中药复方口服液治疗鸭病毒性肝炎的试验

饲养无病毒性肝炎母源抗体雏鸭,于7日龄接种鸭病毒性肝炎病毒制作DVH模型,随机分为中药治疗组、对照组,治疗组分别于7日龄、10日龄开始口服中药口服液,连用5 d.结果发现,与开始治疗时间相对应,口服中药复方1号组存活率达92.3%、84.6%;口服中药复方2号组存活率达88.5%、76.9%.     

番茄褐色皱果病毒SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

根据番茄褐色皱果病毒（tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV）外壳蛋白（coat protein,CP）的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRFV的番茄、辣椒种子进行了检测验证。结果表明,构建的实时荧光RT-PCR检测ToBRFV阳性的番茄种子总RNA和重组质粒标准品的检测低限分别为0.2 ng/μL和50.0拷贝/μL,均为普通RT-PCR检测灵敏度的100倍;对番茄花叶病毒（tomato mosaic virus,ToMV）、番茄环斑病毒（tomato ringspot virus,ToRSV）、番茄黑环病毒（tomato black ring virus,TBRV）、番茄斑萎病毒（tomato spotted wilt virus,TSWV）、辣椒轻斑驳病毒（pepper mild mottle virus,PMMoV）、烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）和烟草环斑病毒（tobacco ri...     

山茶叶杯菌研究进展

山茶属植物具有重要的经济价值,其中一些种是重要的观赏型花卉。山茶叶杯菌是造成山茶花腐病的致病菌,是我国进境植物检疫性有害生物名录中的一种检疫性真菌。本综述在广泛收集国内外各种文献来源基础上,总结归纳了山茶叶杯菌分布、寄主、症状、形态特征、检疫鉴定技术、侵染循环等相关信息,同时汇总了现有防治方法。目前尚无有效防治方法,加强对山茶叶杯菌的研究,大力开展检疫工作是防控该病害发生发展的有效手段。     

柑橘麻风病及其检疫重要性

柑橘麻风病在南美洲和中美洲危害严重,引起该病的病毒有6种,分属3个病毒属,其共同特征是局部危害产生的症状相似,并且都由短须螨属螨传播。世界上多个国家和地区将其列入检疫性有害生物。我国尚无该病毒危害柑橘的报道,但其对国内柑橘生产的潜在威胁依然存在。本文综述了该病的历史、病原物特性、传播途径及检疫重要性。     

禽流感病的防制

禽流感是禽流行性感冒的简称,是由甲型(A型)流感病毒的亚型(禽流感病毒)引起的传染性疾病,又叫真性鸡瘟(与假性鸡瘟-鸡新城疫不同)或欧洲鸡瘟,是国家一类(甲类)动物疾病。多发生于家禽和野禽,也发生于人、马、猪等动物。偶见于水貂、海豹。本病对动物特别是对禽类的危害是相当大的,甚至对人类都形成了危害。     

新城疫、禽流感和禽腺病毒病三联嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定

采用新城疫病毒样颗粒载体平台和昆虫杆状病毒表达系统,将禽流感H9N2株HA、禽4型腺病毒Fiber2嵌合至新城疫病毒样颗粒载体表面进而构建“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒(ND-AI-FAdV4 cVLPs)。PCR及免疫荧光检测结果显示,成功构建了重组杆状病毒rBV-cFiber2;透射电镜结果显示,ND-AI-FAdV4 cVLPs直径约为100 nm、含有囊膜的空心蛋白颗粒;免疫印迹结果显示,嵌合型病毒样颗粒各组分蛋白均正确表达。本试验为新城疫、禽流感和禽腺病毒病的安全、高效病毒样颗粒新型疫苗候选株的应用奠定了基础。     

非洲猪瘟病毒I226R蛋白原核表达及检测I226R抗体间接ELISA方法的建立

本实验室前期构建了缺失I226R基因的非洲猪瘟病毒(ASFV)减毒株SY18△I226R,将其高、低单剂量(分别为10⁷TCID₅₀和10⁴TCID₅₀)接种家猪21 d后,对致死剂量ASFV SY18毒株的攻击,免疫猪均能达到100%保护,具有作为ASF疫苗候选株的潜力。为了能够有效区别家猪感染ASFV野毒株和SY18△I226R减毒株,本试验从ASFV SY18株基因组中扩增得到I226R基因片段,克隆到原核表达载体pET32a,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞后诱导表达,纯化后获得I226R蛋白(pI226R)。以纯化的pI226R为包被抗原,以不同缺失毒免疫猪或自然毒感染康复猪血清为检测对象,建立了针对pI226R抗体的间接ELISA检测方法。结果显示,pI226R重组质粒在BL21(DE3)细胞中经IPTG诱导表达,获得的蛋白大小为28 kDa。以pI226R为包被抗原的间接ELISA检测结果显示,该方法对阴性猪血清和SY18△I226R疫苗候选株接种猪血清检测的D_45...     

蜱传脑炎病毒E蛋白D Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立

利用PCR技术扩增蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus, TBEV)E蛋白第三结构域(DomainⅢ,DⅢ)基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-TBEV-E-DⅢ。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立TBEV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组蛋白TBEV E-DⅢ在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,蛋白表达的最佳条件为30℃、0.6 mmol/L IPTG诱导6 h; TBEV抗体间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,该方法可特异性检测TBEV阳性血清,与寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)和西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数(CV)均小于10%。结果表明,成功表达并纯化了TBEV E-DⅢ重组...     

溶酶体酸性环境促进猪血凝性脑脊髓炎病毒的复制

为解析猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复制和溶酶体酸性环境的相关性,本研究以PHEV感染神经瘤母细胞(N2a细胞)为模型,利用Western blot和间接免疫荧光方法进行检测,发现PHEV感染神经细胞后溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)表达显著升高,病毒能与溶酶体共定位,并使溶酶体体积增大。其次,用溶酶体荧光探针Lyso Tracker Red DND-99标记活细胞溶酶体,结果发现病毒感染神经细胞后溶酶体的酸性增强。再者,用巴佛洛霉素A1(BafA1)阻止神经细胞溶酶体酸化后接种病毒,发现与未处理的细胞感染组相比,胞内病毒含量显著降低,表明抑制溶酶体酸化能够阻碍细胞内子代病毒的产生。本研究结果表明PHEV感染神经细胞后能定位于溶酶体,影响溶酶体的酸性环境,并且揭示了子代病毒的产生依赖溶酶体的酸性环境;研究结果为深入解析溶酶体与PHEV复制的相关性提供了依据。