棉花RNA的快速提取方法

目前已发展的从植物中提取RNA的方法有多种.但由于棉花中次生物质含量较高,因此有些方法并不适合于棉花RNA的提取.本文介绍经过反复实验后改进的棉花RNA的提取方法,它具有快速、简单等特点.     

动边界同心环状缝隙流研究

为完善同心环状缝隙流理论,采用理论分析与模型试验相结合的方法,分析了圆柱体从静止到起动再到运行过程中同心环状缝隙流速的分布特点。得出圆柱体的速度、缝隙宽度以及流量对环状缝隙流的分布和大小的影响。环状缝隙流速随缝隙宽度的增大呈现先增大后减小的趋势,缝隙宽度约在2 cm附近时,缝隙流速最大;流量越大,环状缝隙流速就越大;圆柱体的速度越大,缝隙流速也越大;环状缝隙流速在与管内水流速度和圆柱体速度相交之前最大,相交之后最小。同时建立了动边界条件下的同心环状缝隙流数学模型,计算结果与试验基本一致,最大相对误差不超过8.5%,说明该数学模型可行。     

利用shRNA真核表达载体干涉雌性鸡胚性腺中芳香化酶基因(CYP19A1)的表达

本研究通过把构建的短发夹结构RNA(shRNA)真核表达载体导入鸡胚,检测鸡胚性腺分化期质粒载体在鸡胚体内代谢情况及雌性鸡胚性腺中芳香化酶基因(CYP19A1)mRNA表达效率,进而探讨利用该方法在鸡胚体内进行特定基因干涉的可行性.实验针对CYP19A1基因构建了4条特异性表达载体,一条非特异性表达载体.每个实验组选取45个新鲜种蛋作为实验材料进行胚盘下腔注射,并设立空白对照组.鸡胚发育12d时,检测各处理组鸡胚肝脏组织中质粒存在情况,并取其左侧性腺组织进行目标基因的荧光定量分析.研究结果表明,导入组在12日胚龄时所有鸡胚基因组中均可检测到绿色荧光蛋白基因(EGFP);荧光定量结果显示,导入特异性表达载体cyp-580、cyp-1083和cyp-1295后,对应雌性鸡胚性腺CYP19A1 mRNA表达效率显著低于空白对照组,干涉效率分别为:73％、52％和85％;特异性表达载体cyp-1403组CYP19A1mRNA表达效率与空白对照组相比有所降低但无显著性差异.本实验为诱导鸡胚性反转提供了新方法并建立了鸡胚发育期特定基因体内干涉新平台.     

非生物胁迫下青花菜LncRNA内参基因的筛选

长链非编码RNA在植物抵御逆境胁迫中起着重要作用。适宜的内参基因是准确评价其表达水平的基础。本研究利用实时荧光定量PCR技术检测16个青花菜LncRNAs表达水平,并通过geNorm、NormFinder、BestKeerper软件进行表达稳定性分析。结果表明：青花菜的16个LncRNAs在不同逆境胁迫下表达稳定性存在差异。其中在弱光胁迫条件下, XLOC_000400表达最稳定;在低温胁迫条件下 XLOC_030832基因稳定性最好;在干旱和渍水胁迫条件下最稳定表达的内参基因分别是 XLOC_007087和 XLOC_012179;高温和盐胁迫处理下最稳定表达的内参基因均为 XLOC_007980。 XLOC_010342和 XLOC_007980在青花菜不同逆境胁迫下的表达稳定性较好。研究结果可为准确定量青花菜不同逆境胁迫下的LncRNAs提供合适的内参基因。     

侵染绿花椰菜的黄瓜花叶病毒（CMV）研究

从杭州市郊菜园表现严重花叶、矮化症状的绿花椰菜病株上获得一病毒分离物Ｃ－９３１。汁液摩擦接种６科２１种植物，Ｃ－９３１可侵染其中的６科１９种；体外抗性测定表明Ｃ－９３１的稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２），致死温度（ＴＩＰ）为５５－６０℃，２５℃体外存活期（ＬＩＶ）为４ｄ；提纯病毒粒体球形，平均直径２８ｎｍ；在琼脂双扩散反应中Ｃ－９３１能与ＣＭＶ抗血清呈阳性反应；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其衣壳蛋白亚基分子量为２９ｋＤ；用ＣＦ－１１纤维素柱提取受侵植物组织中ｄｓＲＮＡ，电泳鉴定表明共有５个核酸组分，长度（ｋｂ）分别为３．３，３．０，２．２，０．９和０．３５．根据上述性状，Ｃ９３１被鉴定为黄瓜花叶病毒，且该分离物含卫星ＲＮＡ。     

犊牛血液RNA含量用作奶牛遗传标记的研究

本研究采用作试验改进的脲－酚－氯仿－醇－ＳＤＳ系统方法，对江西畜牧良种场奶牛一分场的黑白花奶牛群的５头公牛家系的１９１对母女牛进行了血液ＲＮＡ的测定，分析了被测奶牛血液ＲＮＡ含量的变化的规律性及其与产奶量的关系，建立了利用血液ＲＮＡ含量估测产奶量的回归方程。测定分析结果：试验牛血液ＲＮＡ遗传力（ｈ＾２）及其与产奶量的遗传相关（ｒＡ）分别为０．８５５８（Ｐ〈０．０５）与０．５８１７（Ｐ〈０．０５）     

落叶松RNA提取方法对比研究

以华北落叶松(Larix principis—rupprechtii Mayr)为试材，采用2种RNA提取方法，同时做了初提总RNA纯化对比试验，通过琼脂糖凝胶电泳和紫外光检测得到RNA的完整性和提取纯度，并计算RNA收率。试验结果表明，采用Concert试剂法提取和DNA酶提纯法纯化能够高效地从华北落叶松组织中分离获得纯度高、完整性好的RNA样品。     

瘤胃微生物蛋白质合成测定方法的研究

采用不完全拉丁方设计约５头装有瘤胃和真胃兼管的绵羊锔喂７种不同日粮，其日粮中加入三氧化二铬和聚乙二醇作真胃食糜标记物，当用核糖核酸作瘤胃微生物蛋白质合成标记物时，测定每千克瘤胃表观可发酵有机物和瘤胃表面可发酵碳水化合物合成瘤胃微生物蛋白氮的效率分别是２６．９６ｇＭ－Ｎ／ｋｇＦＯＭ和２７．３６ｇＭ－Ｎ／ｋｇＦＣＨＯ；用２，６二氧基庚二酸作标记物时，测定值相应微生物蛋白氮的效率为２６．９０和２６．９７     

双链RNA分析技术在鉴定RNA病毒中的应用

ｄｓＲＮＡ技术是以无ＲＮＡ病毒或类似病毒因子侵染的植物组织中不含有容易鉴定的同原大分子的ｄｓＲＮＡ（＞０．１×１０６）存在为前提。在植物体内ｄｓＲＮＡ是ＲＮＡ病毒和类病毒因子存在的迹象，ｄｓＲＮＡ包括ｄｓＲＮＡ病毒的基因或ｓｓＲＮＡ病的复制中间型。ｄｓＲＮＡ在寄主组织相当稳定，可以用物理和化学的方法分离出来。叙述了ｄｓＲＮＡ技术用于植物病毒群、成员、同一病毒的不同株系、感染作物的新病毒及其复合侵染、类病毒、卫星病毒等的鉴定。证明该方法使用广泛、快速准确，不需要贵重设备，在一般实验室中即可进行。该方法有重要应用和学术价值，已引起植物病毒和植物病理学工作者广泛兴趣。     

苹果梨花芽分化期核酸代谢规律的研究

采用生化测定的方法对苹果梨花芽分化的核酸代谢进行了研究，结果表明：花芽生理分化期核酸总量高，RNA高于DNA，RNA／DNA比值高，其核酸代谢模式为：RNA双峰，第1峰大于第2峰，DNA单峰，在RNA双峰之间，RNA／DNA呈双峰，蜂值出现时间与RNA双峰相同，第1峰远大于第2峰；花芽形态分化过程中，RNA和DNA变化动态相似，一直处于较高水平且呈增加趋势，RNA高于DNA，雄蕊和紫蕊分化期含量最高，形态分化结束时降至最低。