胚胎玻璃化冷冻的实验研究

用小鼠胚胎分别在甘油、丙二醇、乙二醇不同浓度比例的10组玻璃化1液中平衡,每组均分室温和低温平衡,共20个组合。研究表明,提高甘油浓度、降低丙二醇及乙二醇浓度,可明显提高玻璃化冷冻后的胚胎体外培养发育率。低温平衡优于室温平衡。15%甘油 5%丙二醇 5%乙二醇的PBS液,是较为理想的第1冷冻液组合。室温平衡的培养发育率为37.5%（18/48）,低温平衡的培养发育率为71.4%（30/42）,差异极显著（P<0.01）;采用2步低温平衡,优选上述第1冷冻液,玻璃化冷冻200枚小鼠胚胎,解冻后培养至膨胀发育率为82.5%（165/200）。     

3种冷冻方法对猪MⅡ期卵母细胞线粒体分布和损伤的影响

本研究旨在探讨3种冷冻方法对猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻后线粒体的分布和超微结构变化的影响.通过透射电镜、Rhodamine-123 (R-123)荧光染色和体外发育观察,结果显示,(1)无论是FDA-DAPI复染存活率,还是孤雌激活卵裂率,CLV (Cryoloop vitrification)法(72.00%,7.22％)效果最好,OPS(Open Pulled Straw)法(60.00％,4.85％)次之,straw法(42.22％,0％)最低；(2)CLV法经R-123染色后,卵母细胞线粒体的正常分布率(52.24％)要比其它2组要高(OPS,48.65％；straw,37.68%),但三者之间没有显著差异(P＞0.05)；(3)透射电镜超微结构表明,冻后卵母细胞线粒体变得粗糙和模糊,有的线粒体嵴减少甚至消失.结果表明,冷冻过程中卵母细胞线粒体的分布和形态损伤严重,CLV法可提高冷冻速率,增强冻后卵母细胞的发育能力,降低冷冻造成的卵母细胞线粒体异常分布比例.     

741杨和苹果试管苗玻璃化现象及其转化研究

以７４１杨和苹果矮化砧Ｍ２６和Ｍ７为材料，研究了影响７４１杨试管苗玻璃化现象的因素。除培养基中ＢＡ和ＩＢＡ的浓度、琼脂浓度外，光强和温度组合是影响试管苗玻璃化现象的重要因素。７４１杨试管苗玻璃化与其内源ＡＢＡ水平有关。７４１杨无根试管苗的玻璃化率和器官分化能力存在季节变化，春季和夏季较强，冬季较弱；７４１杨无根试管苗的内源ＡＢＡ含量则是春季和夏季低，冬季高。无根正常试管苗ＡＢＡ含量为无根玻璃苗的５．５９倍。苹果无根玻璃化试管苗如在其培养基中加入低浓度（Ｏ．１～０．５ｍｇ／Ｌ）ＡＢＡ，或在较强的光照条件下培养，可以转化为无根正常试管苗，并能正常进行继代和生根。     

水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存

以水牛MII期的卵母细胞为材料,利用玻璃化冷冻液EDS33(16.5%EG+16.5%DMSO+sucrose)对水牛MII期的卵母细胞进行两步法(玻璃毛细管(GMP)和拉细的开口塑料细管(OPS))玻璃化冷冻保存,即卵母细胞首先放入预平衡液(7.5%EG+7.5%DMSO+sucrose)中平衡3 min,再移入玻璃化冷冻液中30 s后装管直接投入液氮.解冻是在蔗糖浓度逐渐降低的解冻液中进行的.解冻后存活的卵母细胞孤雌激活,通过囊胚发育率作为评定卵母细胞冷冻效果的指标.结果发现,GMP和OPS法冷冻保存的水牛卵母细胞解冻后的存活率(分别为96.80%和97.41%)与对照组卵母细胞的存活率(100%)3者之间差异均不显著(P>0.05).GMP法和OPS法冷冻的水牛卵母细胞激活后的胚胎分裂率和囊胚发育率2者均明显低于对照组(分别为30.58%和28.32% vs50.94%,10.81%和9.38% vs 29.63%,P<0.05),而这2种方法冷冻的水牛卵母细胞激活后的分裂率和囊胚发育率差异均不显著(P>0.05).这表明GMP和OPS玻璃化冷冻方法可以用于水牛卵母细胞的冷冻,并且玻璃化冷冻的卵母细胞能继续分裂并发育到囊胚.     

青岛百合包埋-玻璃化法超低温保存技术研究

以青岛百合茎尖为试材,研究了外植体的选择、预培养的蔗糖浓度、预培养时间、包埋预处理方法、PVS2处理时间对百合存活率的影响。结果表明:小鳞茎在4℃冷锻炼培养28d后,剥取2～3mm的茎尖为试验材料,在蔗糖浓度0.4mol/L的MS+100g/L海藻糖+1mg/LABA的培养基上,预培养3d,然后加0.4mol/L蔗糖和2mol/L甘油、3%褐藻酸钠进行包埋预处理,在0℃条件下用PVS2处理60min,投入液氮保存1h,38℃解冻2min、洗涤后转接至恢复培养基上暗培养7d,用TTC检测存活率最高可达到67.5%。     

农杆菌介导转化油菜中几种影响玻璃化频率的因素

在用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的组织培养过程中,常会伴生着试管苗玻璃化现象的发生,此现象的发生会降低转基因的频率.本试验结果表明,影响玻璃化发生的因素较多,包括激素体积质量分数、蔗糖体积质量分数、琼脂体积质量分数和接种密度等.其中,激素6-BA和ZT体积质量分数对诱芽率和玻璃化率都有显著影响,随着体积质量分数的升高,玻璃化率升高,以6-BA体积质量分数为1mg/L,ZT体积质量分数为2mg/L时结果较为理想.蔗糖体积质量分数和琼脂体积质量分数对玻璃化率也有显著影响,当二者体积质量分数升高,玻璃化率降低,同时诱芽率也降低.综合分析,当蔗糖体积质量分数为50g/L,琼脂体积质量分数为10g/L时最适宜.接种密度对玻璃化的发生有显著影响,密度越高,玻璃化倾向越严重,而密度对诱芽率影响不明显.试验结果分析发现,接种密度为20～30个/皿最适宜.     

毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻保存牛卵母细胞的研究

为了探讨毛细玻管玻璃化冷冻法(GMP)对牛卵母细胞冷冻效果的影响,试验采用毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻不同发育阶段的牛卵母细胞,并且对不同预处理方式和玻璃化时间对玻璃化冷冻牛卵母细胞解冻后形态及体外受精卵裂率的影响进行了比较.结果表明:采用毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻GV期和体外培养6 h、18 h、22 h各发育阶段的卵母细胞,解冻后体外受精后卵裂率分别是36.67%、40.98%、41.27%、52.38%,前三者之间差异不显著(P>0.05),前三者与培养22 h卵母细胞(52.38%)和对照细胞(68.42%)差异极显著(P<0.01);采用不同浓度的稀溶液预处理卵母细胞,3%乙二醇稀溶液预处理玻璃化前牛卵母细胞可分别获得较高的卵裂率(36.96%);卵母细胞在玻璃化溶液中暴露时间越长受到损伤越严重,暴露30 s能获得最好的玻璃化冷冻效果.     

无籽西瓜离体培养中玻璃化现象的研究

在无籽西瓜离体培养中，培养基中较高的氨态氮／磷态氮比例，ＢＡ浓度过高，琼脂和蔗糖浓度地以及高温，弱光的培养条件均可导致玻璃化苗的增加，在培养基中的添加青霉素（６０ｍｇ．Ｌ＾－１）和氯化胆碱（３００ｍｇ．Ｌ＾－１）均可有效的抑制玻璃化苗的发生。     

卵巢玻璃化冷冻保存研究进展

卵巢玻璃化冷冻是一种操作简单、冷冻效果好的卵巢组织冷冻降温技术,对动物繁殖能力保存、物种保护、生物多样性保存,以及动物胚胎工程和人类临床医学研究与应用等具有重要意义。卵巢组织冷冻保存较卵母细胞冷冻保存,具有明显的优点。在冷冻保护剂的选择、冷冻材料、冷冻平衡及冷冻方法上都有其特殊之处。卵巢组织冷冻保存技术已在人类医学临床上发挥其应用价值。     

牛体外受精胚胎的玻璃化冷冻及一步脱防冻剂的研究

在过去的１０年中,体外受精技术进展很快,目前已可以利用该技术在实验室内大批量生产牛胚胎。研究简单、有效的冷冻方法无疑会加速体外受精胚胎在生产中的推广应用。玻璃化冷冻法由于操作简便,可以快速冷冻胚胎而日益受到重视。过去的研究已证实,用２５％乙二醇＋２５...