荧光探针PCR检测牛嵴病毒的方法建立

牛嵴病毒(bovine kobuvirus, BKoV)是与犊牛腹泻密切相关的病原,试验针对BKoV 3D基因设计特异性引物和探针,建立快速检测BKoV的实验室方法。该方法仅能特异性扩增BKoV,对其他犊牛腹泻病原无扩增,特异性较强;对BKoV质粒标准品的最低检出限为11.0拷贝/μL,灵敏性较强;且组内与组间变异系数均小于2%,重复性较好。对采集自河南省的221份犊牛腹泻临床样本进行检测,BKoV的核酸检出率为9.05%(20/221)。本研究建立的检测方法为BKoV的临床快速检测和流行病学调查提供了有效手段。     

表达鸡传染性法氏囊病病毒变异株VP2基因的重组嵌合型新城疫病毒的构建与鉴定

为了研发防控IBDV变异株和基因Ⅶ型NDV感染的高效廉价多联疫苗,将IBDV中国流行变异株的VP2基因共有序列插入到含有基因Ⅶ型NDV毒株F和HN基因的嵌合型NDV LaSota-ⅦF/HN全长基因组cDNA的质粒pNDFL-ⅦF/HN中,构建含有IBDV变异毒株VP2基因的重组NDV全长感染性克隆pNDFL-ⅦF/HN-VP2。将pNDFL-ⅦF/HN-VP2和辅助质粒共转染BHK-21细胞拯救重组NDV rChiLaSota-VP2。利用PCR和Western blot对重组NDV进行鉴定,并对重组病毒的生物学特性进行研究。结果显示,重组NDV rChiLaSota-VP2拯救成功并可以正确表达IBDV VP2蛋白。第25代重组NDV在鸡胚中的生物学特性研究表明,rChiLaSota-VP2保留了LaSota株在鸡胚中高滴度复制、低致病性和遗传稳定性等生物学特性。重组NDV rChiLaSota-VP2的鸡胚半数感染量(EID₅₀)峰值可达10^-8.16/100μL,鸡胚平均致死时间(MDT)为134 h, 1日龄雏鸡脑内接种致病指数(I...     

非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立

为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)核酸的荧光PCR方法,试验根据GenBank中ASFV的p72基因和PCV2的ORF1基因序列,分别设计特异性引物,通过对加样体系和扩增程序的优化,建立了检测ASFV和PCV2的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价,最后对收集的临床样品进行检测。结果表明,最终确立的20μL反应体系中各引物最佳添加量为：F1 0.7μL、R1 1.0μL、F2 0.8μL和R2 1.5μL;优化后的扩增反应程序为：95℃预变性3 min; 94℃变性5 s, 54℃退火20 s (此处收集荧光),40个循环。该方法具有很好的特异性,不与其他常见猪病原体发生交叉反应。检测ASFV和PCV2的灵敏度分别可达5.6 copies/μL和3.2 copies/μL,T_m值的批内和批间变异系数均不高于1.0%,对14份临床样品的检测结果与参比方法一致。本研究所建立ASFV和PCV的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法敏感性高,特异性好,可用于临床2种疾病的快速检测。     

蓝舌病病毒NS3蛋白抑制细胞Ⅰ型干扰素的产生

蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)是一种双链RNA病毒,能感染多种细胞诱导强烈的Ⅰ型IFN效应,而BTV非结构蛋白NS3对IFN-β的生成有强烈抑制作用,但目前BTV感染与诱导IFN-Ⅰ产生的关联仍不清楚,BTV NS3蛋白如何影响IFN-Ⅰ合成也有待研究。为此本研究通过BTV-1和BTV-16感染人非小细胞肺癌细胞(A549)和犊牛原代肾细胞(MDBK)探索不同血清型、不同病毒载量、不同作用时间的BTV对细胞IFN-Ⅰ产生的影响,通过构建BTV NS3真核表达质粒,探索NS3蛋白对细胞IFN-Ⅰ转录及表达水平的调控和影响。qPCR结果表明BTV-1和BTV-16能感染A549和MDBK并诱发强烈的IFN-β效应,双荧光素酶报告基因结果显示BTV NS3对BTV诱导的IFN-β启动子活性具有抑制作用,且表达量与抑制作用呈正相关。本研究揭示了BTV增殖与细胞产生IFN-Ⅰ的关系,阐明了BTV NS3蛋白对IFN-β转录和表达水平的影响,其结果有助于了解BTV的致病机理及其干扰宿主的天然免疫应答机制,对BTV疫苗研发及抗病毒治疗具有科学意义。     

吉林省牛病毒性腹泻病毒与牛肠道病毒混合感染的流行病学调查

应用检测牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)与牛肠道病毒(bovine enterovirus, BEV)抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒,分别对2019-2020年采集于吉林省5个地区的738份粪便样品进行检测,并以PCR和免疫荧光试验对部分样品进行了确证。结果显示,吉林省不同地区、不同年龄及不同品种的牛群均存在BVDV与BEV混合感染,其中,BVDV感染率为10.26%～42.65%,BEV感染率为8.33%～20.83%,2种病毒的混合感染率为3.42%～14.71%。对不同品种牛群BVDV与BEV混合感染的检测结果显示,荷斯坦牛混合感染率为13.04%、西门塔尔牛为7.84%、延边牛为3.65%、利木赞及其他牛群为3.42%。检测不同年龄牛群混合感染的结果显示,各个年龄牛群均存在不同程度的BVDV与BEV混合感染,其中,成年牛群混合感染率高达57.63%,犊牛混合感染率为3.39%。PCR和免疫荧光试验检测结果显示,在BVDV与BEV混合感染的样品中均可同时扩增出或检测出BVDV与BEV的混合感染。本研究首次揭示出吉林省牛群的B...     

GS-441524体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制效果

利用CCK8方法测定GS-441524作用Marc-145细胞的安全浓度,并通过检测该化合物在病毒吸附、内化、核酸复制环节对病毒的感染能力、mRNA与蛋白合成能力的影响,评价了GS-441524体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的活性,确定其在体外抑制PRRSV的作用阶段。结果显示,在Marc-145细胞中,GS-441524具有良好的抗PRRSV活性,其EC₅₀为2.65μmol/L;该化合物在体外显示出良好的安全性,其CC₅₀为2 706.41μmol/L;对PRRSV复制周期的影响是GS-441524主要抑制PRRSV的复制早期阶段,而对病毒吸附、内化环节无阻断作用。结果表明,GS-441524具有抗PRRSV复制的潜在能力,该结果为抗PRRSV药物的选择和开发提供了新思路。     

藜麦研究进展及发展前景

藜麦(Chenopodium quinoa),苋科藜属植物,原产于南美洲安第斯山脉高原地区,具有大约5000~ 7000年的种植历史,是当地印加人备受推崇的主要粮食作物之一,近些年因为其全面的营养价值和均衡的氨基酸比例以及药用保健价值收到追捧,引起了许多科研工作者的兴趣。为了给科研工作者提供一些研究方向的参考,通过对国内外对藜麦的研究文献进行汇总,归纳了在藜麦的引种栽培、营养成分分析、产品开发利用、遗传谱系研究、抗逆性研究、抗病虫害研究等方面的最新研究进展,提出了一些在研究中尚未解决的问题,如藜麦在低海拔地区产量和品质降低、藜麦的多种药用保健作用、藜麦副产物的利用等,将成为未来研究的重点方向,并分析了藜麦作为一种杂粮作物在中国西北地区的引种栽培以及发展潜力。     

快速检测禽流感病毒的生物阻抗测试仪

在生物芯片上通过测量微(纳)电极阻抗值以诊断溶液中禽流感病毒,是目前禽流感病毒快速检测的方向之一.以AD5933高精度阻抗转换芯片为核心测量芯片,以ATmega16单片机为控制器,通过外围电路设计和调试,研制激励频率范围1～100 kHz、测量阻抗范围1～1 000 kΩ的阻抗测试仪,通过液晶实时显示扫频和定点测量结果.为保证测试仪的准确性,设计了带有35组不同阻抗组合的校正网络,用以实时校正.经精度为0.2％的商品化阻抗测试仪标定,所研制的原理性装置容抗测量精度达3％,通过进一步改进后可以满足使用要求.     

益阳市不明原因生猪疫病疫情及防治报告

2006年6至7月份,我市沅江、南县、资阳、桃江、赫山等地相继发生不明原因生猪疫病疫情。该次疫情呈现出“传播速度快、蔓延范围广,疫病种类多、疫情很复杂,     

26例猪戊型病毒性肝炎的临床诊断分析

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是20世纪80年代,发现的一种类似甲型肝炎的非甲非乙型肝炎。猪感染戊型肝炎病毒(HEV)后可检测到毒血症,自然感染的猪有些不出现临床症状,