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甜橙β-胡萝卜素羟化酶cDNA克隆及其瞬间反义表达* 总被引:2,自引:0,他引:2
根据已报道的温州蜜柑(Citrus unshiu)β-胡萝卜素羟化酶(BCH)cDNA序列(AF296158),设计1对引物,以华盛顿脐橙(C.sinensis)成熟果实cDNA为模板,采用PCR扩增出1条长为1057bp的cDNA片段,将此片段克隆入pUCm—T载体,测序结果表明,所得序列与已报道序列同源99.62%,表明所获得的基因是BCH基因。将该基因反义插入到pBI121中构建成反义植物表达载体,其正确性得到测序的鉴定。含有该植物表达载体的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)在脐橙白皮层中诱导了β-胡萝卜素积累。 相似文献
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促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在植物生长、发育和适应环境中起着十分重要的作用,但对该家族多数成员的表达调控机制认识仍十分有限。前期实验已分离获得辣椒一个MAPK家族成员Ca MAPK7,并发现该基因的表达受病原菌、高温等逆境的诱导,但其表达调控机制仍不清楚。本研究进一步分离了Ca MAPK7的启动子序列(p Ca MAPK7),发现其TATA框位于-165 bp与-170 bp之间,此外还发现W-box,HSE,TCA,LTR,ERE等多种与生物及非生物逆境胁迫应答相关的顺式作用元件。通过构建该启动子与报告基因GUS融合表达载体p Ca MAPK7::GUS,利用农杆菌介导的本氏烟草叶片瞬间表达系统分析发现p Ca MAPK7可应答青枯菌接种及水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(Me JA)、油菜素内酯(BR)、脱落酸(ABA)和乙烯(ET)等外源激素处理,表明Ca MAPK7应答青枯菌、外源激素处理主要是通过该启动子介导的转录调节实现的。 相似文献
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GaoLiping BaoManzhu 《中国林学(英文版)》2004,6(3):9-14
To develop a transformation protocol of Rosa hybrida ‘Samantha‘ via Agrobacterium tumefaciens, the authors examined the effect of different factors on T-DNA transfer by measuring transient expression levels of an intron-containing β-glucuronidase gene. The results indicate that explant, light condition, salt concentration and acetosyringone (AS) concentration in co-culture medium are the most important factors, and factors like co-culture temperature, co-culture period and bacteria density have a strong effect on the growth of bacteria and then T-DNA transfer. Optimized co-cultivation was performed by inoculation of embryogenic callus with bacteria at a density of OD600=0.5-0.8 for 20 min and co-culture in darkness under 23 ℃ on medium with 1/2 MS salts and 300 μmol-L 1 AS for 3 d. 相似文献
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根癌农杆菌介导转化籼稻影响因素的研究 总被引:19,自引:1,他引:19
选用我国籼型杂交稻中的几个重要亲本,以携带有双元载体pCAMBIA1301的根癌农杆菌EHA105为载体,以GUS基因的瞬间表达为依据,研究癌农杆菌介导转化籼稻的影响因素,确立对转化频率有重要影响的几个条件。结果表明:经短期预培养(4-5d)的幼胚是较为理想的转化受体材料;在共培养其中添加较高浓度的乙酰丁香酮(300-400μmol/L)可提高GUS基因的瞬间表达频率;以CC培养基作为共培养后抗性愈伤筛选的基本培养基有利于抗性愈伤组织的筛选培养,按此确立的条件,在特青、龙特甫(B)、珍汕97(B)、盐恢559等籼稻品种或新本中的GUS瞬间表达率高达80%,抗性愈伤组织转化率高达70%。 相似文献
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不知道是因为时间还是因为心情,当初不让往事随风而去的誓言就像春天里的丁香花,刹那间芬芳绚烂,转瞬间凋落。曾经令人羡慕的容颜,在尘封的相册里逐渐泛黄、模糊,清晰不再。还有那些反复思量了千遍万遍的感动,也终随岁月轮回而黯然失色。不知从何时开始,忧伤的心不再忧伤,不该遗忘的已渐渐遗忘…… 相似文献
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