鱼源抗菌肽的分子设计与优化策略及其应用研究进展北大核心CSCD

抗菌肽因广谱抗菌性、热稳定性、不易产生耐药性等优点成为极具潜力的抗生素替代物。然而,天然抗菌肽活性差、毒性高、合成成本昂贵等问题限制了其进一步应用。近年来,天然抗菌肽的分子改造与设计成为国内外学者的研究热点。鱼类是天然抗菌肽的重要来源,本文综述了近年来鱼源抗菌肽的作用机制、分子设计与优化策略和在水产养殖中的应用,旨在提供对鱼源抗菌肽的全面了解和认识,为鱼源抗菌肽的开发和应用提供新思路。     

抗菌肽、寡糖和有机酸复合制剂对肉鸡养分利用率、屠宰性能和免疫功能的影响

为了探究抗菌肽、寡糖和有机酸复合制剂对肉鸡养分利用率、屠宰性能和免疫功能的影响,试验将390只1日龄科宝肉鸡随机分为对照组、抗生素组和低、中、高剂量复合制剂组,每组6个重复,每个重复13只鸡;对照组饲喂基础日粮,抗生素组在基础日粮中添加200 mg/kg恩拉霉素,低、中、高剂量复合制剂组分别在基础日粮中添加200,400,600 mg/kg抗菌肽、寡糖与有机酸复合制剂,试验期为42 d;试验结束后测定养分利用率(粗蛋白、干物质、有机物、磷、钙利用率)、屠宰性能指标(屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、腿肌重、屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率)、免疫器官指数(胸腺、脾脏、法氏囊指数)及血清中IgA、IgG与IgM含量。结果表明：抗生素组和中、高剂量复合制剂组粗蛋白利用率显著高于对照组和低剂量复合制剂组(P<0.05),高剂量复合制剂组有机物利用率显著高于对照组和低、中剂量复合制剂组(P<0.05),抗生素组、高剂量复合制剂组钙利用率显著高于对照组和低剂量复合制剂组(P<0.05),各组间干物质利用率、磷利用率差异不显著(P>0.05);抗生素组和低、中、...     

抗菌肽对断奶仔猪生长性能、腹泻率和猪瘟疫苗免疫效果的影响

试验旨在研究不同添加水平的抗菌肽对断奶仔猪生长性能、腹泻率和猪瘟疫苗免疫效果的影响。90头断奶仔猪随机分成未添加组、添加Ⅰ组、添加Ⅱ组,分别在基础日粮中添加0、0.05%、0.10%抗菌肽,试验期30 d。结果显示,与未添加组相比,添加Ⅰ组、添加Ⅱ组的断奶仔猪末重、平均日采食量、平均日增重、猪瘟抗体阻断率以及血清免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白G (IgG)、白细胞介素-2 (IL-2)的含量均显著升高（P<0.05）,料重比、腹泻率均显著降低（P<0.05）。与添加Ⅰ组相比,添加Ⅱ组断奶仔猪的平均日采食量、平均日增重、猪瘟抗体阻断率及血清IgG、IL-2的含量均显著升高（P<0.05）,腹泻率显著降低（P<0.05）。研究表明,在日粮中添加抗菌肽可使断奶仔猪的生长性能、腹泻率及猪瘟疫苗免疫效果得到改善,添加剂量为0.10%时改善效果最明显。     

饲粮中添加抗菌肽对断奶仔猪的作用

抗菌肽是由动物体产生的一类具有抗菌活性的碱性多肽物质,其不易产生耐药性,能够调节和修复动物机体免疫系统,提高动物免疫力和抵抗力,并具有广谱抗菌性、稳定性、高效性、无残留和无污染等特点,所以可作为抗生素的替代品而越来越受到人们的青睐。抗菌肽还具有调节仔猪肠道微生态平衡、促进营养物质消化吸收、提高饲料利用率等作用,因此在养猪业上被广泛应用。文章综述了抗菌肽对断奶仔猪肠道生理功能、生长性能、抗氧化能力和免疫功能的作用,为抗菌肽应用于仔猪生产中提供参考。     

人工合成抗菌肽D2A21基因的克隆和表达

为了获得高效表达的抗菌肽D2A21,本研究根据抗菌肽D2A21的氨基酸序列及大肠杆菌偏爱的密码子,设计并人工合成D2A21基因,并将该合成基因克隆至pProEXHTb载体中,构建成含有含6个组氨酸标签的重组质粒。重组质粒转化至大肠杆菌中,经摇瓶发酵,IPTG诱导后,发酵液用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明,成功合成D2A21基因,并构建了抗菌肽D2A21表达载体。通过镍柱亲和层析纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,抗菌肽D2A21能够在大肠杆菌中稳定表达。本研究将为大规模表达纯化D2A21及其进一步的研究和利用提供一定基础。     

在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(FMDV)2A实现dTomato和串联MagaininⅡ基因的共表达

抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分.为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) 2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORE),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato -2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5％甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d.SDS-PAGE电泳图谱显示,在31 kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的MagaininⅡ具有明显的抑菌效果.结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的MagaininⅡ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV 2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的MagaininⅡ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法.     

抗菌肽Shiva A基因在转基因柑橘无性繁殖后代中的遗传与表达分析

为进一步明确外源基因在转基因柑橘无性繁殖后代中的遗传稳定性及目标性状表现,本研究以转双价抗菌肽基因(ShivaA-cecropinB)纽荷尔脐橙(Citrus Sinensis Osbeck)无性繁殖后代植株为材料,通过PCR扩增,Southern杂交和实时定量PCR检测,以及温室抗病性评价分析等,对抗菌肽ShivaA基因在转基因柑橘后代株系中的遗传稳定性进行了研究.结果表明,外源抗菌肽Shiva A基因在转基因及其无性后代中能够稳定整合与表达.Southern杂交分析表明,ShivaA基因在无性繁殖后代基因组中为1个拷贝,而在T0代中为2个拷贝,由此推测T0代植株为混合嵌合体.定量PCR分析表明,ShivaA基因在To代中的表达水平低于其无性繁殖后代.本研究中外源基因的表达与拷贝数的多少成负相关.研究结果为开展转基因柑橘安全性评价提供了有用的实验材料,积累了有效的实验数据.     

转抗菌肽基因辣椒株系的青枯病抗性鉴定及系统选育

利用通过农杆菌介导技术获得的T0代转抗菌肽基因辣椒植株为试材,对其自交株系世代群体连续进行抗青枯病鉴定筛选、分子生物学检测和系统选育,首次获得了具有抗青枯病能力的转抗菌肽基因辣椒稳定株系。同时,对其主要果实性状、青枯病抗性进行的对比试验结果表明,转抗菌肽辣椒株系除抗青枯病能力明显提高外,果实性状基本不变。上述结果显示,外源目的基因主要特性的遗传是稳定的、表达是忠实的,从实践上验证了转抗菌肽基因工程操作的实用性。     

黑水虻的产业化开发应用研究进展

黑水虻是食腐性昆虫,其繁殖周期短、数量多、生物转化率高,能实现有机废弃物的资源化利用。幼虫体内富含粗蛋白质、粗脂肪、氨基酸和微量元素,可作为优质的饲料来源,还可提取抗菌肽、己二酸等高附加值产品。研究表明,用黑水虻部分代替鱼粉能提高动物生产性能,增强机体抵抗力和免疫力,维护动物肠道健康,幼虫体内含有的高附加值活性物质具有巨大的替抗潜力。本文综述了黑水虻幼虫的营养特性和药用价值,分析了当前黑水虻产品开发应用的现状和难点,旨在为其进一步产业化开发提供参考。     

猪小肠抗菌肽的抑菌作用研究

本文以乙酸浸提法获得的猪小肠抗菌肽粗提物为对象,通过纸片扩散法研究其在肠道内的分布、抑菌活性及其与添加水平之间的量效关系。结果表明：空肠抗菌肽的含量高于十二指肠与回肠。来源于十二指肠和回肠的抗菌肽对大肠杆菌的杀灭效果均好于沙门氏菌;在空肠则未见明显差异。说明猪小肠抗菌肽的抑菌效果随添加水平减少而不断下降,呈明显的剂量-效应关系。