抗冷冻蛋白Ⅲ对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的影响

【目的】探索抗冷冻蛋白Ⅲ(antifreeze proteinⅢ,AFPⅢ)对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的保护作用。【方法】以5～8周龄昆明雌性小鼠为试验材料,将收集的小鼠MⅡ期卵母细胞随机分为空白对照组、冷冻对照组(经过玻璃化冷冻-解冻过程)和AFPⅢ添加组(在冷冻平衡液及冷冻液中均添加500 ng/mL AFPⅢ),利用线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker green, MTG)检测线粒体分布及含量,JC-1荧光染色检测线粒体膜电位,溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker red, LTR)检测线粒体与溶酶体共定位,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平,ATP Assay Kit检测线粒体ATP含量。【结果】与空白对照组相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的线粒体含量显著降低,部分线粒体呈现异常的散点状分布,且线粒体-溶酶体共定位情况明显增多,线粒体膜电位显著降低(P<0.05);同冷冻对照组相比,AFPⅢ添加组的小鼠卵母细胞线粒体含量显著升高,异常分布的线粒体和线粒体-溶酶体共定位情况减少,线粒体膜电位显著升高(P<0.05)。与空白对...     

不同植物生长调节剂对椰枣玻璃化愈伤组织调控的影响

为探究培养基种类、植物生长调节剂等在调控椰枣玻璃化愈伤组织中的作用,以茎尖生长点为外植体诱导产生的玻璃化愈伤组织为供试材料,探索椰枣玻璃化愈伤组织最佳调控方法。试验发现6-BA、2,4-D对椰枣玻璃化愈伤组织有明显的调控效果,经过调控,原玻璃化的胚性愈伤组织恢复生长,并保持增殖能力,过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶、超氧化物歧化酶的含量趋于正常愈伤组织。结果表明：1/2MS+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+50 g/L蔗糖为调控玻璃化愈伤组织的最佳培养基,恢复率可达93.33%。     

大麦胚性悬浮细胞系的快速建立及其超低温保存

 禾谷类作物胚性悬浮细胞系的建立及其超低温保存是现代植物生物技术中的基础工作。本文分析了从大麦成熟胚培养快速建立胚性悬浮细胞系的两个关键步骤。愈伤组织的精心选择直接关系到建立细胞系的难易程度。悬浮培养过程中的细胞学观察可以用来判定2，4-D浓度和继代周期等因子是否需要调整。经过预培养和保护剂处理，用两步法冻存的大麦悬浮细胞能够高频率地恢复生长。在合适的条件下用玻璃化法冻存，TTC相对存活率可达51%，从恢复生长的细胞获得了再生植株。     

3种因素对梅菜试管苗玻璃化的影响

研究了以实生幼苗组织为外植体来源时萌发培养基质、外植体的取材部位、培养容器内的空气环境条件对梅菜(Brassica juncea Coss.var.sp nov)试管苗玻璃化的影响。结果表明：①以实生苗下胚轴为外植体，其再生植株中玻璃化苗的比例与实生苗的萌发培养基质中激素(6-BA NAA)的含量关系密切，激素浓度越高，玻璃苗的比例就越大。②以无激素1／2 MS固体培养基上萌发的实生苗切段为培养材料，下胚轴再生植株的玻璃苗发生率最高，茎尖的次之，子叶的最低。③培养容器封口材料的透气性能、继代间隔时间均直接影响着容器内的空气环境条件，故再生植株的玻璃苗发生率与封口材料的透气性能呈负相关关系，而与继代间隔时间呈正相关关系。梅菜玻璃苗的叶绿素含量比正常苗低，有明显的失绿现象。     

预防组培中蓖麻子叶节玻璃化的研究

为了预防蓖麻子叶节在组织培养过程中的玻璃化现象,以建立其高效的遗传转化体系,本实验对影响子叶节生长状态的几个因素进行了初步研究。结果表明,在胚轴、子叶均为淡黄色的时期切取蓖麻子叶节,接种在1/8MS、内含10g/L琼脂粉、20g/L蔗糖、8.0mg/LZT、1.0mg/LNAA的培养基中进行培养,能有效地预防蓖麻子叶节玻璃化。     

不同抗冻剂对牙鲆胚胎毒性研究以及玻璃化颗粒冷冻保存方法的应用

以牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同发育期胚胎为实验材料,研究了7种渗透性和5种非渗透性抗冻剂对牙鲆尾芽期和心跳期胚胎的毒性,同时对玻璃化液在不同胚胎发育期的毒性作用,以及玻璃化颗粒冷冻过程中,冷冻颗粒降温和解冻的时间进行了研究。结果表明,单一渗透性抗冻剂对牙鲆胚胎的毒性随着抗冻剂浓度的升高、平衡时间的延长而提高,其毒性由大到小依次为乙二醇(EG)、酒精(EtOH)、甘油(Gly)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2-丙二醇(PG)。非渗透性抗冻剂中聚乙烯吡咯酮(PVP)对牙鲆尾芽期胚胎的毒性最强,其次是蔗糖和D果糖,葡聚糖和葡萄糖毒性最弱。在总体积分数一定的情况下,PG、MeOH与DMSO体积比为9∶6∶5的混合抗冻剂对牙鲆尾芽期胚胎毒性最低;各发育期胚胎经过玻璃化液平衡后,尾芽期以前胚胎的成活率随胚胎发育期逐渐升高,心跳期以后逐渐降低,尾芽期和心跳期成活率最高。含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温时间最短为15.09 s,解冻时间最短为6.22 s;而不含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温和解冻时间分别为(13.83±1.86)s和(7.20±0.90)s。将PG、MeOH与DMSO按体积比9∶6∶5配成总体积分数为35%的混合溶液,再添加5%的蔗糖配制成玻璃化液,采用此玻璃化颗粒冷冻方法对173粒牙鲆尾芽期至心跳期胚胎进行超低温冷冻保存,解冻后共获得4粒成活胚胎。     

中华绒螯蟹胚胎的玻璃化冷冻保存

研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)4个不同发育时期胚胎对A号玻璃化液的耐受性和玻璃化冷冻保存。结果表明,不同时期的胚胎对玻璃化液的耐受能力不同,其中卵裂期胚胎对玻璃化液的耐受能力较差(20~30 min),前无节幼体期和原溞状幼体期胚胎在玻璃化液中的适应时间较长(40~60 min);随着平衡时间的延长,中华绒螯蟹各个时期的胚胎成活率逐渐下降。中华绒螯蟹前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,0.25mol/L的蔗糖分别洗脱5、10、15、20 min后,胚胎成活率无显著性差异(P>0.05)。前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻40 min,快速解冻后用0.25 mol/L的蔗糖洗脱10 min,有8个胚胎成活,成活率为(9.3±2.5)%,胚胎培养至第4天死亡;原溞状幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻35 min,经相同浓度的蔗糖洗脱相同的时间,有7个胚胎成活,成活率(11.3±3.6)%,培养至第6天时,1个胚胎孵化出膜,出膜胚胎成活1d后死亡。     

绿巨人组培苗继代过程中玻璃化苗及细菌污染的消除方法研究

绿巨人（Ｓｐａｔｈｉｐｈｙｌｕｍｋｏｃｈｉ）组培苗继代过程中克服细菌污染的主要方式除常规消毒方法外,可预先在培养基中加入一定浓度的抗菌素,从成本、抑菌效果看,以青霉素钠３００ｍｇ／Ｌ的加入量抑菌效果较好,长期在这种培养基上继代无变异苗出现,且再移入不加抗菌素的培养基中培养也无菌产生。克服玻璃化苗产生的主要方法是：降低培养基中的细胞分裂素浓度,ＢＡ浓度以０．５～２ｍｇ／Ｌ较好,适当提高琼脂的浓度及ｐＨ值有利于苗的健壮发育,并减少玻璃苗的发生率;为了预防玻璃苗的产生,最佳琼脂浓度与ｐＨ值的组合是琼脂０．６％、ｐＨ６．４;琼脂０．７％、ｐＨ５．７～６．０;光照以单方向照射、光强度８００ｌｘ为好,上下两个方向同时光照不好。     

花楸组织培养中玻璃化现象的发生与防治

以花楸(Sorbus pohuashanesis (Hance) Hedl)幼胚为外植体,对不定芽诱导、增殖和腋芽增殖过程中玻璃化现象的发生和防治措施进行了研究.结果表明:培养基种类和激素质量浓度是导致玻璃化现象的2个主要原因.在花楸组织培养中MS和WPM是理想的培养基;在不添加任何激素的MS和WPM培养基上,添加琼脂7g/L,并用带透气孔的封口膜封口,绝大部分玻璃化苗可逆转为正常的健壮苗,而且在WPM培养基上,玻璃化苗在逆转为正常苗的同时有60%～80%的茎芽基部长出辐射状根.     

猪未成熟卵母细胞玻璃化冷冻的研究

研究了乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)和甘油(GLY)这4种渗透性冷冻保护剂及其两两组合对玻璃化冷冻未成熟(GV期)猪卵母细胞的影响;比较了3种不同冻前预处理方法和2种不同的解冻方法.结果表明:EG组卵母细胞所取得的成熟率为12.90%,与DMSO组(8.62%)及EG和DMSO混合组(9.61%)差异不显著(P＞0.05),但明显好于其他各组(P＜0.05);6步预处理法和3步预处理法所取得的卵母细胞存活率和成熟率显著高于1步预处理法(P＜0.05),成熟率分别为12.33%和11.11%;3步和4步解冻法取得的成熟率要显著好于1步解冻法,成熟率分别达12.70%、10.47%.