反向遗传操作技术在流感病毒研究中的应用进展

流感病毒属于正粘病毒科,流感病毒属,为单股、负链、分段的RNA病毒。按照病毒核蛋白和基质蛋白的不同可分为A、B和C三个型。A型流感病毒又可根据病毒粒子血凝     

猪卵泡颗粒细胞总RNA提取方法改进的探讨

RNA是一类非常有用的生物大分子,在分子生物学研究领域正发挥越来越重要的作用。本文介绍一种改进过的从动物组织提取总RNA的方法,实践证明,该方法重复性好,实用性强。用此方法提取的猪卵泡颗粒细胞总RNA,无DNA污染物等问题,完全满足分子克隆、基因表达等分子生物学研究的需要。     

表达抗流感病毒基因重组慢病毒滴度测定及感染效率分析

分别将靶向禽流感病毒(AIV)多靶点siRNA和鸡Mx基因克隆到p201慢病毒表达载体,采用鸡β-actin启动子替换p201慢病毒载体CMV启动子构建重组慢病毒载体p201-β-Mx-siRNA。并将其与辅助包装质粒共转染293T细胞,72h后收集细胞上清,实时荧光定量PCR测定重组慢病毒(rLV-MX-siR-NA)与对照组重组慢病毒(rLV-GFP)CT值,两者比较确定rLV-MX-siRNA滴度。rLV-Mx-siRNA以MOI=4感染猪胎儿成纤维细胞(PEF)并传代培养,提取后代细胞RNA检测外源基因转录以及应用间接免疫荧光试验检测鸡Mx蛋白的表达。结果表明,rLV-Mx-siRNA浓缩后滴度与已知滴度的rLV-GFP相等,为2×108 TU/mL,感染PEF效率>95%。感染rLV-Mx-siRNA的细胞传至第5代和第10代检测到外源基因转录以及鸡Mx蛋白的表达。表达鸡Mx基因和靶向AIV多靶点siRNA重组慢病毒滴度的测定与感染效率的分析,其结果为研究抗AIV转基因猪及其抗AIV的体外评价奠定了基础。     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎的诊断与防治

Ⅰ型鸭病毒性肝炎俗称背脖病,病原为Ⅰ型鸭肝炎病毒,属小RNA病毒科。主要感染三周龄以内的雏鸭,其中一周龄以内的雏鸭最易感染。该病具有高度接触传染性,可通过空气（气溶胶）传播的高致病性雏鸭常见病,虽然没有任何公共卫生意义,但给养鸭业带来一定的损失。本文就鸭病毒性肝炎的发病机理、临床诊断以及防治方面进行简述。     

宿主Ncor1基因沉默对VSV复制的影响

核受体共抑制因子1(NCOR1)组织分布广泛,可调节基因转录。前期研究表明,与NCOR1功能密切相关的转导蛋白(β)样1X连接受体1(TBL1XR1)在水疱性口炎病毒(VSV)复制进程中发挥促进功能。为明确NCOR1因子在VSV复制增殖过程中的作用及机制,首先设计并构建靶向Ncor1的shRNA过表达质粒shNcor1。将shNcor1质粒与骨架质粒共转染293T细胞,获得表达shNcor1的慢病毒颗粒。用慢病毒感染小鼠巨噬细胞(RAW264.7)并构建Ncor1基因沉默细胞系。VSV分别感染Ncor1沉默与对照细胞系后,通过Q-PCR和TCID₅₀检测VSV的转录、复制水平。结果表明,Ncor1基因沉默能抑制VSV的转录及复制。此外,当Ncor1基因沉默时,经VSV诱导的干扰素相关基因Ifit1及Ifit2的转录水平显著升高,提示NCOR1对病毒复制的调控与干扰素信号的激活相关。本研究从宿主细胞出发为阐明VSV的致病机制提供了新的思路。     

绵羊精子RNA提取方案的优化

为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子RNA回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法提取绵羊精子RNA,检测RNA的浓度、纯度和完整性,将RNA反转录为cDNA,PCR扩增PRM1基因(编码鱼精蛋白1)和CDH1基因(编码上皮细胞钙黏蛋白),验证所提取的RNA是否受体细胞RNA和基因组污染。结果表明：用Percoll密度梯度法纯化绵羊精液较PBS直接洗涤法能更好地去除精液中的体细胞,但精子回收率低。Percoll+PBS密度梯度离心法纯化后精子提取的RNA较PBS直接洗涤法纯度较高,但浓度较低;TRIzol(65℃)法提取的精子RNA较TRIzol(65℃)+试剂盒法浓度较高,但纯度较低。两种精液纯化方法(Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法)结合两种精子RNA提取方法[TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法]获得的精子RNA均能检测到PRM1...     

生猪脓包化脓隐秘杆菌的分离鉴定与防控分析

为了解猪场生猪体内外脓包形成的原因,文章从3个规模猪场采取了不同部位脓包的脓汁样品,并进行细菌分离与16Sr RNA基因的测序分析。结果,从4个保育猪颈部皮下脓包、1个生猪肿大的耳朵、1头保育猪肝脏和脾脏发脓灶分离到大量纯的化脓隐秘杆菌,从1个保育猪颈部脓包分离到化脓隐秘杆菌的同时还分离到了葡萄球菌。通过猪场情况调查结合细菌分离结果,发现生猪体内外脓包的形成,主要是由于化脓隐秘杆菌感染引起,但饲养管理不佳,猪场内环境卫生差可能是生猪体内外脓包形成的重要促进因素。     

抗流感病毒药物研究进展

季节性和爆发性流感引起了高发病率和死亡率,不仅严重危害人体健康,还影响社会稳定和经济发展。目前对抗流感的主要措施是预防接种,然而流感病毒变异速度非常快,使得现有的疫苗对新变异的流感病毒无效或者预防效果不好。因此,抗病毒药物的研究显得非常必要,而被深入研究的流感病毒的生命周期和病毒结构蛋白也推进了抗流感病毒药物设计的进展。本文将对抗流感药物设计靶向进行概述,旨在为今后研究开发出更高效、更理想的多靶向抗流感病毒药物提供借鉴。     

外泌体中miRNA与糖尿病发生发展关系研究进展

糖尿病是一种血糖异常升高的慢性代谢性疾病。各器官之间的沟通协调是维持葡萄糖稳态的核心,了解器官之间的相互沟通协调方式能够更好地了解糖尿病发生机制,并找到更精确的防治靶点。最近研究表明,外泌体(Exos)中的miRNA可以在基因水平上实现细胞间的信息交流,从而调节不同组织中的基因表达,参与糖尿病的发生发展。还可为糖尿病患者的早期诊断提供新的生物标志物,从而有助于采取及时有效的治疗措施,并将有助于更加深入地了解糖尿病的疾病发生机制。论文对近几年有关糖尿病与外泌体中相关miRNA的研究进行总结,以帮助更好地了解外泌体中的miRNA在糖尿病发生发展中的确切作用。     

靶向cofilin2基因RNAi对鸭病毒性肠炎病毒增殖的影响

旨在探讨cofilin2基因的表达在鸭病毒性肠炎病毒(DEV)增殖过程中的影响.本研究通过已获得的鸭源cofilin2全基因序列(GenBank登录号:MF434775),设计出4对shRNA序列,插入载体中,并转染到鸭胚成纤维细胞中,经FQ-PCR方法和荧光显微镜观察筛选出具有较高干扰效率的shRNA序列,用干扰效率...