猪卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化

为研究猪未成熟期(GV期)和体外成熟期(MⅡ期)卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的GV期和MⅡ期卵母细胞制备电镜标本.GV期和MⅡ卵母细胞分3组进行处理:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为GV期卵母细胞冷冻组,Ⅲ组为MⅡ期卵母细胞冷冻组.结果表明,所用玻璃化冷冻程序更适用于猪GV期卵母细胞的冷冻保存,GV期冷冻组卵母细胞的二乙酸荧光素(FDA)染色存活率、卵裂率均明显高于MⅡ期卵母细胞冷冻组.透射电镜观察结果发现,猪GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,主要表现为部分卵丘-卵母细胞复合体(COC)发生卵丘细胞脱落,透明带破损,卵丘细胞碎裂,卵丘细胞与卵母细胞间的连接受到破坏,卵母细胞微绒毛断裂、消失、数量减少,卵母细胞内脂滴多呈均质状.而MⅡ期卵母细胞冷冻后,皮质颗粒仍呈单层排列于质膜下,仅可见形态不规则的不均质脂滴,其周围常严重空泡化.试验表明,采用适当的冷冻方案,可以获得少量源于冷冻保存的猪GV期卵母细胞的胚胎.而猪MⅡ期卵母细胞冷冻后,经体外受精未见卵裂,脂滴严重空泡化是其最为明显的变化.     

玻璃化液对泥鳅胚胎的渗透及毒性作用

通过不同抗冻剂组成的玻璃化液在室温和低温下对泥鳅胚胎的平衡处理，证实了抗冻剂在室温下对胚胎的渗透比在低温下迅速。不同组合的抗冻剂渗透速度不同，但对胚胎的作用均表现为使胚胎从一开始的透明状态逐步变成乳白色不透明状态，从乳白色不透明状态逐步变成透明状态，再从透明状态逐步变成乳白色不透明状态。在一定的时间范围内，更换解冻液后，这种反应呈“可逆反应”，胚胎能够成活。证明了胚胎在抗冻剂中，当第一次变成不透明时并不是真正死亡，真正的死亡是胚胎达到完全透明以后，第二次变成乳白色不透明状态。     

北美冬青“奥斯特”组培过程中玻璃化问题的研究

以北美冬青(Ilex verticillata)室内培养的嫩茎切段为外植体进行组织培养和快速繁殖试验研究,结果表明,初代培养的分化率高达95.2%;但初代和继代培养过程中都有不同程度的玻璃化现象存在,解决这一问题的主要途径是在增殖倍数较高的培养基WPM+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L中,加入0.4 mg/L的GA3,增加蔗糖浓度为50 g/L,高强琼脂7 g/L,可有效控制玻璃化苗的形成。     

蝴蝶兰类原球茎玻璃化产生的原因及恢复效果研究

对蝴蝶兰(Phalaenopsis)组培生产中引起类原球茎玻璃化的原因以及玻璃化类原球茎再利用的效果进行了研究.结果表明,随着植物生长调节剂浓度增高和继代培养的时间延长,类原球茎玻璃化程度加重.当NAA浓度为5 mg/L、BA浓度为10 mg/L,继代培养到第9代时,2种培养基中玻璃化率分别高达71%和65%.玻璃化类原球茎的平均增殖率仅为2.2,再生植株率为183株/瓶,明显低于正常类原球茎的5.3和1 297株/瓶.玻璃化类原球茎在无植物生长调节剂培养基中经2～3代恢复培养后,数量下降到0.84%,玻璃化现象可得到明显恢复,恢复后的类原球茎的分化能力和植株生长状态与正常类原球茎一致,无变异现象发生,可继续应用于组培生产.     

OPS法与细管法冷冻小鼠胚胎的研究

用0.25 mL细管和OPS(open pu lled straw)管,对小鼠囊胚进行玻璃化冷冻,以比较2种方法的冷冻效果。结果表明,冷冻-解冻胚胎体外培养24 h后,2组的发育率分别为63.3%(31/49)和71.4%(55/77);OPS法在冻胚发育率上稍优于细管法,但无统计学差异(P>0.05);2组冷冻胚胎的培养发育率均显著低于鲜胚培养组94.3%的发育率(P<0.05)。采用OPS法冷冻小鼠8-细胞胚,其冻后培养发育率为55.6%,似乎要低于囊胚冷冻后的培养发育率,但差异不显著(P>0.05)。     

玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞发育能力的影响

试验首次采用OPS法玻璃化冷冻小鼠GV期卵母细胞(不带卵丘细胞,下同),同时尝试用EDFS30对小鼠卵巢进行细管法玻璃化冷冻,以研究GV期卵母细胞冷冻后的发育潜力。首先,利用MEM培养和MEM-腔前卵泡培养新鲜GV期卵母细胞,并把较好的培养方式用于冷冻后培养试验。2种培养方式培养24h后新鲜GV期卵母细胞成熟率无显著性差异;OPS法冷冻的GV期卵母细胞解冻后成熟率及体外受精后卵裂率与对照组差异不显著(P>0.05)。细管法冷冻卵巢组织的GV期卵母细胞成熟率极显著低于对照组(P<0.01),其受精后未获得受精卵。结果表明:OPS法可有效地冷冻保存小鼠GV期卵母细胞,而细管法冷冻小鼠卵巢对GV期卵母细胞损伤较大。     

聚乙烯醇在枣和酸枣组织培养中的作用

以冬枣、酸枣组培苗为试材,研究了聚乙烯醇不同浓度在冬枣和酸枣组培苗继代增殖中对其玻璃化的影响、在生根培养中对生根效果的影响及在叶片培养中对愈伤组织诱导的影响。结果表明,2.0g/L的聚乙烯醇能够有效降低冬枣和酸枣组培苗在继代增殖中的玻璃化现象,并能提高组培苗在生根培养中的生根条数和根长度;1.0、1.5g/L的聚乙烯醇可使酸枣和冬枣组培苗叶片愈伤组织发生时期提前,并可提高愈伤组织发生率和发生量、改善愈伤组织的质量。因此,聚乙烯醇在冬枣和酸枣的继代增殖、生根培养及叶片愈伤组织诱导中均有良好的促进作用。     

花椰菜再生苗去玻璃化试验

为克服花椰菜再生苗玻璃化程度高,难以分化成正常植株的问题,开展优化培养基配方试验.结果表明,切取0.5～0.7 cm长的“秋雪珠”花椰菜组培无菌苗的下胚轴,以MS为基本培养基加入6-BA 1 mg/L＋AgNO320 mg/L＋4%蔗糖＋0.5%phytgal,不定芽诱导率可达89.57%,玻璃化苗发生率仅13.21%,再生植株移栽成活率达95%～100%.     

如何克服植物组织培养中试管苗玻璃化问题

在进行植物组织培养时 ,经常会出现“玻璃苗”,即试管苗生长异常 ,叶、嫩梢呈透明或半透明的水浸状 ;整株矮小肿胀 ,失绿 ;叶片皱缩成纵向卷伸 ,脆弱易碎。这种“玻璃苗”是植物组织培养过程中特有的一种生理失调或生理病变 ,很难继续用作继代培养和扩繁材料 ,生根困难 ,移栽后也很难成活。它已成为茎尖脱毒、工厂化育苗和材料保存等方面的严重障碍 ,是进行组培工作的一大难题。为解决这一问题 ,我们经过多年的观察 ,查阅资料 ,采取了以下几项措施 ,使试管苗玻璃化现象基本得到了有效控制。1　利用固体培养 ,增加琼脂浓度 ,降低培养基的衬质…     

玻璃化冷冻牛GV卵母细胞全基因组甲基化模式初探

旨在研究玻璃化冷冻对牛GV期卵母细胞全基因组甲基化的影响。本研究收集新鲜、玻璃化冷冻的牛GV卵母细胞，采用单细胞全基因组甲基化测序（ScWGBS）技术对新鲜、玻璃化法冷冻牛GV卵母细胞的全基因组甲基化水平进行检测，旨在揭示两者DNA甲基化模式的差异。结果表明，玻璃化冷冻不会对牛GV卵母细胞的全基因甲基化水平造成显著影响。基于基因本体（GO）和信号通路（KEGG）对140个差异甲基化区域（DMRs）进行分析，发现DMRs主要参与细胞发育、细胞骨架组织等功能，主要富集在PI3K-Akt信号通路、GnRH信号通路等，并筛选出与卵母细胞成熟（TSC2）、细胞骨架（NUDC）、细胞活力（MAFK）等相关的基因。上述结果，可为提高GV卵母细胞玻璃化冷冻效率奠定信息基础和研究方向。