鸡腺苷琥珀酸裂解酶(Adsl)基因多态性及其与肌苷酸含量相关研究*

 腺苷琥珀酸裂解酶是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶之一,催化嘌呤核苷酸合成过程中的两个重要反应:(1)由SACIAR生成AICAR的反应;(2)由腺苷酸琥珀酸生成腺苷酸单磷酸的反应。本研究对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因的cDNA进行了克隆,并对序列进行了分析,共发现有6处碱基突变:249 G→A(TH),717 C→G(TH),985 A→G(TH)仅在泰和乌骨鸡中出现;992 T→C(RW),1400 C→T(RW)仅在隐性白羽肉鸡中出现;而在泰和乌骨鸡和隐性白羽肉鸡中均检测到突变1179 A→C(TH,RW)。其中985 A→G(TH),1400 C→T(RW)处突变导致两处氨基酸突变:Thr→Ala(305),Ala→Val(443),其它4处碱基突变均为同义突变。     

早籼米辛烯基琥珀酸淀粉酯的制备及其理化性质的研究

以早籼米淀粉为原料,采用响应面法设计试验,对辛烯基琥珀酸淀粉酯的制备工艺进行研究,并探讨产品的理化性质.结果表明,早籼米辛烯基琥珀酸淀粉酯的最佳制备工艺为:反应时间4 h,温度33.4℃,pH值8.4,淀粉乳液浓度36.8%(质量分数,g.g-1).该工艺所制备辛烯基琥珀酸淀粉酯的取代度为0.018 9,反应效率为81.5%.水相体系中制备辛烯基琥珀酸淀粉酯使淀粉颗粒表面产生了一些孔洞,酯化反应可能主要发生在淀粉颗粒的表面;辛烯基琥珀酸淀粉酯具有较原淀粉低的糊化温度,当取代度由0增加至0.025时,糊化温度由71.54℃降低至69.31℃.     

鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因适用性进化分析

采用反转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法,以肝脏总RNA为模板,对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因（ADSL）编码区序列进行克隆和测序;并结合Gen—Bank中已提交的家鸡、鱼类、哺乳动物和人类等ADSL基因序列,采用基于最大似然法的密码子置换模型分析ADSL基因编码区序列在进化过程中承受的选择压力。结果RT—PCR方法准确获得了泰和乌骨鸡和隐性白羽肉鸡ADSL基因编码区序列,全长为1380bp。“分支特异模型”检验结果表明,ADSL基因在不同物种进化过程中较为保守,未受到正选择作用。鸡ADSL基因序列的“位点特异模型”检验未发现正选择位点。研究结果有助于了解鸡ADSL基因的结构及进化历程。     

母体妊娠期和哺乳期蛋白限饲对后代育肥猪肌纤维特性的影响

为探讨母猪妊娠期和哺乳期蛋白限饲对后代育肥猪肌纤维特性的影响,试验选用16头配种日期、系谱、体重、日龄等相近的纯种小梅山初产母猪(80 kg左右),采用单因子试验设计,根据在整个妊娠期和哺乳期饲喂不同蛋白水平(正常水平和限饲水平,限饲蛋白水平为正常蛋白水平的50%)的日粮,将16头母猪随机分为2组:限饲组和对照组,每组...     

几种离子对豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶活性和最适PH值的影响

在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ８．０的１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｃｉｎｅ缓冲液中，当离子浓度＜１５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｋ＋和Ｎａ＋离子是豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶（ＡＳＡＬ）的激活剂，其最适浓度约为７５ｍｍｏｌ／Ｌ，可分别提高酶活性４０％和３５％。Ｍｇ２＋离子是ＡＳＡＬ的抑制剂，能拮抗Ｋ＋和Ｎａ＋离子的激活效应。ＨＰＯ二４离子可显著降低酶活性，抑制效应与ＨＰＯ二４离子浓度呈正相关。在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ６．６～８．０的１００ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液中，ＡＳＡＬ的最适ｐＨ值约为７．４，而在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ７．４～８．６的Ｔｒｉｃｉｎｅ缓冲液中，ＡＳＡＬ的最适ｐＨ值约为８．２。     

母猪限饲对后代断奶仔猪肌纤维特性的影响

选用16头配种日期、系谱、体重和日龄等相近的纯种小梅山初产母猪,采用单因子试验设计,根据在整个妊娠期和哺乳期饲喂不同蛋白水平的日粮(正常水平和限饲水平,限饲蛋白水平为正常蛋白水平的50%),将16头母猪随机分为2组:限饲组和对照组,比较了2组母猪后代断奶仔猪背最长肌的肌纤维类型及面积、肌糖原含量、乳酸脱氢酶活性以及琥珀酸脱氢酶活性。结果显示:限饲后仔猪Ⅰ型、ⅡA和ⅡB型肌纤维面积均低于对照组,但差异不显著(P>0.05);限饲后仔猪Ⅰ型和ⅡA型肌纤维比例升高,但ⅡB型肌纤维比例降低,差异均不显著(P>0.05)。限饲后仔猪背最长肌中糖原含量显著高于对照组(P<0.05)。限饲后仔猪乳酸脱氢酶活性与对照组相比无显著差异(P>0.05)。限饲后仔猪琥珀酸脱氢酶活性显著低于对照组(P<0.05)。试验结果表明:母猪妊娠期和哺乳期蛋白限饲对后代断奶仔猪肌纤维结构未见显著影响,但降低肌肉有氧氧化能力,对肌肉代谢特性产生不利影响。     

甘蔗水分胁迫响应相关醛脱氢酶基因的克隆及其表达特征分析

 【目的】筛选并克隆与水分胁迫相关的基因,通过对目的基因的表达分析进一步解析植物的抗旱机制,为甘蔗抗逆育种提供候选基因和理论依据。【方法】应用消减文库技术结合cDNA芯片技术筛选水分胁迫诱导的基因的EST序列,根据筛选到感兴趣的上调表达基因的EST序列,用RACE技术获得SSADH的全长cDNA序列,并通过实时荧光RT-PCR技术对该基因的表达特征进行分析。【结果】通过消减文库技术结合cDNA芯片技术筛选的EST中含有4个推测为基因SSADH 的EST,其在水分胁迫处理的斑茅中均明显上调表达。通过RACE扩增获得甘蔗SSADH全长cDNA序列为1 914 bp,其中5′端非编码区25 bp,开放阅读框为1 581 bp,3′端非编码区306 bp,在1 749处有终止加A信号AATAA。克隆的甘蔗全长cDNA序列进行NCBI比对分析显示,所克隆的甘蔗SSADH全长cDNA与拟南芥（NM_106592.3）的ALDH5F1同源性为73%,表明克隆的cDNA序列可以归为甘蔗的醛脱氢酶家族基因ALDH5F1。通过荧光实时PCR分析SSADH表达表明,该基因参与干旱胁迫下的全程响应,并证明水分胁迫下该基因表达与Ca2+的存在调控关系。【结论】克隆了甘蔗基因SSADH,该基因为一个水分胁迫响应基因;SSADH的植物在体表达与Ca2+存在调控关系。克隆的基因SSADH可用于植物抗逆性调控研究。     

土壤中产琥珀酸肠杆菌的筛选与鉴定

[目的]从土壤环境中分离出琥珀酸产量高,营养要求低的琥珀酸生产菌株。[方法]采用选择性较强的富集培养基结合溴甲酚绿快速筛选平板,从土壤中筛选、分离出产酸的菌株,利用TLC法和荧光法分离出具有不同产琥珀酸能力的菌株,并进一步利用HPLC法定性、定量。[结果]菌落为圆形凸起,表面光滑,不透明,呈淡黄色,边缘锯齿形,菌体粘稠、边缘不规则,细胞大多数单个或成双成串出现,菌体兼性厌氧,革兰氏阴性,对菌株进行生化和16S rRNA分析确认为肠杆菌属。[结论]筛选得到的肠杆菌JLT9与其他菌株相比产酸量略低,但副产物较少,培养条件简单,JLT9菌株具有好的开发研究前景。     

琥珀酸丝状杆菌RT-PCR方法的建立

[目的]了解牛瘤胃内微生物的变化。[方法]以琥珀酸丝状杆菌为对象,根据16S rRNA序列分别设计引物。从牛瘤胃液提取总DNA,扩增琥珀酸丝状杆菌的DNA片段,并连接在pDM-18T载体上,经PCR和测序鉴定后,以不同稀释度的重组质粒为模版进行RT-PCR。[结果]扩增的目的片段与已知的菌种相应片段的同源性为100%。以不同稀释度的重组pMD-18T为模板建立的RT-PCR扩增曲线有明显差异,绘制标准曲线的相关系数接近1,熔解曲线呈单一峰值。[结论]成功建立了琥珀酸丝状杆菌的实时荧光定量PCR方法,为进一步研究瘤胃内微生物变化奠定基础。     

柠檬酸和琥珀酸提取牡蛎匀浆液中镉的研究

以琥珀酸和柠檬酸提取牡蛎匀浆液中的镉,并利用单因素试验和正交试验优化提取条件。结果表明,有机酸的pH对牡蛎匀浆液中镉的提取率影响最大,其次是料液比和时间。浓度和温度的影响因有机酸类型不同而有差异。琥珀酸提取镉的最佳条件如下：时间为2 h,温度为35 ℃,酸浓度为0.02 mol/L,料液比为1∶15,pH为2.0;柠檬酸提取镉的最佳条件如下：时间为2 h,温度为35 ℃,酸浓度为0.04 mol/L,料液比为1∶15,pH为2.5。在最佳条件下两种有机酸对牡蛎匀浆液中镉的提取率达到90.2%～91.8%。