猪流行性腹泻病毒 GD12株的细胞传代致弱与驯化

猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）属于冠状病毒成员,为有囊膜的单股正链RNA病毒,可导致以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的肠道传染病。1971年在比利时和英国该病毒被首次报道,之后在很多国家都暴发了该病。我国从1976年开始陆续有猪流行性腹泻（PED）的报道,2010年后我国发生PED大面积流行。为弄清原因和防控的需要,我们于2013年10月在分离鉴定野毒株GD12株的基础上,对其进行细胞传代致弱并研究其生物学特性。     

山羊FATP2基因的克隆及对前体脂肪细胞脂质沉积的影响

旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析,检测FATP2基因在山羊不同组织中的表达差异,并进一步揭示干扰FATP2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳羊(n=12)为试验动物。采用RT-PCR法扩增并克隆山羊FATP2基因,进行序列对比、系统发育树构建及生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测FATP2基因在山羊不同组织中及在山羊肌内前体脂肪细胞不同分化时期的相对表达水平,合成SI-RNA干扰序列并转染至山羊肌内前体脂肪细胞;使用RT-qPCR检测FATP2干扰效率及脂质代谢相关基因的表达情况;通过Bodipy染色法观察干扰FATP2对脂滴形成的影响,利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示,获得山羊FATP2基因序列全长2 335 bp, CDS区1 863 bp, 5′UTR 188 bp, 3′UTR 284 bp;共编码621个氨基酸,山羊FATP2基因在肝脏表达量最高;RT-qPCR检测结果显示,FATP2表达在细胞中被显著干扰;B...     

一株寄生于大黄鱼的盾纤毛虫分子鉴定与系统进化分析

在大黄鱼稚鱼上发现一种可侵入患鱼体表、肌肉、腹腔和脑的盾纤毛虫,为了进一步明确该盾纤毛虫的分类地位,提取患鱼样品总DNA,对该虫株SSU rDNA和线粒体cox1部分序列进行PCR扩增、测序,与GenBank中纤毛虫的SSU r DNA和线粒体cox1序列进行同源性分析并构建系统发育树。结果显示,该盾纤毛虫874 bp的SSU rDNA部分序列与显赫针口虫（Porpostoma notata）同源性最高,相似性为98.97%。在基于SSU r DNA构建系统发育树中与显赫针口虫（P.notata）聚为一支,并独立于嗜污科（Philasteridae）的分支;获得该虫1 086 bp的cox1部分序列,与其SSU rDNA序列相比表现出更大的遗传变异度,在基于cox1部分序列构建系统发育树中,该虫株与嗜污科（Philasteridae）、尾丝虫科（Uronematidae）的分支也有一定距离。综上,该盾纤毛虫应是嗜污目（Philasterida）、针口虫属（Porpostoma）的显赫针口虫（P.notata）或其近缘种。     

RNAi技术在遗传学方面的研究进展

RNA干扰(RNAi)是最近几年发现和发展起来的一门新兴的在转录水平上的基因阻断技术〔1〕。RNAi是由双链RNA介导的,在转录后mRNA水平上关闭相应基因表达的过程,也就是序列特异性的转录后基因沉默(post-transcrip-tional gene silencing,PTGS)。RNAi是生物体中存在的一种普遍现象,     

犬瘟热病毒一步法荧光定量PCR检测方法的建立

为建立犬瘟热病毒(CDV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,根据CDV核衣壳蛋白(NP)基因序列,设计合成2对通用引物和1条通用探针,通过体外转录构建绝对定量标准品RNA。对荧光定量PCR方法的各项条件进行优化,建立CDV荧光定量PCR检测方法,该方法检测灵敏度可达4.02拷贝/μL,比普通RT-PCR方法的灵敏度高出100倍,具有良好的重复性。对犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV-1)、犬冠状病毒(CCV)、犬副流感病毒(CPIV)核酸检测为阴性,具有很好的特异性。研究结果表明,建立的CDV荧光定量PCR方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,为犬瘟热的早期诊断提供了重要的技术支撑。     

RNA干扰技术研究进展及其应用

RNA干扰(RNAi)现象是生物界的一种保守行为，能特异性的抑制同源基因表达，具有维持基因组稳定性和抵抗病毒入侵的作用。作者综述了RNAi的基本原理、作用机制及其应用，并对RNAi在基因治疗上的应用前景进行了展望。     

原位杂交技术展望

1969年美国耶鲁大学Gall和Pardue首先创立了原位杂交技术，确定了爪蟾核糖体基因定位于卵母细胞的核仁中。与此同时，Buongiomo—Nardelli和A maldi John及其同事等相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位。Oah应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针进行了兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交，首次用原位杂交技术检出病毒DNA在细胞中的定位。