不同亚型猪流感病毒双重RT-PCR快速检测

参照已发表的文章合成4对引物,分别能特异扩增出H1、H3、N1和N2片段,应用同时鉴别3个血清亚型H1N1、H1N2和H3N2的双重RT-PCR快速鉴别诊断猪流感的方法。从临床病料中检测出阳性后进行病毒分离鉴定,符合率为100%,表明该方法具有很高的使用价值。     

猪流感——不容忽视的潜在人兽共患病

猪流行性感冒(swine influenza,SI),简称猪流感,是由猪流感病毒(SIV)引起的猪的一种急性、热性和高度接触性呼吸道传染病.临床上以发病突然、病程短、发病率高和死亡率低为特点,全群常常几乎同时感染,如无并发症,多数病猪可于6～7 d后康复,因此常被人们所忽视.但是实际上SI不仅可引起病猪高热、食欲减退、咳嗽、呼吸困难,还可以造成病猪平均日增重降低、怀孕母猪流产,而且极易引起其他病毒和细菌的混合感染,使疫情变得更加严重.需要特别指出的是,SIV在流感病毒的种间传播中具有重要作用,对人类健康造成了很大的威胁.因此,正确认识SI不仅具有重要的经济意义,而且具有重要的公共卫生意义.本文就这方面研究进展做一综述,以更好地预防和控制流感.     

猪流感病毒HIN1分离株HA基因的克隆与序列分析

无锡某猪场发生不同程度的猪呼吸系统疾病。对发病猪采集鼻拭子,经双抗处理后,接种鸡胚,收集24h后死亡的鸡胚尿囊液。对一株具有血凝性的病毒分离株进行RT—PCR鉴别,结果为HI亚型流感病毒。利用RT—PCR扩增尿囊液中的流感病毒HA基因。经pGEM—Teasy载体克隆、序列测定和进化树分析,结果表明,在该猪群中分离获得的该株SIV为古典型H1N1。     

猪流感的诊治分析

在我国,猪是养殖范围最广、养殖数量最多的动物种类,市场需求稳定,经济效益可观。但是在猪的养殖过程中,各种疾病却可能危害到猪的健康、安全与养殖效益,如猪流感等。所以我们应当重视并切实做好对猪流感的诊治,以有效保障猪的养殖效益。本文基于作者多年的工作经验与学习认识,就猪流感的诊断与治疗提出了探讨性建议,以期为广大养殖者防治猪流感提供参考。     

猪流感二价灭活疫苗(H1N1 LN株+H3N2 HLJ株)田间应用效果分析

猪流感(SIV)是由A型流感病毒引起的一种猪的急性呼吸道传染病,发病急、传染性快、发病率高,虽然单纯的猪流感致死率不高,但是其导致的继发感染和隐性损失较大,给猪场经济效益带来严重损失。在我国,保守统计1000头存栏肥猪发生一次猪流感所带来的经济损失每头猪至少增加50~80元饲养成本(欧洲约7英镑)。疫苗免疫是防控猪流感的重要手段,猪流感二价灭活疫苗(H1N1 LN株+H3N2 HLJ株)(以下简称“华感健”)自上市以来,深受国内猪场尤其是规模猪场的青睐,100万头份已在临床猪场应用,现将某集团部分规模场华感健使用效果作总结分析,供读者参考。     

猪流感的流行病学、临床表现、病理变化与防治措施

猪流感是一种急性、传染性呼吸道疾病,是由于感染A型流感病毒而发生。通常在气候突变的晚秋、早春以及寒冷冬季发生,还与猪场引进新猪相关。临床上猪突然出现发病,呼吸困难,咳嗽增多,体温升高,机体衰竭。如果没有继发或者并发感染,往往呈良性经过。由于感染流感病毒毒株不同,加之猪年龄、健康及免疫状态差异等,导致发病轻重程度以及病程持续时间长短存在较大差异,现概述该病的防治措施。     

基因重排H1N2亚型猪流感病毒的分离鉴定和生物学特性的研究

本研究对2005年～2006年广西和海南省疑似猪流感(SD)病猪的组织病料进行了病毒分离,并对分离毒株进行了亚型鉴定和生物学特性的研究.结果显示:分离的3株流感病毒均为H1N2亚型猪流感病毒(SIV).能凝集多种动物的红细胞,但凝集谱与以往报道略有不同;为热不稳定型病毒;在电镜下可观察到典型流感病毒粒子.动物试验显示:小白鼠、大白鼠和家兔对分离毒株不敏感,而豚鼠较敏感.能较好地复制出流感症状和病理变化;本体试验动物仅有轻微的临床症状,但能检测到抗体升高的变化,并能从鼻腔和上呼吸道检测和分离到SIV.核苷酸同源性分析显示:分离毒株Sw/GX/17/05、Sw/GX/13/06和Sw/HN/1/05的血凝素(HA)基因分别与基因重排H1N2 亚型SIV A/Swine/lndiana 9K035/99、A/SW/MN/23124-T/01和A/swine/Zhejiang/1/04的核苷酸同源性最高,分别达97.4%、97.0%和95.7%;神经氨酸酶(NA)基因均与基因重排H1N2 亚型流感病毒A/Trurkey/MO/24093/99 的核苷酸同源性最高,达97.2%～98.0%.核苷酸同源性分析进一步证实了分离毒株为基因重排H1N2亚型SIV.     

分子佐剂C3d增强猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的研究

为了探讨分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响,本研究构建了3种表达不同形式HA的重组质粒,分别为:表达分泌型HA的质粒p-sHA、表达全长HA的质粒P-tmHA和融合表达3拷贝鼠C3d与HA的质粒P-sHA/mC3d3.3种质粒与空载体pCAGGS分别免疫BALB/c小鼠后,采用ELISA和HI试验检测抗体水平.结果显示,免疫后第8周,P-sHA组与P-tmHA组的抗体水平没有明显差别,而P-sHA/mC3d3免疫组的抗体水平显著高于这两组,说明分子佐剂C3d增强了抗体应答水平.淋巴细胞增殖试验及细胞因子检测实验结果显示,免疫后第8周,P-tmHA诱导了更强的淋巴细胞增殖反应和更高水平的IFN-,而p-sHA/mC3d3诱导了更高水平的IL-4,说明HA表达形式的变化影响了免疫反应的类型,C3d与HA融合后通过诱导IL-4的产生而使免疫反应倾向于Th2型.总之,本研究证实3拷贝分子佐剂C3d与分泌型HA融合后显著提高了DNA疫苗诱导的抗体水平.这提示质粒P-sHA/mC3d3免疫可能对接种动物提供高水平的保护,有希望成为抗猪流感病毒的候选疫苗.     

新常态下猪流感的流行病学、诊断、防控新趋势

猪流感(Swineinfluenza,SI)是由正黏病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒(Swineinfluenzavirus,SIV)引起的一种猪的急性、高度接触传染性的群发性猪呼吸道疾病。猪流感具有很强传染性,而且发病比较急,给养猪业造成很大的危害和经济损失,H1N1和H3N2是当前猪流行的最主要的两种血清亚型病毒。猪流感病毒也可感染人类,使人类的生命健康受到了极大的威胁。文章通过分析猪流感的流行病学、诊断、流感疫苗研究进展,并且总结相应的防控新措施。以期引起人们对该病的高度重视,从而建立有效的防疫措施,以减少猪流感给养殖者造成的危害和经济损失。     

H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立

本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验（immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10^2.63 TCID₅₀/100 μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰ H₂O₂的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50 μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪瘟病毒（CSFV）阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1：3 200的HI=2^-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。