酪蛋白酶解产物对仔猪肠道黏膜IGF-I及其受体基因mRNA水平的影响

研究了酪蛋白酶解产物对新生仔猪肠道黏膜胰岛素样生长因子I(IGF-I)及其受体基因mRNA水平的影响.从五窝仔猪中选出10头仔猪,每窝选2头,分剐分至酪蛋白饲喂组(对照组)和酶解酪蛋白饲喂组(试验组).两组仔猪均以牛乳为基础日粮,并分别加入1.5%的酪蛋白和酪蛋白酶解液取代10%体积的牛乳,人工饲喂3d后屠宰取样.试验结果表明,试验组仔猪空肠黏膜IGF-I受体基因和IGF-I基因mRNA水平分别显著(P＜0.05)和极显著(P＜0.01)高于对照组仔猪.说明酪蛋白酶解产物促进肠道发育可能与提高IGF-I及其受体基因的mRNA水平有关.     

α-乳白蛋白与β-酪蛋白预防炎症的协同作用研究

牛乳中酪蛋白比例高,而母乳中乳清蛋白含量高,α-乳白蛋白、β-酪蛋白作为母乳中主要的乳清蛋白和酪蛋白,以α-乳白蛋白和β-酪蛋白为研究对象,利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应,探究不同比例的组合蛋白对细胞炎症的预防作用,探索乳清蛋白和酪蛋白的最佳配比,使婴配粉更贴合母乳。结果表明,添加α-乳白蛋白和β-酪蛋白单体能改变炎症因子mRNA和蛋白水平的表达,然而当混合比例为1:0.17时效果最佳,能显著降低白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、髓样分化基因88(MyD88)、Toll样受体4(TLR4)在mRNA水平的表达,在蛋白水平降低IL-6 1.99倍、白介素1β(IL-1β)3.91倍、肿瘤坏死因子α(TNF-α)2.72倍。通过抑制非TLR4介导炎症信号通路关键蛋白NF-κB p65的磷酸化抑制炎症的发生。本研究明确了α-乳白蛋白和β-酪蛋白预防炎症发生的最佳比例,初步阐明了两者协同抗炎的作用机理,为其在婴幼儿配方奶粉中的精准添加提供理论支持和技术指导。     

中国荷斯坦奶牛κ-酪蛋白可变剪切及蛋白突变类型的研究

【目的】κ-酪蛋白蛋白突变与奶牛生产性能和乳品加工性能关系密切,监控中国荷斯坦奶牛κ-酪蛋白的蛋白突变,可以防止对生产不利的突变的发生。【方法】以50头不同泌乳期的中国荷斯坦奶牛为研究对象,获取每头奶牛乳中的体细胞,提取RNA,反转录为cDNA,设计不同引物,分别扩增κ-酪蛋白可变剪切体序列和CDS序列,并进行测序、蛋白突变分析、突变蛋白的磷酸化、糖基化分析。【结果】测序结果表明在不同泌乳期中国荷斯坦奶牛κ-酪蛋白只存在Ensemble数据库中公布的573 bp的剪切形式,不存在另一种剪切体。κ-酪蛋白的CDS区存在三处碱基突变,即c.536T>C、c.572C>A、c.633G>A,形成的蛋白突变型只有A型和B型两种。A型与B型相比,A型多了两个磷酸化位点(136位和142位)和一个O型糖基化位点(157位)。【结论】不同泌乳期的中国荷斯坦奶牛κ-酪蛋白只存在573 bp的剪切体,蛋白突变型只存在A型和B型,未检测到其它突变型,依据生产目的不同,可对A型奶牛与B型奶牛进行筛选。     

PDCD4对奶山羊乳腺上皮细胞的凋亡及β-酪蛋白和TG合成的影响

旨在探究奶山羊程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)对乳腺上皮细胞(goat mammary epithelial cells, GMECs)凋亡及乳成分的调控作用。本研究通过双荧光素酶报告试验验证miR-21-5p与PDCD4的靶向关系，通过RT-qPCR、Western blot试验检测miR-21-5p对PDCD4的调控作用；将PDCD4干扰小RNA(si-PDCD4)与PDCD4过表达载体(pc3.1-PDCD4)转染进GMECs以探究PDCD4对GMECs的影响，通过EdU、CCK-8试验检测转染后对GMECs增殖的影响，利用流式细胞术检测转染后对GMECs凋亡的影响；利用ELISA试剂盒检测转染后GMECs中β-酪蛋白和甘油三酯(TG)的分泌情况；最后通过Western blot试验检测转染后GMECs中PI3K、mTOR、S6K、ERK、Bcl-2、Bax等蛋白的表达。双荧光素酶报告试验结果表明，PDCD4与miR-21-5p靶向结合；EdU、CCK-8及流式细胞术试验结果表明，过表达PDCD4后GMECs活力显著降低(P<...     

黄芪多糖及黄芪甲苷干预对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症的作用

【目的】考察黄芪提取物黄芪甲苷(Astragalus Ⅳ,AS-Ⅳ)及黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)干预对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells,BMECs)炎症的作用及对炎症细胞中β–酪蛋白表达的影响。【方法】使用APS、AS-Ⅳ干预LPS诱导的BMECs，检测细胞炎症因子、氧化因子、凋亡因子、β–酪蛋白的变化。【结果】CCK-8筛选发现，1 g/L APS及50、75、100 mg/L AS-Ⅳ为刺激BMECs的最适质量浓度，0.5 mg/L LPS刺激BMECs 24 h后成功建立炎症细胞模型。AS-Ⅳ、APS可显著抑制炎症细胞中乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的表达，缓解炎症状态下细胞膜的持续损伤；显著抑制炎症细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的表达，缓解细胞的氧化损伤；显著抑制炎症细胞中IL-6、IL-8和TNF-α炎...     

赖氨酸二肽对奶牛乳腺mTOR信号通路元件基因表达的影响

为研究赖氨酸二肽对奶牛乳腺组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响,在体外培养的奶牛乳腺组织培养液中分别添加赖氨酸—赖氨酸、赖氨酸—亮氨酸和赖氨酸—组氨酸二肽,等量取代培养液中φ=5%、5%和15%的游离赖氨酸(赖氨酸总质量浓度为210 mg/L);在此基础上,在赖氨酸组和赖氨酸—赖氨酸二肽5%取代组分别添加终浓度为0和100 nmol/L的mTOR抑制剂雷帕霉素。试验结束后收集乳腺组织用于αs1酪蛋白、mTOR、4E-BP1和S6K1的基因表达检测。结果发现,与游离氨基酸相比,添加3种赖氨酸二肽显著增加αs1酪蛋白、mTOR、4E-BP1和S6K1基因的表达;添加雷帕霉素抑制上述基因的表达,赖氨酸—赖氨酸二肽可以降低雷帕霉素的抑制作用。结果表明,除作为合成底物外,赖氨酸二肽还可能通过调控mTOR信号通路促进乳蛋白的合成。     

大通牦牛生长激素基因和Κ-酪蛋白基因的PCR-RFLP研究

利用PCR-RFLP技术检测了大通牦牛生长激素(growth hormone,GH)基因和Κ-酪蛋白(Κ- casein,Κ-CN)基因部分序列的遗传多态性,结果表明:大通牦牛群体中被检测的两个位点均存在遗传多态 性。GH基因PCR—RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0．1755和0．8255;(?)-CN基因PCR-RFLP 位点等位基因A和B的基因频率分别为0．1117和0．8 883。GH基因和(?)-CN基因PCR-RFLP位点的基因 型分布均极显著偏离Hardy—Weinberg平衡定理(P<0．01)。大通牦牛群体内平均基因一致度和基因多样度分 别为0．7561和0．2439。     

茶多酚对牛乳过敏原αs1-酪蛋白构象和抗原性的影响

为探明茶多酚对αs1-酪蛋白构象和抗原性的影响，选用茶多酚中活性较强的表没食子儿茶素没食子酸酯 （epigallocatechin gallate，EGCG）和表没食子儿茶素（epigallocatechin，EGC）接枝αs1-酪蛋白。通过荧光光谱、 同步荧光光谱和圆二色谱研究αs1-酪蛋白构象变化，通过间接竞争酶联免疫方法、免疫印迹实验分析αs1-酪蛋白抗原 性变化。结果表明：EGC、EGCG均对αs1-酪蛋白内部荧光有猝灭作用，对αs1-酪蛋白的酪氨酸（tyrosine，Tyr）和 色氨酸（tryptophan，Trp）残基均有影响，αs1-酪蛋白的α-螺旋和β-折叠含量略有增加，无规卷曲含量略有降低； αs1-酪蛋白构象的变化导致其抗原性显著降低，EGCG对αs1-酪蛋白构象和抗原性的影响显著强于EGC。     

高压均质对油脂预乳化大豆拉丝蛋白素食香肠质构特性的影响

为了将预乳化工艺更好应用于大豆拉丝蛋白（Textured Fibril Soy Protein，TFSP）素食香肠的加工，该研究通过采用不同的蛋白乳化剂和调控均质条件，探究预乳化油脂对TFSP素食香肠流变特性、质构和微观结构的影响。结果发现随着均质压力从0增大到30 MPa，大豆分离蛋白（Soybean Protein Isolate，SPI）乳液和酪蛋白酸钠（Sodium Caseinate，SC）乳液的表观黏度都逐渐增大，SPI乳液粒径为24.80～0.39 μm，SC乳液粒径为12.37～0.12 μm。对TFSP素肉糜进行温度扫描和频率扫描结果发现，所有的素肉糜在蒸煮后都形成了具有黏弹性的乳液凝胶，并且预乳液的均质压力越大，素肉糜的弹性模量越大。沃-布剪切测试和质构特性（Texture Profile Analysis，TPA）测试发现，TFSP素食香肠的剪切力和TPA质构特性都随着预乳液均质压力的增大而增大。采用激光共聚焦显微镜观察分析了不同预乳液和TFSP素食香肠的微观结构，当预乳化的均质压力为0～20 MPa时，SC乳液制备的TFSP素食香肠在蒸煮后发生了明显的乳液滴聚结；然而SPI乳液制备的TFSP素食香肠在蒸煮后表现出对抗乳液滴聚结的能力强。因此，采用SPI对植物油脂进行预乳化过程中，均质压力为20 MPa时，可以有效提升TFSP素食香肠的切片性和质构特性，研究结果为油脂预乳化工艺在素食产品中的开发和应用提供参考。