中国部分地区2005－2007年猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因和Nsp2基因遗传变异分析

 【目的】为分析2005－2007年间中国部分省区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前PRRSV流行毒株现状。【方法】应用病毒分离方法从中国4个省份在2005－2007年间采集的81份疑似蓝耳病病料中分离到36株猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用RT-PCR方法对36株PRRSV现地分离株的ORF5基因和Nsp2基因进行扩增和序列分析。【结果】36株现地分离株均属于美洲型 PRRSV,ORF5基因全长均为603 bp,未发现有基因缺失或插入,编码约200个氨基酸,分离株推导氨基酸序列变异主要发生在9～39位;36个分离株中有15株PRRSV Nsp2基因全长为2 940 bp,21株PRRSV Nsp2基因全长为2 850 bp;发生Nsp2缺失的PRRSV在Nsp2基因第481位、532～560位发生了不连续缺失,共缺失30个氨基酸。与GeneBank中收录的14个PRRSV ORF5、Nsp2基因进行核苷酸及氨基酸序列比较和分析,系统进化关系显示,除B02-2005株可能与疫苗株有关外,多数现地分离株与Ch-1a株遗传距离较近,不同年份分离到的毒株与早期PRRSV分离株的同源性逐年降低。【结论】根据氨基酸变异情况对PRRSV现地分离株进行亚群聚类分析,发现36株现地分离株分别归属于以VR-2332为代表的4亚群,以BJ-4为代表的1亚群和以Ch-1a为代表的２亚群。进化关系表明PRRSV ORF5、Nsp2基因及其推导的氨基酸序列均发生了较大变异,不同地区PRRSV分离株的遗传关系存在交叉现象,地域特征不明显。     

猪无名高热病中PRRSV的RT-PCR检测(简报)

为检测2006年在江西、湖北和湖南爆发的无名高热病是否由PRRSV引起,根据GenBank中登录的PRRSV(登录号:AF046869)ORF5序列设计引物,用RT-PCR方法对江西、湖北、湖南采集来的9份病料(包括肝脏、脾脏、血液)进行检测,并分析其与PRRSV ORF5序列的同源性.结果表明:所有病料中均检测出PRRSV,且3省的PRRSV的ORF5序列同源性高达95%以上,但与已发表的PRRSV ORF5的同源性只有88%左右,说明PRRSV和猪的无名高热病紧密相关,且产生了较高的变异.     

强化种公猪生物安全措施避免引进PRRSV变异株病原

猪繁殖与呼吸综合症（Poreine Reproductive And Respiratory Syndrome,PRRS）,又称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合症病毒（Porcine Reproductive And Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）感染引起的高度免疫抑制病。PRRS自1987年美国报道以来,已逐渐成为困扰世界各国养猪业的重要疾病,是集约化养猪生产中疫病控制的重点和难点。     

猪繁殖与呼吸综合征河南毒株Henan-1的分离及其NSP2、ORF3、ORF5的序列分析

将2007年1月河南省某猪场送检的疑似高热病病料处理后接种于Marc-145细胞,出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变.根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物,RT-PCR扩增目的基因并将其克隆入pMD18-T载体进行测序.并与国内外已发表的毒株的序列进行比较.结果表明:分离毒株Henan-1是美洲型PRRSV,而且NSP2基因发生30个AA的不连续缺失;Henan-1的NSP2、ORF3和ORF5基因与JXA1、JX0612、HZ-X、HB-1(sh)、CH-la、HB-2(sh)、SP、ATCC VR-2332、Henan-HN1、Resp PRRS/Repro MLV、PA8、BJ-4等毒株等位基因的核苷酸同源性分别为83.0%～99.0%、88.3%～99.2%、88.6%～99.5%,推导的氨基酸同源性分别为66.7%～97.9%、84.7%～98.8%、87.1%～99.5%;而ORF3和ORF5基因与LV4.2.1等位基因核苷酸同源性分别为64.7%和64.2%,推导的氨基酸同源性分别为56.7%和61.0%.基因系统发育树分析表明:Henan-1与JXA1、JX0612株的亲缘关系很近,与HB-1(sh)亲缘关系较近,与HZ-X、CH-1a、HB-2(sh)、SP、RespPRRS/Repro MLV等毒株处于不同的分支.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体的制备与免疫学特性测定

利用重组真核质粒pcDNA3-GP5免疫BALB／c小鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0融合,经间接ELISA筛选和3次有限稀释法克隆,得到3株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株,分别命名为4C9、5D10、5F12,其中5D10的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液抗体的效价为1：64～1：1024,腹水的效价为1：3200～1：10240,IFA和IPMA的检测结果均为阳性。Western-blot检测证明,这3株McAb均针对PRRSV的GP5蛋白。中和试验表明,5D10和5F12具有病毒中和活性,中和效价分别为1：40和1：80。5D10相对亲和力大于5F12,3株细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体,表明抗GP5蛋白中和性McAb制备成功。     

猪流感的综合控制

其他任何疾病都没有像猪流感这样发病迅速、病情急剧的。所以．可根据猪群的临床表现作出可靠的判断。最可靠的诊断方式是用棉签作鼻腔或喉部涂样，在试验室进行培养分离鉴定。急性发病的情况下病情急剧．迅速蔓延到各日龄的猪群，其他疾病的暴发不会这样迅速、广泛。但如果该病转为地方性，则容易和其他病毒感染产生混淆．如猪繁殖呼吸综合征、呼吸道冠状病毒、伪狂犬病和猪丹毒等。     

Sn受体N端V-set结构域和CD163受体SRCR5结构域在PRRSV-ADE感染中的作用

为了研究Sn受体N端V-set结构域和CD163受体SRCR5结构域在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)抗体依赖性增强作用(ADE)感染中的作用,对2种结构域蛋白进行表达、纯化,并免疫大白兔制备其特异性多克隆抗体IgG。应用制备的抗Sn-N-V-set IgG、CD163-SRCR5 IgG和正常兔IgG分别封闭PAMs细胞,然后使用猪抗PRRSV IgG与PRRSV悬液混合后制成的感染性免疫复合物感染已封闭的PAMs细胞。感染后每隔12 h收集细胞上清液1次,用已建立的实时荧光定量RT-PCR方法测定PRRSV的RNA拷贝数,同时以Marc-145细胞测定PRRSV的病毒滴度。结果显示,当Sn受体N端V-set结构域和CD163受体SRCR5结构域被其特异性抗体封闭后,能够显著抑制体外PRRSV感染PAMs细胞的抗体依赖性增强作用(ADE)(P<0.01)。结果表明,2种受体结构域均参与PRRSV-ADE感染。     

规模化猪场主要疫病病毒抗体水平的监测与分析

本调查旨在了解当前苏中地区规模化猪场猪瘟(Classic Swine Fever, CSF)、猪口蹄疫(Food and Mouth Disease, FMD)、猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)、猪圆环病毒(Porcine Circovirus, PCV)疫苗免疫水平。收集泰州、扬州、南通、盐城四个地区22家规模化猪场妊娠母猪(497份样品)和保育仔猪(1060份样品)血清,采用ELISA法对血清CSFV、FMDV、PRRSV和PCV-2抗体水平进行监测。结果显示妊娠母猪CSFV、FMDV、PRRSV和PCV-2平均血清抗体阳性率分别为83.70%、86.72%、85.11%和81.29%,保育仔猪CSFV、FMDV、PRRSV和PCV-2平均血清抗体阳性率分别为84.34%、92.08%、90%和72.17%,均超过我国强制性疫苗免疫抗体阳性率标准70%。从整个猪群来看,该地区使用的四类疫苗及免疫手段均能发挥较好的免疫保护作用。     

猪瘟病毒C株重组标记疫苗的构建

利用构建的猪瘟病毒C株感染性克隆作为骨架,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因作为标记基因,将GP5基因引入猪瘟病毒感染性cDNA中,体外转录得到RNA,转染SK6细胞后,检测了传代细胞中重组猪瘟病毒包含GP5区段的一段重组序列。结果表明,GP5基因稳定地插入在重组病毒基因组中,改造后的重组病毒可望作为C株活病毒标记疫苗。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的调查

对江苏省部分猪场中猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪瘟(CSF)混合感染情况进行了调查.结果显示:PRRS/CSF混合感染的阳性率为9.7%,表明江苏省猪群中PRRS/CSF混合感染普遍存在,并且不同猪群发病情况不尽相同.专门育肥的猪场阳性率较高,为15.2%;保育猪(10.0%)和育肥猪(13.2%)阳性率高于哺乳仔猪(6.0%)和繁殖母猪(4.0%);未免疫PRRS疫苗的猪场阳性率为12.7%,明显高于免疫猪场(5.3%).