副溶血弧菌T3SS1 VscF蛋白多肽抗体的制备与应用

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种世界范围内广泛存在的革兰氏阴性食源性致病菌,其vscF基因编码的T3SS1针状蛋白VscF,在侵袭宿主细胞过程中扮演重要角色.为深入研究VscF蛋白在T3SS1针状结构组装过程中的功能,并制备VscF特异性多肽抗体,利用OptimumAntigenTM抗...     

葡萄E3泛素酶HOS1基因克隆、表达及抗血清制备

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码 1 个具有 E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确.以欧洲酿酒葡萄品种'霞多丽'的叶片为供试材料,克隆了V...     

上海地区犬类主要疫病血清学调查

为摸清本市犬类主要疫病免疫抗体水平及感染情况,选取上海地区人口密集、养犬量相对较大的两个区开展了包括4种常见疾病、3种人畜共患病在内的犬类主要疫病血清学调查。本次实验均采用商品化试剂盒,操作步骤严格按照有关标准进行,尽量做到结果准确、可靠,希望能从本次调查中反映出目前上海地区犬类主要疫病的流行状况,为更好地控制犬类疫病,保证人民身心健康提供技术支持。     

洛克沙胂多克隆抗体的制备及其应用

为进一步制备洛克沙胂新型人工抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将4-羟基苯胂酸衍生物与牛血清白蛋白偶联作为免疫原免疫新西兰白兔,利用紫外扫描法、质谱法对偶联产物进行鉴定并计算偶联比,间接竞争酶联免疫吸附法检测其免疫活性.结果显示,成功合成了具有较高的免疫活性洛克沙胂的人工抗原,4-羟基苯胂酸衍生物与牛血清白蛋白、卵清蛋白的...     

兔出血症病毒NJ85株衣壳蛋白基因在原核系统中的高效表达

从兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)中国早期流行株NJ85中成功地克隆出衣壳蛋白(VP60)基因。序列分析表明该基因长度为1740nt，编码579aa，与已报道的另2个RHDV中国毒株WX84和TP的VP60基因的同源性分别为92．7％和97．2％。构建了NJ85株VP60基因原核表达质粒pET—VP60，用SDS—PAGE分析，重组VP60蛋白的表达量占菌体总蛋白的40％，分子量约62kD，在菌体内以包涵体形式存在。免疫印迹实验表明，重组VP60蛋白与RHDV抗体反应形成1条带，证明它具有抗原性。     

赣州某规模化猪场猪瘟、蓝耳病抗体监测结果分析

2014-2016年对赣州某存栏1 000头猪的规模化猪场分6次采血跟踪监测猪瘟、蓝耳病抗体。结果表明,猪瘟抗体阳性率和平均阻断率呈下降趋势,蓝耳病抗体阳性率和平均S/P值呈上升趋势。     

广东省部分猪场猪流感抗体监测与分析

从广东省9个地级市采集42个规模猪场种公猪、肉猪和母猪血清共1 371份,用酶联免疫吸附试验和微量血球凝集抑制试验检测H1、H3、H9亚型猪流感抗体。结果表明:所监测猪场大部分猪群存在H1、H3、H9亚型猪流感抗体,H1、H3和H9亚型流感抗体阳性率分别在3.5%～44.0%、1.6%～20.0%和4.5%～15.6%之间,总阳性率分别为27.9%、6.1%和9.5%;另外,H1、H3和H9亚型猪流感抗体均以珠三角地区感染最为普遍;H1和H3抗体具有明显的季节性特点,秋冬季节的阳性率明显高于春夏季节。     

Fusion Expression and Purification of Marek’s disease virus Tegument Protein VP16 and Its Antibody Preparation

马立克氏病病毒(Marek’s disease virus ,MDV)UL48基因编码的蛋白与单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus ,HSV)衣壳蛋白VP16为同源物，将其克隆入pET-32a载体中，获得pET-VP16, 转化Escherichia coli BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳显示:融合蛋白获得可溶性表达，表达蛋白的相对分子量约为67 kD；将表达的融合蛋白过His·Bind柱，获得纯化的蛋白，将该蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。通过间接ELISA和Western blot鉴定制备的多克隆抗体的效价和特异性，结果表明，该抗体具有较高的特异性，间接ELISA效价大于2×10－5。     

潮霉素磷酸转移酶的原核表达纯化及其抗体制备

本研究从转基因玉米基因组上成功克隆出潮霉素磷酸转移酶基因(hpt),通过BamHⅠ和Hind III 双酶切作用,将hpt基因与pET30a进行粘性末端连接成功构建pET30a-hpt质粒,并转化到大肠杆菌BL21中进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导下,pET30a-hpt融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3) 菌株中以可溶性蛋白的形式高效表达了潮霉素磷酸转移酶（HPT）,并通过金属鏊和层析纯化了目的蛋白。用肠激酶切除了融合蛋白的融合部分之后再一次通过金属鏊和层析,经过透析后获得了HPT纯品,并且使用纯化的HPT蛋白免疫兔子制备了特异性强的多克隆抗体。     

一定免疫程序下猪瘟、猪伪狂犬病抗体水平合格率分析

猪瘟、猪伪狂犬病一直危害着我国的养猪业，为提高猪群对这两病的抵抗力，减少经济损失，浙江加华种猪有限公司通过抗体水平检测及合格率分析，确定了本场猪瘟、猪伪狂犬病科学、合理的免疫接种程序。