新生牛睾丸细胞的分离纯化与冷冻保存

以新生牛作为实验动物,取睾丸进行制样组织学观察,并将睾丸消化成单细胞悬液,对生精上皮细胞进行分离纯化、细胞鉴定及冷冻保存,研究不同分离纯化及冷冻保存方法对睾丸细胞的影响。结果表明,新生牛曲细精管中含有精原干细胞和支持细胞,差速贴壁法能有效分离两种细胞;精原干细胞鉴定,AKP、C-kit、OCT-4均呈阳性;支持细胞鉴定,油红O、波形蛋白均呈阳性。精原干细胞冷冻保存以10%的二甲基亚砜为冷冻剂的效果最好,支持细胞冷冻保存以10%乙二醇和0.1 mmol.L-1海藻糖组合效果最好。     

徐淮山羊PPAR基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

研究旨在克隆徐淮山羊过氧化物酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物亚细胞水平定位。采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织PPAR基因cDNA,并构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-PPAR,聚乙烯亚胺(PEI)介导基因转染NIH-3T3细胞,48h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明:首次成功克隆出徐淮山羊PPAR基因的全序列cDNA,大小为1428bp,GenBank登录号为GU082382;构建了融合表达载体pEGFP-C1-PPAR;RT-PCR检测mRNA表达明显;EGFP-PPAR融合蛋白定位在NIT-3T3细胞质中。体外克隆的徐淮山羊PPAR基因cDNA,在单细胞水平上可表达于细胞质中,结果为进一步研究PPAR的生物学功能奠定基础。     

外施硅肥与灌溉方式对草地早熟禾白粉病病情的影响

为探索硅肥与灌溉方式对草地早熟禾(Poa pratensis)白粉病的防治效果,试验通过室内盆栽研究了外施硅肥与根灌对草地早熟禾白粉病病情的影响。结果表明,根灌对草地早熟禾白粉病病害的抵制作用不明显并具分异性;对于患病较重的禾草,根灌会使病情加重。外施SiO2溶液可以显著减轻草地早熟禾白粉病的病情指数和病害程度(P＜0.05)。在试验设定的硅肥梯度(0、31、92、275 mg/m2)内,随着施硅量的增加,病情的减轻愈显著。     

前体饲喂对细胞培养生产紫杉烷的促进作用

研究了前体化合物对中国红豆杉细胞培养生产紫杉烷的影响.0.5 mmol/L 丙酮酸钠使紫杉醇和1β-羟基巴卡亭Ⅰ的产率分别增加236 %和225.8 %.2 mmol/L 3-甲基 -2-丁烯 -1-醇和0.4 mmol/L苯甲酸钠使2α,5α,10β,14β-四乙酰氧基 -紫杉 -4(20),11-二烯产率分别提高218.6 %和245.2 %.1 mmol/L乙酸钠和0.5 mmol/L 丙酮酸钠使14β-2-甲基丁酰氧基 -2α,5α,10β-三乙酰氧基-紫杉 -4(20),11-二烯的产率分别提高193 %和210.4 %.结果表明添加适当浓度的前体有利于紫杉烷的合成.     

犬细小病毒YZ株VP1基因的克隆和真核表达质粒的构建

犬细小病毒(CPV)在分类上属于细小病毒科细小病毒属,可引起犬出血性腹泻和心肌炎,并使白细胞大量减少,症状和猫泛白细胞减少症相似.CPV主要编码两种结构蛋白:VP1和VP2.VP1与VP2的序列基本相同,只是VP1的氨基端比VP2多一段氨基序列,这段序列中含有T细胞识别表位,能够激发机体产生细胞免疫.研究对犬细小病毒YZ株的VP1基因进行了克隆并构建真核表达质粒,为基因免疫奠定基础.     

矮化砧对酥梨石细胞及相关酶活性的影响

为研究不同梨属矮化砧对酥梨果实内石细胞的影响,以酥梨/K30/杜梨、酥梨/OH×F51/杜梨,酥梨/杜梨的果实为测试材料,在果实生长发育时期,对酥梨果实内与石细胞形成的相关酶类苯丙氨酸氨解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性,以及成熟期对酥梨果实内石细胞含量和粒径比进行了测定研究。结果表明:3种梨属矮化砧上的酥梨果实石细胞总含量和石细胞粒径比的排序均为K30OH×F51杜梨。并且3种梨属砧木上酥梨果实的PAL、POD、PPO活性,从盛花后30~120d,整体呈从高到低的趋势,在盛花后30d最高,盛花后60d差异最显著,盛花后90d降低幅度最大。通过相关性分析,各个时期的3种酶活性与最终石细胞含量和石细胞粒径比呈正相关。在果实发育前期,酥梨果实内PAL、POD、PPO活性由高到低排列顺序为杜梨、OH×F51、K30,梨属矮化砧K30和OH×F51酥梨果实内PAL、POD、PPO活性均低于酥梨/杜梨,并且减少了石细胞含量、降低了石细胞粒径比,在改善果实品质方面具有明显作用。     

基于细胞多层介电模型的脉冲电场生物学效应研究

为确定脉冲电场生物学效应的电场参数,从细胞多层介电模型出发,通过研究其等效电路模型在外加电场中生物响应的仿真分析得出植物细胞外膜具有低通滤波特性,内膜具有带通滤波特性。同时对细胞外膜跨膜电压进行时域分析表明频率小于2.83 Hz、电场强度大于69.7 kV/m、ms/μs级脉宽的极低频脉冲电场可以在植物细胞外膜产生可逆电穿孔。采用电场强度为100 kV/m、频率为1 Hz、脉宽为80 ms的极低频脉冲电场处理萌发绿豆种子,在萌发第4 d时,绿豆种子的芽长和根长分别比对照组增加了65.8%和80.2%。     

莪术油注射液体外抗猪细小病毒的试验

制备莪术油注射液,评价莪术油注射液体外对猪细小病毒(PPV)7909标准毒株的作用效果。在PK-15细胞上,通过不同加药方式观察PK-15细胞病变(CPE),用MTT法测定细胞活力。结果在PK-15细胞上,药物最大安全浓度(TD0)为86.4μg/mL,半数感染浓度(TD50)为162.2μg/mL;在药物安全浓度范围内,莪术油注射液对PPV 7909标准毒株的半数抑制浓度(IC50)为1.865μg/mL,半数阻断浓度(IC50)为3.75μg/mL,半数直接杀灭作用浓度(IC50)为81.2μg/mL。结果表明莪术油对PPV 7909标准毒株有明显的体外抑制作用,但直接杀灭作用不明显。     

盐肤木人工林昆虫群落组成及动态研究

采用糖醋酒液诱捕法、简易陷阱法、扫网法定期收集林中的昆虫标本,对云南省盐津县五倍子生产基地的昆虫群落进行调查,分析不同时期盐肤木人工林昆虫的群落结构及动态。结果表明： 7—9月的5次调查,共得到昆虫标本1581号,隶属8目34科60种,其中害虫亚群落占昆虫群落的数量最多,占总数的70.0%,主要有短角外斑腿蝗、黄伪瓢金花虫和绿盲蝽等,天敌昆虫亚群落占18.3%,主要有兰黑栉寄蝇、红铃虫甲腹茧蜂和日本黑瘤姬蜂等;中性昆虫亚群落数量最少,占11.7%,主要有哀弓背蚁等。7月中旬,昆虫群落的Margalef丰富度指数达到最大值,随后呈下降趋势,9月中旬达到最低;Shannon−Wiener多样性指数呈下降趋势,中性昆虫和害虫在8月初多样性指数最高,天敌昆虫8月中旬最高;天敌昆虫的Simpson优势度指数较低且稳定,中性昆虫在8月初达到最高,害虫9月初最高;中性昆虫和害虫的Pielou 均匀度指数在8月初达到最高,天敌昆虫8月中旬最高。研究发现,不同时期昆虫的优势种不同,以害虫和中性昆虫为主。随着时间的变化,不同昆虫亚群落的Shannon−Wiener多样性指数和Pielou均匀度指数趋势基本保持一致,说明群落结构较为稳定。同时,害虫与天敌昆虫的数量动态呈现一定的相关性。