阿维菌素对小鼠精原细胞致突变性的研究

阿维菌素是中国农业大学研制的一种新型、安全、广谱、高效的抗寄生虫抗生素。本文以小鼠精原细胞染色体畸变分析方法研究其对雄性生殖细胞的诱变性。将昆明系雄性小鼠随机分为５组,每组１５只,第１、２和３组为高、中和低３个阿维菌素剂量组,分别以９．６０、４．８０和１．９２ｍｇ／ｋｇｂ．ｗ．（相当于１／２ＬＤ５０、１１／４ＬＤ５０和１／１０ＬＤ５０）剂量的阿维菌素１,２－丙二醇溶液给小鼠一次灌胃,第４组为阳性对照组,以４０ｍｇ／ｋｇｂ．ｗ．剂量的环磷酰胺给小鼠一次腹腔注射,第５组为阴性对照组,给小鼠灌服溶剂,于接毒后第１２ｈ、２４ｈ或４８ｈ取材,每次每组取５只小鼠。试验结果表明,阿维菌素小鼠精原细胞染色体畸变分析试验结构为阴性。本研究表明阿维菌素对于精原细胞不具诱变作用。     

热应激对猪睾丸死亡受体Fas及其配体FasL表达与定位的影响

猪睾丸内精子发生与精液质量受高温影响,但相关分子机制的报道尚未给出完整定论。利用9头14月龄性成熟长白公猪随机建立3组热应激模型,每组3头,分别为对照组、环境热应激组、局部热应激组,其中,对照组不作任何处理,室温(20～25℃)圈养在猪舍中,每天正常给水、喂食;环境热应激组每日将猪饲养在37～40℃猪舍中3 h,结束后赶回室温猪舍,连续处理7 d;局部热应激组的猪用自制的可控温加热垫覆盖在左侧睾丸阴囊表面(42℃加热1 h)。各组猪睾丸处理结束后,迅速将猪睾丸组织摘取,一部分组织切成1.5 cm3的3小块置于Bouin液固定,用于石蜡组织切片的制作;剩余部分冻存于液氮,用于总RNA、总蛋白的提取。Fas,FasL通过qRT-PCR与Western Blotting检测m RNA与蛋白的相对表达量,通过免疫组织化学染色观察生殖细胞的定位。研究旨在探索环境高温和阴囊局部热刺激导致的死亡受体Fas及其配体FasL表达与定位的影响。结果表明,qRT-PCR检验结果显示,FasmRNA相对表达量与对照组相比,环境热应激组升高、局部加热组显著升高;与对照组相比,环境加热组中FasLm RNA相对表达量显著降低、局部加热组显著升高。Western Blotting检测结果显示,与对照组相比,Fas蛋白的相对表达量环境加热组与局部加热组均升高,其中,局部加热组显著升高;与对照组比较,FasL蛋白在环境加热组的相对表达量显著降低,局部加热组显著升高。免疫组织化学结果显示,Fas免疫反应阳性物主要定位在各级生精细胞,热应激导致其阳性表达增强,且局部加热组表达量最高;FasL主要定位在支持细胞、精母细胞以及圆形精子细胞,与对照组相比,局部加热导致其表达量升高,环境加热导致其表达量降低。结果说明,局部热刺激条件下,支持细胞FasL的表达量升高,以旁分泌的方式作用于邻近生精细胞膜上的膜受体Fas,引发细胞凋亡;环境热应激组未见FasL的升高,可能是因为以不依赖于细胞凋亡通路Fas/FasL的方式进行的。     

福瑞鲤β-catenin2基因的克隆与表达分析

β-catenin是Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子,参与调控性腺发育和分化。本研究首次克隆得到福瑞鲤(Cyprinus carpio)β-catenin2的c DNA全长序列,采用荧光定量PCR技术分析了β-catenin2基因的组织表达模式及注射外源性激素对福瑞鲤β-catenin2基因表达的影响。结果表明,β-catenin2 c DNA全长3 411 bp,编码780个氨基酸,预测分子量为85. 52 ku;实时荧光定量PCR表明,β-catenin2 mRNA在血液中表达量最高,其次是性腺和脾脏;且β-catenin2 mRNA表达量在福瑞鲤性腺发育早期,随着性腺发育的成熟而升高。睾丸甾酮(T)处理后发现:卵巢中β-catenin2 mRNA表达量在10μg/g 24 h处理组显著升高(P 0. 05),精巢中β-catenin2 mRNA表达量在10μg/g和50μg/g 24 h、48 h处理组显著降低(P 0. 05)。17β-雌二醇(E2)处理后发现:精巢和卵巢中β-catenin2 mRNA表达量无显著变化(P 0. 05);以上结果表明,β-catenin2在福瑞鲤性腺发育早期是必需的。     

FSH对体外培养仔猪睾丸支持细胞cyclin D1 mRNA和 cyclin E1 mRNA表达的影响

【目的】确定FSH是否能调节支持细胞cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达及可能的机制。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR 检测cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的相对表达量。【结果】不同浓度的FSH（0—100 ng•mL-1）均可促进cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,在FSH浓度为50 ng•mL-1时两种基因的表达量最大（P＜0.05）;FSH（50 ng•mL-1）也以时间依赖的方式促进了cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,在作用30 min时其表达量达到高峰（P＜0.05）。不同浓度的Foskolin （0—20 μmol•L-1）均可以促进cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,但均低于FSH单独作用时两种基因的表达量;Rp-cAMP（0—40 μmol•L-1）、H-89（0—30 μmol•L-1）和Verapamil（0—100 μg•mL-1）以剂量依赖的方式抑制了FSH诱导的cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,而且Rp-cAMP和Verapamil联合作用对FSH的抑制效果高于单独的抑制效果（P＜0.05）,但低于两者之和。此外,不同浓度的U0126（0—10 μmol•L-1）降低了FSH诱导的cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达（P＜0.05）,而Rp-cAMP、H-89、Verapamil和U0126单独作用时,cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达与对照相比没有显著差异（P＞0.05）。【结论】FSH以剂量依赖和时间依赖的方式诱导了cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达;cAMP-PKA、Ca2+和ERK1/2参与了FSH对cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA表达的调节。     

水貂取皮期与配种期睾丸形态参数测定及组织学观察

为探明水貂睾丸的季节性变化规律,试验测定了取皮期和配种期雄性水貂睾丸的基础形态参数,通过石蜡切片、苏木精-伊红染色方法对取皮期和配种期水貂的睾丸及附睾进行了组织学结构特征比较。结果表明,水貂取皮期睾丸呈长卵圆形,平均长径、短径和厚径分别为16.88mm±1.52mm、10.90mm±0.85mm和10.28mm±1.03mm,体积为1.05cm3±0.23cm3,平均重量达到1.032 3g±0.263 3g;水貂配种期睾丸呈短卵圆形,各项形态生理参数、体积及重量极显著高于取皮期(P0.01)。在光镜下,与取皮期相比,配种期水貂睾丸生精小管内细胞层数和种类较多,包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞,生精小管与附睾管管腔中存在大量精子。而取皮期生精小管内细胞疏松,仅见少量精原细胞,并且配种期生精小管直径极显著高于取皮期(P0.01)。     

猪睾丸组织定量PCR分析中内参基因的选择

【目的】采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)对基因表达进行分析时,选择适当的内参基因是获得准确分析结果的关键。在猪睾丸分子生物学研究中,表达稳定的蛋白编码内参基因和micro RNA(miRNA)内参基因均有哪些目前尚不清楚。本研究旨在筛选出合适的内参基因,为准确定量不同时期猪睾丸组织中目的基因的表达提供可靠依据。【方法】选用8个不同发育时期(E 90、D 1、D 30、D 60、D 90、D 120、D 150、DM)的猪睾丸组织为材料,采用Trizol裂解法提取各样品的总RNA,利用Nan Drop ND-2000分光光度计检测总RNA的浓度和纯度。设计并合成已报道的猪其他组织中表达相对稳定的5个编码内参基因(GAPDH、TBP、β-actin、SDHA和B2M)以及5个miRNA内参基因(U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103)的特异性引物序列,逆转录得到cDNA模板后,按1:10梯度稀释为7个浓度梯度进行qRT-PCR反应以构建标准曲线。并对10个候选内参基因在各时期睾丸组织中的表达情况进行实时荧光定量全面检测,采用Ge Norm法对定量结果进行综合分析,最后根据内参基因稳定性值(M值)的大小筛选出最稳定的参考基因;M值越小,表明内参基因的稳定性越好,反之则越差。【结果】对GAPDH、TBP、β-actin、SDHA、B2M、U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103 10个候选内参基因的熔解曲线进行分析发现,均无非特异扩增及引物二聚体,说明各内参基因特异性良好,qRT-PCR反应的专一性高;以Ct值为纵坐标,相对拷贝数的对数为横坐标进行标准曲线分析可知,各内参基因在系列稀释的浓度梯度内具有良好的线性关系;通过对10个候选内参基因在不同时期猪睾丸组织中的表达稳定性分析发现,蛋白编码基因中,最稳定的为TBP,最不稳定的是GAPDH;miRNA候选内参中,最稳定的为U6,最不稳定的是ssc-miR-26a。【结论】成功筛选出猪睾丸组织基因表达分析中稳定表达的内参基因TBP和U6,可作为猪睾丸组织基因表达研究中最佳内参基因候选者。     

獭兔睾丸组织形态观察

獭兔是一种典型的经济动物,它既是毛皮动物又可食用,普遍应用于人类生产生活。目前已有研究报道了多种哺乳动物生精周期研究,但很少有关于獭兔的报道。本实验对2只完全性成熟的健康獭兔进行睾丸结构,生精周期相对频率,支持细胞效率研究。獭兔睾丸经石蜡包埋,HE染色以便进行组织形态学观察。不同的生殖细胞组合分析显示30%的曲精小管显示两个或两个以上的生精上皮周期阶段。獭兔生精周期阶段频率(%)分别为:阶段1:(15.5±2);阶段2:(14.0±1);阶段3:(11.5±1);阶段4:(8.5±1);阶段5:(10.5±1);阶段6:(18.5±2);阶段7:(13.0±1);阶段8:(8.5±1)。支持细胞效率(圆形精子:支持细胞=7:1)。本研究结果表明獭兔的生精效率较其他哺乳动物高。     

七种疼痛须警觉

(1)短暂的胸痛.这种疼来得快也去得快,猛一下疼痛,然后又消失了.可能是消化不良或心脏病发作所导致,应尽早到医院检查心脏组织是否受损. (2)腹股沟突然疼痛.大腿内侧疼痛还伴有肿胀,可能是睾丸扭转,即精索内的血液循环发生障碍,引起睾丸缺血甚至坏死.症状出现4～6小时内就医,可有效恢复睾丸功能;但如果拖延12～24小时后,就会对睾丸产生不可逆转的损伤.     

外源性促性腺激素对非繁殖期公貉睾酮浓度的影响

貉是季节性繁殖动物,每年2—3月份进入繁殖期。此时,公貉的睾丸内出现成熟的精子,即具备完整的授精能力。精子的生成与睾酮浓度密切相关,据报道,每年秋分后公貉血浆中睾酮浓度开始上升,至繁殖期,公貉血浆中睾酮浓度达到最大值。睾酮的生成受到下丘脑—垂体—睾丸轴调节,而非繁殖期的