴性血清检测结果全部为阴性,符合率为100%。结果表明：改良RBPT法的敏感性要高于常规RBPT法,可以在阳性羊群中筛选到更多抗体效价较低的早期感染动物。但其特异性有一定程度的降低,必须结合SAT、cELISA等特异性高的方法进行确诊。本研究为羊布鲁氏菌病检测方法的选择提供了参考。     

鹿性别控制技术研究成功

由辽宁省抚顺市农业科学研究院和中国农科院特产所、塔里木大学联手开发的鹿性别控制技术目前确认获得成功，接受试验的母鹿顺利产下雄、雌仔鹿各5只，性别符合率达100％，各项指标正常。     

弓形虫直接凝集试验改良法的研究

用弓形虫直接凝集试验改良法（ＭＤＡＴ）、染色试验（ＤＴ）和两种间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）平行检测了国内外的７１份人血清，结果表明ＭＤＡＴ与其它试验符合率达９１．８～９６．０％；同时显示有较高的敏感性和特异性。用ＷＨＯ国际生物标准化实验室的标准血清定量测得ＭＤＡＴ的灵敏度为０．０９ＩＵ／ｍｌ，接近于改良前方法和ＤＴ的灵敏度，高于国外同类试剂盒的灵敏度。作者认为本ＭＤＡＴ具有在基层单位推广和应用的潜在价值。     

两种奶牛结核病检测方法与PPD检测符合率比较

对新疆某规模化奶牛场的2 106头奶牛用PPD进行普检,共检出结核病阳性牛26头;随机采集20头阴性牛和26头阳性牛抗凝血和全血,进行牛结核γ-干扰素ELISA试验和胶体金检测,然后将检测结果与PPD检测结果进行比对。结果显示:3种方法检测均为阳性的16份,均为阴性的10份,总符合率为57%。PPD和γ-干扰素ELISA相比,均为阳性的23份,阳性符合率为88%(23/26),均为阴性的11份,阴性符合率为55%(11/20);PPD和胶体金检测相比,均为阳性的19份,阳性符合率为73%(19/26),均为阴性的19份,阴性符合率为95%(19/20)。结果表明:3种检测方法的符合率较低;每种检测方法各有优缺点,γ-干扰素ELISA敏感性较高,而胶体金特异性较高。因此,在实际操作中应根据需要,合理选择相应检测方法。     

副结核分枝杆菌MAP0862、MAP1345基因的串联表达及其在间接ELISA中的初步应用

为探索副结核特异性蛋白MAP0862与MAP1345在牛副结核病血清学诊断中的作用,将通过串联表达获得的融合蛋白MAP0862-1345纯化定量后包被酶标板,经过对反应条件的优化,初步建立了基于融合蛋白MAP0862-1345的间接ELISA诊断方法。使用建立的ELISA方法对牛副结核病阳性血清、牛结核病阳性血清、牛布病阳性血清、卡介苗免疫牛血清、健康牛血清检测的结果表明其具有较好的特异性;使用该方法与IDEXX副结核病抗体检测试剂盒共同对300份临床血清样本检测,总符合率为92.7%。     

直接竞争ELISA法快速检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留

采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶（SD）与人血清白蛋白（HSA）相连制备了免疫抗原SD—HSA,与卵清白蛋白（OVA）相连制备了包被抗原SD—OVA,用过碘酸钠法将SD—OVA与辣根过氧化物酶（HRP）连接制备了酶标抗原（SD—OVA—HRP）。用SD—HSA免疫BALB／c小鼠,经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体,利用单抗建立了直接竞争ELISA方法。该方法具有好的特异性,在1—729ng／mL浓度范围标准曲线方程Y=12．05x＋2．2538,R^2=0．995,IC50为41．7ng／mL,在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为20、20、20、5、5μg/kg。在20μg／kg和100μg／kg水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋样品中添加,回收率为82．78％-104．6％。与高效液相色谱方法比较,二者的阳性符合率为81．3％,阴性符合率为83．3％,总符合率为88．9％;与同类英国RANDOX试剂盒比较,二者符合率为100％。     

犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用

本研究以纯化的犬瘟热病毒（CDV）重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDVELISA。确定最佳抗原包被量为0．167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1：100,其作用时间为45min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1：2000,作用时间为60min,S／P值≥0．208者判为阳性,S／P值≤0．16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15％,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97．1％。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

貉源致病性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物的耐药性及耐药基因的检测与分析

为了分析貉源致病性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性与耐药基因型之间的相关性,采用KB药敏纸片法和PCR法分别检测57株貉源致病性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性与耐药基因.结果表明,57株克雷伯菌对庆大霉素、链霉素、卡那霉素、阿米卡星、新霉素的耐药率分别为54.4％、49.1％、22.8％、8.8％和1...     

4种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一.世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类16种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一.由于长期贯彻预防为主的指导思想,坚持广泛接种猪瘟兔化弱毒疫苗的防治措施,该病在我国已经得到有效控制,大规模的暴发流行基本停止[1].2009年,一些猪场发生典型的猪瘟,给猪场造成了极大的经济损失[2],致使许多兽医工作者和养猪业主对我国猪瘟疫苗的免疫效果产生了怀疑,从而给我国猪瘟的防制工作带来新的问题.     

小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的表达与ELISA检测方法的建立

通过对下载的16株小反刍兽疫病毒（PPRV）N基因片段进行序列分析,合成了PPRV N基因。用NP1和NP2引物扩增。纯化的PPRV N基因在T4DNA连接酶的作用下,和PET32-a载体进行连接反应构建重组质粒pET-a-PPRV-N。经诱导表达和纯化后,得到了大量的PPRV N蛋白。用PPRV N蛋白制备免疫血清,经国际标准血清标化后作为参考阳性血清,同时以PPRV N蛋白为抗原建立间接ELISA（I-ELISA）方法。对山东省的467份羊血清检测,使用S/P（样品值/阳性值）平均值加3倍标准差的方法,计算出其临界点为0.28。应用间接ELISA和针对H蛋白的单抗为基础的C-ELISA检测来自于疫区的69份血清,结果两者的符合率为79.7%。