农杆菌介导的海岛棉茎尖再生体系及其遗传转化影响因子的研究

采用根癌农杆菌LBA4404和EHA105介导,对海岛棉的茎尖再生体系及其转化影响因子进行了研究。茎尖培养与棉花体细胞胚胎发生相比,不同基因型的茎尖再生频率差异不明显;在9种不同的激素组合中,以6-BA0.5 mg/L NAA0.1 mg/L与1/2MSB5 IBA 0.1 mg/L对茎尖的再生效果较好;获得较高转化频率的海岛棉培养条件为:海岛苗茎尖在OD600值为0.6~0.8农杆菌菌液中感染20~30 min,共培养3 d后进行转接,在含有不同激素和抗生素的各类培养基中进行抑菌和筛选继代培养,选择压以50~150 mg/L梯度进行;农杆菌以EHA105菌株的转化效果较好;抗性苗用SDS-CTAB法提取其总DNA,进行PCR扩增检测,有7株PCR检测呈阳性反应。由此,初步证明外源抗虫基因已经进入到再生植株的细胞核中。     

金地鼠颊囊癌前病变的研究──致癌作用时间与癌变潜力的关系

用致癌剂０．５％甲基苯蒽丙酮溶液每周３次涂于金黄地鼠颊囊粘膜上，于用药第５周出现上皮单纯性增生。随用药时间的延长，病变继续发展，至用药第９周，病变表现为类似人类口腔粘膜白斑异常增生的组织学改变。分别于用药第５、７、９周后停止用药，观察至 ２１周。结果５周组未发生癌变， ７周组 ３０％（ ３／１０）癌变，９周组１００％（１０／１０）癌变。实验证实甲基苯葱诱发的金黄地鼠癌前病变模型的癌变潜力与用药时间长短密切相关。用药９周后，所有病变成为具有稳定癌变潜力的癌前病变。     

nm23基因的表达与皮肤鳞癌发生、发展及转移的关系

目的：观察nm23表达与皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)发生、发展与转移的关系。方法；采用免疫组织化学及图像分析技术检测66例皮肤鳞癌、12例淋巴结转移灶、21例假上皮瘤样增生及20例正常皮肤中nm23表达情况。结果：皮肤鳞癌中nm23表达下调，但鳞癌中nm23表达与鳞癌的转移、TNM分期、病理分化程度及发病部位无关。结论：nm23基因表达下调是发生在鳞癌演进过程中的一个早期事件。nm23可能不具有抑制皮肤鳞癌转移的功能。     

根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究

经过转化材料的筛选、KM筛选浓度、Cef抗菌浓度以及延迟筛选时间的测定,以根癌农杆菌（Agrobactriumtumefaciens）LBA4404菌株介导FPF1基因转化菊花,对转化材料进行连续KM筛选,获得105株抗性苗,部分植株经PCR检测呈阳性.田间观察部分抗性株与对照相比在株型、叶色及花期上表现出差异.     

白肋烟转基因育种研究

利用农杆菌介导法将具有广谱抗病的葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,GO)基因及抗虫半夏凝集素(Pinella Ternata Agglutinin,PTA)基因转化到烟草中,并研究了影响转化和抗性植株再生的一些因素。结果表明,基因型是影响转化和抗性植株再生的关键因素,试验所用的3个品种KY14、KY8959、TN90中,KY14转化效率最高。用于烟草转化的侵染时间以15min为宜,共培养时间以2d最佳。PCR分子检测表明,外源GO基因及PTA基因已转入到烟草KY14中。淀粉-碘化钾显色反应检测到了转基因植株产生的过氧化氢,证实GO基因已经在烟草中发挥功能。     

提高马铃薯遗传转化体系再生频率的研究

为提高马铃薯遗传转化体系的再生频率,改进了受体薯片的消毒方法,解决了外植体易污染问题,使污染率几乎降低为零;共浸染时加入适量的乙酰丁香酮可以提高再生频率;适当降低芽分化培养基的激素水平,在外植体分化正常的情况下,节省了在激素上的资金投入;不同品种马铃薯片转化后的植株再生情况不同,津引薯8号微型薯出苗量大,而S1微型薯首批苗更好。综合以上改进措施,使再生频率由29%提高到60%。     

根癌农杆菌介导的叶用莴苣基因转化系统的建立

以叶用莴苣微茎尖为试材，在含有BA和NAA的MS液体培养基上旋转培养，诱导出大量愈伤组织；进一步分化培养，获得大量不定芽并生根；将愈伤组织碎块与根癌农杆菌共培养，对经卡那霉素筛选后所得到的再生植株进行X-Gluc染色，蓝色反应阳性率为80％，表明建立了叶用莴苣愈伤组织基因转化系统。     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化番茄的研究

通过根癌农杆菌介导，采用叶盘转化法，探讨了黄瓜花叶病毒外壳蛋白（CMV－CP）基因导入番茄栽培品种‘红宝石’的适宜条件。结果表明：适宜的卡那霉素（Km)浓度，根癌农杆菌浓度，根癌农杆菌感染时间以及共培养时间分别为35mg/L,D600约0.5,10-15min和2－3d；将诱导形成的抗性愈伤组织转接到含有35mg/L Km的分化培养基和生根培养基中使其分化不定芽和生根，获得了抗Km的番茄再生植株。对再生植株进行再欠离体培养抗Km鉴定和PCR分子检测，补CMV-C基因已导入番茄再生植株的基因组中。     

四种药物联合BAI治疗31例中晚期肺癌的疗效观察

四种药物联合ＢＡＩ治疗３１例中晚期肺癌的疗效观察陆朝阳，廖振荣，杨景南，林伟明，陈炳（广东省电白县人民医院，电白５２５４００）对于中晚期不宜手术的肺癌患者，目前常用全身化疗、放疗或两者相结合的疗法，但疗效较差。支气管动脉内药物注入化疗虽然取得较好疗效...     

根癌农杆菌Ⅵ型分泌系统关键组分ClpⅤ型ATPase基因表达及活性位点分析

细菌Ⅵ型分泌系统（type Ⅵ secretion system,T6SS）是近年发现的一种分布广泛且与细菌致病性密切相关的新型分泌系统,ClpⅤ型ATPase是不同细菌T6SS中均含有的关键保守组分,据推测可能为底物蛋白的分泌提供动力,但对其生化功能尚未进行深入鉴定。在本研究中,我们克隆了根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）C58中的ClpⅤ型ATPase基因atu4344并在大肠杆菌中表达,酶学检测证实了其ATPase活性,定点突变分析发现K232/608和E299/675突变体均丧失ATPase活性,表明Walker A模体和Walker B模体与其活性密切相关。这是首次对植物病原细菌T6SS中的ClpⅤ型ATPase进行生化鉴定和突变分析研究。