Establishment of Digital RT-PCR Assay for Detection of Swine Influenza Virus H3N2 Subtype

A new assay for the detection of swine influenza virus (SIV) was developed with a novel nucleic acid probe——Molecular beacon in this study. The specific primers and molecular beacon probes were designed according to the conserved region of H3 and N2 genes of SIV H3N2 subtype. A digital RT-PCR assay was developed for detection of SIV H3N2 subtype. The results showed that SIV H3N2 subtype could be identified simultaneously on this microarry with high sensitivity and reproducibility,which could reach to 10⁶ dilute viruse. The conclusion was that the digital RT-PCR method could analyze quantitatively the RNA templates.On the identification of H3N2 SIV,the digital RT-PCR method was much more scientific than Real-time quantitative PCR method.     

H1、H3亚型猪流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、准确地检测H1和H3亚型猪流感病毒（swine influence virus,SIV）的方法,根据H1和H3亚型SIV血凝素（hemagglutinin,HA）基因保守序列,分别设计2对特异性引物和2条TaqMan探针,建立双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法敏感性高,可检测到最低拷贝数为10²拷贝/μL;重复性良好,重复孔Ct值的变异系数均在5%以下;特异性好,除H1和H3亚型SIV外,H4、H5、H7、H9亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒检测均为阴性;在田间样品中成功检出1株H1和1株H3亚型SIV,检出率为1.16%。该方法准确、快速、灵敏、特异,可为H1、H3亚型SIV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。     

猪流感与猪感冒在兽医临床上的鉴别和治疗初探

猪流感和猪感冒在临床鉴别中有一定的差异性,分析兽医临床学中猪流感和猪感冒的具体症状,能够有效的控制猪疫病的广泛传播,降低养殖户的经济损失.临床分析中,猪流感与猪感冒所表现的症状是及其相似的,因此会使养殖户对猪疾病的治疗产生混淆,如何对二者进行鉴别和区分是猪养殖业发展中的重点内容.     

猪流感与猪感冒的临床鉴别及治疗

在生猪养殖常见易患疾病中,经常存在无法准确区分猪流感与猪感冒的现象,尤其是在两种疾病多发的季节。如果无法准确判断疾病类型,会出现无法对症治疗的现象,错过治疗的最佳时机。为了解决这一问题,必须充分掌握这两种疾病的发病原因与症状,在疾病发生时及时准确地鉴别疾病种类,尽早采取相应的治疗措施,避免疾病出现大面积传播。本文将对猪流感与猪感冒的临床鉴别及治疗进行探讨。     

春季养猪 安全防病是重点

一、春季话猪病猪传染病有不少在冬春季节发生,最常见的有猪瘟、仔猪副伤寒、喘气病、猪流感、传染性胃肠炎、仔猪黄白痢等。猪瘟、喘气病、猪流感、传染性胃肠炎等由病毒所致,只能用疫苗预防。副伤寒和黄白痢由细菌所致病,可用疫苗预防,也可药物治疗。     

H1N1猪流感病毒血凝素蛋白抗原表位的筛选及其抗原性分析

本研究旨在对H1N1猪流感病毒血凝素蛋白抗原分子的模拟表位进行分离鉴定并分析其抗原性。用抗H1N1猪流感病毒血凝素蛋白小鼠血清IgG对噬菌体随机12肽库进行筛选,3轮亲和筛选后,特异性噬菌体得到了有效富集;对随机挑选的47个噬菌体克隆用ELISA进行鉴定,其中40个为阳性;对40个阳性克隆测序得到3种不同氨基酸序列;用Western blotting对获得的3个不同序列的噬菌体克隆进行抗原性分析,显示这3种噬菌体插入短肽能和H1N1猪流感病毒感染小鼠血清特异性结合。结果表明,本试验获得了3种H1N1猪流感病毒血凝素蛋白模拟抗原表位,它们都具有明显的抗原性,为H1N1猪流感病毒的疫苗研究和诊断奠定了基础。     

疑似猪流感(高热病)诊疗

近年来,猪的“无名高热”、“高致病性蓝耳病”流行广泛,对该病目前没有好的药物和疫苗。河南某猪场曾发生以临床高热症状为特征的疫病,笔者诊为疑似猪流感及个别继发喘气病。经采取综合防治方案,取得良好效果。     

2009畜牧业热点事件扫描 “生猪篇”

<正>1"甲流"肆虐全球,误名殃及生猪业事件回放:2009年4月,墨西哥首发"猪流感"疫情,短时间疫情便开始向全球蔓延。4月29日,世界卫生组织将全球流感大流行警告级别提高到5级,全球拉响"猪流感"警报,一场流感疫情狙击战开始。尽管4月30日世界卫生组织将"猪流感"更名为A(H1N1)型流感,但最初误命名为"猪流     

猪流感病毒NP基因重组复制缺陷型腺病毒的构建与表达

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆至质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Western blotting鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物学活性。重组腺病毒rAd-NP-EGFP经增殖、纯化后其TCID50可达1.26×1010/mL,为进一步研究该重组病毒的免疫原性奠定了基础。     

低温天气猪流感的防治

<正>猪流感是猪的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要通过空气传播,各种日龄猪只均可发生,多发于冬春寒冷与天气突变季节。本病能引起种猪繁殖障碍、育肥猪增重减慢等,也是猪产生免疫抑制的主要诱因,并且继发细菌感染。