基于α_s-酪蛋白特异性的牛乳总蛋白质ELISA定量检测方法的建立

本研究旨在建立牛乳中总蛋白质的ELISA定量检测方法,并评价该方法在牛乳掺假辨识中的应用效果。首先用αs-酪蛋白标准品免疫新西兰白兔,制备αs-酪蛋白特异性抗血清,并建立αs-酪蛋白的间接ELISA检测方法,结果显示血清效价为1∶640,αs-酪蛋白检测的线性范围是25~600 ng/ml,R2=0.999 5,回收率是96.6%~105.2%。再应用乳成分分析仪,凯氏定氮法和所建立的ELISA法测定8份来源不同的原料乳中总蛋白和αs-酪蛋白含量,结果显示不同牛乳中总蛋白质含量在0.029 2~0.029 8 g/ml,αs-酪蛋白含量在0.008 4~0.009 2 g/ml,占牛乳总蛋白质的比例恒定,平均为0.3,并用该系数建立牛乳中总蛋白质的定量方法。最后对5份人为兑水稀释、添加尿素、BSA和三聚氰胺的模拟掺杂牛乳样品进行检测,测定结果表明基于αs-酪蛋白的ELISA方法比乳成分分析仪法和凯氏定氮法具有更高的灵敏性和特异性,含氮添加物对测定结果无显著影响(P0.05),更适合于作为原料乳及含乳产品中牛乳蛋白质的定量分析。     

牛β-酪蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

以牛β-酪蛋白标准品为免疫原,免疫健康的新西兰大白兔,制备了兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体。经亲和层析纯化后,用SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色检测抗体的纯度,经ELISA法测定β-酪蛋白抗体的效价为1∶1600。Western-blot分析发现,制备的抗体与β-酪蛋白可以发生特异性结合,表明成功制备了纯度较高和特异性较好的牛β-酪蛋白多克隆抗体,为乳腺生物反应器的研究提供了有效的工具。     

酪蛋白磷酸肽对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响

选用90头28日龄杜长大断奶仔猪,研究酪蛋白磷酸肽(CPPs)对其生长性能和免疫功能的影响.结果表明,酪蛋白磷酸肽对断奶仔猪生长有一定的促进作用,能提高仔猪的免疫功能.添加0.3%CPPs对仔猪日增重和料肉比的影响较明显,对血清免疫球蛋白IgA、IgG和外周血淋巴细胞增殖的影响显著(P<0.05).     

牛乳中酪蛋白胶束结构理论模型的研究进展

阐述了酪蛋白的胶束结构理论模型及其研究进展情况,还讨论了影响酪蛋白胶粒稳定性的因素以及酪蛋白胶束模型的建立在实际生产中的意义.     

酪蛋白酶解产物β-酪啡肽-7的 HPLC分析和阿片活性鉴定

利用建立的高效液相色谱(HPLC)定量分析法, 在酪蛋白2 h酶解液中检测到134.27 μg·mL-1的β-酪啡肽-7(β-CM-7); 其酶解消化液经葡聚糖凝胶柱层析收集物3、4组中也检测到β-CM-7, 含量分别为44.79和18.90 μg·mL-1;而1和2组中未检测到.细胞生物学鉴定结果表明 酪蛋白酶解液、柱层析收集的3、 4组均能抑制富含δ-阿片受体的神经杂交瘤细胞腺苷酸环化酶活性, 降低细胞内cAMP水平, 纳洛酮可逆转这种抑制作用, 证明有阿片活性. 1、 2组和酪蛋白本身无阿片作用. HPLC测定结果与细胞生物学鉴定结果相符, 证明所建立的HPLC方法可用于酪啡肽的定量分析.     

D101树脂固定中性蛋白酶的条件优化及酶学性质研究

【目的】提高中性蛋白酶的固定化效果,对D101树脂固定中性蛋白酶的条件进行优化并对固定化酶的酶学性质进行研究。【方法】以D101树脂吸附法固定中性蛋白酶,分别测定不同温度、时间和加酶量条件下固定化酶的固定化效果,并对固定化中性蛋白酶和游离中性蛋白酶的酶学性质进行比较研究。【结果】D101树脂固定中性蛋白酶的最佳固定条件为:加酶量150 U/g,温度40℃,固定时间120 min,此时固定化酶的酶活回收率最高(70%)。固定化中性蛋白酶和游离中性蛋白酶的最适温度分别为46和40℃,最适pH值分别为7.4和7.2,表观米氏常数Km分别为0.22和0.20 mg/mL,最大酶促反应速度Vmax分别为0.39和0.21 mL/min。【结论】以D101树脂固定中性蛋白酶后,固定化中性蛋白酶的活力、酶活回收率以及热稳定性和pH稳定性显著提高。     

哺乳期给母猪饲喂碘化酪蛋白对仔猪的影响

选用哺乳期杂交母猪54头，随机分4组，对照组饲喂基础饲粮，试验组在饲喂基础饲粮中添加200mg/kg碘化酪蛋白，为期31d，研究哺乳期母猪饲喂磺化酪蛋白对仔猪的影响。试验结果显示：初产、经产母猪的试验组仔猪分别与对照组相比，20日龄窝重分别提高11．72％（P＜0．05），6．79％（P＜0．01），断奶窝重分别提高2．95％和18．84％（P＜0．01），哺乳期乳活率分别提高1．595和11．9％（P＜0．01）。     

水牛乳β-酪蛋白基因多态性与消化性能及抗氧化性能的关联研究

本研究以水牛乳β-酪蛋白(β-CN)基因多态性分析结果为依据,从水牛乳中分离并纯化出具有活性的β-酪蛋白亚型.采用体外消化模型分析其在胃肠道中的消化性能;根据水解液的抗氧化活性来分析生物活性肽的释放.高效液相色谱法(HPLC)结果显示,水牛乳中β-CN有A和B两种等位基因.消化性能结果显示A等位基因更利于β-酪蛋白在肠...     

多个顺式作用元件调控t-PAcDNA乳腺定位表达

由牛 β-酪蛋白 ( β-Casein)启动子与大鼠乳清酸蛋白 ( WAP)启动子融合及串联构建成 2个组织纤溶酶原激活剂 ( t-PA) c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-βΔWAP-PA和 p SVL-WAPβ-PA。将这 2种表达质粒分别注入怀孕家兔乳腺导管中 ,溶圈试验结果显示 ,2种质粒均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 5天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 70 0 μg/ L和 50 0 μg/ L。本试验为进一步研究 t-PA基因乳腺定位表达调控和建立 t-PA乳腺生物反应器奠定了基础     

牛乳β-酪蛋自检测的ELISA方法

体外乳腺细胞培养是整体泌乳研究的有效补充,也在乳腺生物反应器的研究中发挥着重要作用。但乳腺细胞分离培养成功的标志不仅仅是细胞的形态特征及增殖特性,更重要的是细胞的生理功能及分化状态。卜酪蛋白为乳中所特有的蛋白质,其在乳中的含量仅次于ａ一马酪蛋白居第二位,故可用这种蛋白做为乳腺细胞分化功能的指标。（①闷ｐ出ｌｉｎｋａｌ;;ｍｌｎ～ｍｐ）方法是以胡作为标记物或指示剂,进行抗原或抗体的检测。与放射免疫法比较。具有所需仪器设备简单、试剂价廉、无放射性危害等优点。９－＄蛋白的ＥＩＪＳＡ检测国内未见文献报道,…