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【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA),针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板,对反应体系中的引物浓度比,Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO4、dNTP浓度,以及反应温度和反应时间进行优化;结合一次性核酸试纸条,建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L,引物F3和B3均为0.4μmol/L,探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL;最佳反应... 相似文献
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山茱萸压条繁殖技术中,对母株主干基部约10 cm处实行双环切,在剪除萌条时留桩(0.5~1 cm),可分别提高萌条数100%和89%;新萌发的枝条埋条前对萌条生根部位环切2圈,可提高压条苗生根数57%.埋条后埋土厚度15~20 cm比埋土厚度10 cm的提高生根数2.75倍;埋条时1 a生枝条压埋生根容易,根数比2 a生枝条多32%;在母株定植时,采取深穴浅栽比大穴浅栽和普通栽植时成苗率都高,可以达93%,成苗平均生根数可以达到31条. 相似文献
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选择柠檬酸三钠还原制备胶体金,制备的胶体金粒径为20~40 nm;利用胶体金来标记苯甲酸单克隆抗体,再将BA人工合成抗原(BA-BSA)和羊抗鼠二抗(IgG)分别包被在硝酸纤维素膜的T线和C线处,组装成胶体金免疫层析试纸条,快速检测水产品中苯甲酸。结果表明,单抗的最佳标记量为5.0μg/mL,最佳pH为9.0,复溶液为0.5%的Tween 20、pH为9.0的0.5 mol/L Tris;抗原的最佳包被量为7.0μL,二抗的最佳包被量为9.0μL,胶体金标记抗体量为5.0μL,胶体金免疫层析试纸条的目测检测限为1.0 mg/L。试验对苯甲酸试纸条的重复性、稳定性、假阳性及假阴性率的测试验证,结果良好。该试纸条对甲苯、苯乙酸、苯磺酸、苯丙氨酸等均不发生交叉反应性。将试纸条方法和高效液相色谱法做比较,结果显示试纸条和高效液相色谱法结果一致。制作的试纸条在检测水产品中苯甲酸的测试中是可靠的,检测准确且高效。 相似文献