全文获取类型
收费全文 | 38988篇 |
免费 | 1167篇 |
国内免费 | 4004篇 |
专业分类
林业 | 728篇 |
农学 | 4791篇 |
基础科学 | 58篇 |
1744篇 | |
综合类 | 16453篇 |
农作物 | 2903篇 |
水产渔业 | 1224篇 |
畜牧兽医 | 13574篇 |
园艺 | 1538篇 |
植物保护 | 1146篇 |
出版年
2024年 | 455篇 |
2023年 | 1441篇 |
2022年 | 1780篇 |
2021年 | 1808篇 |
2020年 | 1461篇 |
2019年 | 1686篇 |
2018年 | 864篇 |
2017年 | 1254篇 |
2016年 | 1515篇 |
2015年 | 1540篇 |
2014年 | 1721篇 |
2013年 | 1778篇 |
2012年 | 2627篇 |
2011年 | 2640篇 |
2010年 | 2541篇 |
2009年 | 2653篇 |
2008年 | 2610篇 |
2007年 | 2152篇 |
2006年 | 1783篇 |
2005年 | 1656篇 |
2004年 | 1374篇 |
2003年 | 1270篇 |
2002年 | 838篇 |
2001年 | 899篇 |
2000年 | 667篇 |
1999年 | 540篇 |
1998年 | 399篇 |
1997年 | 312篇 |
1996年 | 337篇 |
1995年 | 294篇 |
1994年 | 285篇 |
1993年 | 228篇 |
1992年 | 217篇 |
1991年 | 185篇 |
1990年 | 119篇 |
1989年 | 117篇 |
1988年 | 36篇 |
1987年 | 27篇 |
1986年 | 16篇 |
1985年 | 11篇 |
1984年 | 2篇 |
1983年 | 2篇 |
1981年 | 3篇 |
1980年 | 1篇 |
1963年 | 7篇 |
1955年 | 8篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
191.
本文介绍了杆状病毒载体构建方法,分析了影响外源基因表达效率的因素,概述了近年来家蚕杆状病毒栽体在蚕体内表达外源基因产物所取得的成绩,并指出了这一系统存在的问题,提出了改进意见. 相似文献
192.
利用RT-PCR技术从2009年山西运城某猪场疑似乙型脑炎仔猪脑组织扩增出乙型脑炎病毒prM和E基因,采取病样通过BHK-21细胞传代,分离到1株病毒.间接免疫荧光和RT-PCR进一步证实该病毒为猪源乙型脑炎病毒,并命名为SX09S-01.根据prM基因绘制的进化树表明SX09S-01毒株属于基因Ⅰ型,E基因与SA-14、SA-14-14-2、P3、HW和XJ69株的核苷酸同源性分别为88%,87%,88%,88%,98%,其蛋白具有强毒株典型特征. 相似文献
193.
应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒。分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC)。采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%。血凝素(H)基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T)。致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据。 相似文献
194.
猪是戊型肝炎病毒fHEVl的储存器,最近研究表明该病毒从猪到人跨物种传染。HEV大多通过未煮熟的肉或者内脏传播,本研究建立了一步RT—LAMP快速检测猪戊型肝炎病毒。设计ORF3基因特异性的引物,RT—LAMP的检测敏感性为101拷贝/txLRNA模板,比RT—nPCR检测方法敏感10倍。 相似文献
195.
用RT-PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株(Shimen)、近期地方流行的属于第1群毒株的新疆毒株(XJ)和第2群代表毒株甘肃临洮(LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增,均得到约561bp的基因片段;经克隆测序及序列分析,该基因编码187个氨基酸残基,预计蛋白分子质量为21.7ku。将这4个基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中,阅读框是正确的,从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,对表达的蛋白用SDSPAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明,E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达,表达的蛋白多以包涵体形式存在,表达产物的分子质量约为50.0ku,与理论推测的分子质量一致;薄层凝胶扫描分析表明。表达蛋白约占菌体蛋白总量的20.1%;免疫印迹结果证明,表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。 相似文献
196.
197.
198.
鸡新城疫病毒强弱毒株RT_PCR鉴别诊断方法 总被引:11,自引:0,他引:11
本研究通过对大量不同毒力NDV F基因核苷酸序列分析,根据毒力和序列间的相关规律,分别设计合成了两组引物,建立一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT-PCR方法,对强毒株可扩增出133bp的特异性片段的362bp的通用片段,弱毒株可以扩增出252bp的特异性片段的362bp的通用片段。只需一个RT-PCR反应,整个实验过程可在5小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于500pg的DNV RNA。为了增加方法的实用性,我们进一步建立了直接从组织病料中检测并鉴别强弱毒株的方法。 相似文献
199.
将青海牦牛病毒性腹泻病毒(BVDV) QHZK株的E0基因亚克隆人原核表达载体pET-32(α),构建了重组表达载体pET-32 (α)-E0,然后用重组质粒转化Rosetta(DE3)感受态细胞,并利用IPTG诱导蛋白表达.表达的蛋白用His-Band镍柱进行亲合层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白.结果显示,E0基因可在大肠杆菌中获得表达,表达产物的分子质量约为44ku,与预计的蛋白分子质量大小一致.Western-blot分析表明,该蛋白可以与BVDV标准阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为BVDV亚单位疫苗的研究奠定了基础. 相似文献
200.
为了解血清2型猪链球菌(S.suis2)河南分离株的毒力基因型及cps2j全基因突变情况,本研究扩增S.suis2毒力基因gdh、cps2j、mrp、ef 、sly、orf2和fbps,并对s.suis2的cps2j进行全基因序列测定和同源性分析.结果表明,gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps基因在8个S.suis2分离株中的检出率分别为100%(8/8)、100%(8/8)、62.5%(5/8)、75%(6/8)、87.5%(7/8)、100%(8/8)和100%(8/8);其中cps2j全基因核苷酸及推导的氨基酸序列与来源不同的S.suis2分离株同源性分别达98%和97%以上,以该基因构建的系统发育树表明8株S.suis2河南分离株与国内外不同参考株同源性高,亲缘关系密切. 相似文献