草鱼肠道抗菌肽对细菌形态结构的影响及理化性质研究

通过扫描电子显微镜观察草鱼肠道抗菌肽处理后的大肠杆菌、金色葡萄球菌、嗜水气单胞菌的形态结构的变化.结果显示,经过抗菌肽处理后的细菌形态发生变化,菌体严重变形,表面变得粗糙,出现皱褶,胞膜破裂.对草鱼肠道抗菌肽的理化性质的研究结果显示,草鱼肠道抗菌肽具有很好的热稳定性,耐胰蛋白酶特性.     

转中国对虾抗菌肽基因水稻抗白叶枯病效应初析

抗菌肽是一类具有抗菌活性的多肽类物质。利用农杆菌介导法将中国对虾抗菌肽基因np3和np5分别导入粳稻品种爱知旭中,PCR检测显示,T0代转np3基因和np5基因水稻植株的阳性率分别为36%和45%。RT-PCR检测T1代转基因水稻,结果表明抗菌肽基因在RNA水平上得到表达,而抗菌肽的表达对农艺性状未产生显著影响。用白叶枯病菌小种CR4分别对4个T1代转np3基因和np5基因株系进行接种,所有转基因株系均表现出比对照更高水平的抗性。为了验证抗菌肽基因的广谱抗性,进一步检测了np5转基因株系对3个菌株JS97-2、ZHE173和OS-225的抗性,发现中国对虾抗菌肽基因np5对白叶枯病菌可能具有较广谱的抗性。     

2种肠道微生物抗菌肽的特性研究

本研究旨在对从鸡肠道里分离到的2种抗菌肽进行生物学性质研究.从鸡盲肠内容物中分离得到2株菌,通过生理生化法和16S rRNA测序分析进行鉴定.采用牛津杯法对抗菌肽的抗菌谱进行研究;通过调节培养基的碳源、氮源、及初始pH研究培养条件对抗菌肽产量的影响.分离鸡盲肠内容物得到2株菌,鉴定为植物乳酸杆菌CLP29和粪肠球菌CLE34,它们可以产生2个蛋白酶敏感的抗菌肽(植物乳酸菌素CLP29,粪肠球菌素CLE34,3.5 ku).在MRS(Mann Rogosa Sharpe)培养基中,当初始pH为5.0、6.0和7.0,且培养温度为37℃时,2种抗菌肽的抗菌活性均达到最大值,为6 400 AU/mL.碳源和氮源均影响植物乳酸杆菌素CLP29和粪肠球菌素CLE34的产量.可溶性淀粉可以刺激植物乳酸杆菌素CLP29的表达,但是当氮源为柠檬酸铵或蛋白胨加牛肉浸膏时,植物乳酸杆菌素CLP29产量则大大降低.对粪肠球菌素CLE34而言,碳源为半乳糖时,产量可达到最大(6 400 AU/mL),但是当碳源为可溶性淀粉或蔗糖时,产量则降低50%～70%.综上,本研究从鸡的肠道中成功地分离得到可产生抗菌肽的2株菌,且通过改变培养基组成和条件实现对抗菌肽产量的调节.     

乌鳢体表粘液抗菌肽CSM14的分离纯化及部分生物学活性研究

为建立分离纯化乌鳢体表粘液抗菌肽的方法并研究其抗菌活性,本研究通过嗜水气单胞菌对乌鳢进行刺激,采用甲醇提取、SephadexG-50凝胶层析和反向高效液相色谱从其体表粘液中提取抗菌肽,经质谱分析测定分子量;并对抗菌肽的抑菌谱、最小抑菌浓度(MIC)、热稳定性、溶血活性进行了初步研究。结果表明:分离纯化的乌鳢体表粘液抗菌肽分子量约为3024.15ku,并具有广谱的抗菌活性,热稳定性好,没有溶血活性。     

蝉新型抗菌肽Cryptonin在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法合成改造后的Cryptonin基因片段。基因克隆到pPICZα-C质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα-C-Cryptonin。pPICZα-C-Cryptonin通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞X-33内。PCR检测Cryptonin基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在AOX(醇氧化酶)启动子调控下,Cryptonin蛋白获得分泌表达,其相对分子质量约为2700。表达产物耐热性强,在100℃条件下10min内抗菌活性不变,煮沸30min以上仍具有活性。琼脂糖孔穴扩散法检测显示表达产物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有很好的抑菌活性。     

鸡源抗菌肽的研究进展及展望

阐述抗菌肽的基本特点,归纳鸡源抗菌肽的种类、分布及抗菌作用,并在分析鸡源抗菌肽研究现状的基础上,对抗菌肽研究的理论意义和现实意义进行展望。     

转基因水稻目的性状稳定性的研究

本文根据分子杂交的证据,确认转基因水稻株以后,用人工接种白叶枯病病菌的办法,从转入抗菌肽 Ｂ（ Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ） 基因的水稻种子后代中筛选出抗性植株。连续３ 年,用人工接种病原菌的办法检测抗性植株有性后代的抗病性。结果表明,转基因水稻有性后代的目的性状（ 抗白叶枯病） 并不一致,出现敏感、中感、中抗等分离,而从有性后代中选出中抗植株后,中抗株的有性后代能保持目的性状的稳定性。     

抗菌肽的分类、作用机制与应用研究

抗生素的不合理使用会导致细菌产生耐药性,寻找传统抗生素的潜在替代品成为当前研究重点。抗菌肽因其独特的抗菌机制,不易产生耐药性,且具有抗细菌、真菌、病毒、寄生虫和肿瘤细胞等广谱生物活性,在多个领域得到应用。本文介绍了抗菌肽的分类、作用机制以及在食品加工等领域的应用情况等,为抗菌肽的相关研究提供参考。     

日本鳗鲡(Anguilla japonica)脾脏小分子抗菌肽的分离纯化

为分离日本鳗鲡脾脏中的抗菌肽,实验采用10 ku和3 ku切向流中空纤维柱对脾脏醋酸粗提物进行分级分离,并结合阳离子交换层析和反相高效液相层析技术对小于10 ku和小于3 ku 2部分样品分别进行分离纯化。结果显示,2种分子量截留纤维柱超滤获得了大于10 ku、小于10 ku和小于3 ku 3部分样品。小于10 ku和小于3 ku蛋白样品抗菌活性较大于10 ku样品强。对小于10 ku样品经阳离子交换层析以及采用pH 9缓冲液进行反相高效液相层析分离纯化,获得一个抗菌肽,质谱分析其分子量为1 391.82 u;对小于3 ku样品经阳离子交换层析并采用pH 9和pH 2两种缓冲液进行反相高效液相层析分离纯化,获得一个抗菌肽,质谱分析其分子量为839.19 u。研究表明,日本鳗鲡脾脏中起抗菌活性的主要成分是一些小分子蛋白。     

蝉拟青霉代谢产物中抗菌肽分离纯化试验初报

以蝉拟青霉022007 9菌株为研究对象,对不同的发酵培养液对蝉拟青霉发酵液抗菌活性的影响进行研究,筛选出较佳发酵培养液：05%蛋白胨,2%蔗糖,01% KH2PO4,005% MgSO4·7H2O,蒸馏水1 L。从其代谢产物中,经过滤、离心、脱糖、盐析和各种柱层析方法,分离得到具有抗菌活性的组分G1,电泳及RP HPLC验证其具有较高的纯度,初步表明蝉拟青霉代谢产物中含有一些小分子量的具有抗菌活性的肽类物质。G1组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较好的抗菌效果,具有较好的热稳定性,有望开发成一种天然肽类抗菌药物和食品防腐保鲜添加剂。