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31.
一种制备富含多糖丝状真菌基因组DNA的方法 总被引:3,自引:0,他引:3
采用改进CTAB法提取的红曲霉、镰刀菌和微小毛霉基因组DNA数量和质量都较为理想,DNA产量在90~130 μg·g-1湿菌体,大小均在21kb.4℃可保存4~6个月.用该方法提取的基因组DNA为PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确.分别用限制性内切酶SacⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶解红曲霉M34均能得到较为均一的完全酶切带.该方法快速、简便,成本低,适合富含色素和多糖的真菌的基因组DNA的提取.此外,还适合真菌分子育种等的筛选和样本量大的PCR检测. 相似文献
32.
虹鳟(Oncorhynchus mykiss)是我国冷水性鱼类的主要养殖品种。与二倍体相比,虹鳟三倍体具有生长速度快、肉质好和不育等优点。目前,鉴定虹鳟倍性主要是通过流式细胞术进行DNA含量分析,但这种方法需要采集鱼类血液或组织样本,会对其造成伤害。为了实现利用微创方法收集样本鉴定虹鳟倍性,本研究利用PCR扩增以及电泳分离技术对153个微卫星标记(SSR标记)进行分析,其中139个SSR标记能够在二倍体和三倍体中成功扩增,筛选出132个SSR标记具有多态性,最终鉴定出7个标记在三倍体中表现出较高的变异性。通过在52个已知倍性水平的参考样本和48个未知倍性的样本上进行验证,进一步从中筛选出3个SSR标记(SSR1054、SSR1056和SSR1468)足以区分倍性水平,并且根据3个标记序列重新设计了3对具有良好稳定性的引物序列进行倍性分析应用。本研究所筛选的SSR标记解决了现有虹鳟倍性鉴定中存在的技术流程复杂、耗材昂贵的问题,并有助于不同倍性虹鳟的遗传多样性研究。 相似文献
33.
研究旨在构建铜绿假单胞菌oprH基因的DNA疫苗。试验根据GenBank中已发表的铜绿假单胞菌的oprH基因序列,设计合成了一对特异性引物,利用PCR技术由铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增获得该目的基因,进行胶回收纯化并与T载体进行连接,经双酶切和PCR鉴定后将重组质粒进行酶切回收目的基因片段,并将其亚克隆于真核表达载体pCAGGS-HA中,以双酶切和PCR方法进行鉴定。结果显示:PCR成功扩增出约600 bp的oprH基因,连接T载体后的重组质粒经双酶切和PCR鉴定,均可获得大小正确的目的基因片段。真核重组载体鉴定结果显示,oprH基因成功克隆于真核表达载体pCAGGS-HA中。研究表明,试验成功构建了oprH基因的DNA疫苗,为进一步研究其免疫效果及铜绿假单胞菌新型疫苗的研制提供参考。 相似文献
34.
微卫星标记(microsatellite)又称为短串联重复序列(si m-ple tandemrepeats,STRs),是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列,由2~6个核苷酸的串联重复片段构成,由于重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富,因此微卫星标记的应用非常广泛〔1〕。微卫星位点通常通过PCR扩增,扩增产物通过电泳分析并根据大小分离等位基因进行检测。本试验研究的目的就是分析山西瘦肉型猪SD-Ⅲ系卫星标记SW489和SW2049的遗传多态性,从分子水平上了解山西瘦肉型猪SD-Ⅲ系,为猪的动物育种提供科学依据。1材料和方法1.1试验材料1.1.1试验猪… 相似文献
35.
凡纳滨对虾微卫星DNA的筛选及其特性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用小片段克隆法构建凡纳滨对虾的部分基因文库,用放射性同位素[y-^12P]ATP标记的(CA)15(AT)12(AG)12、(AAT)8、(AAG)8做探针筛选阳性克隆。共获得微卫星序列152个,其中二核苷酸为核心的微卫星序列:(AG)a〉(AC)a〉(AT)a,三核苷酸为核心的微卫星序列:(AAT)a〉(CAT)a〉(AAG)a应用引物设计软件primer3.0设计引物105对。选择合成10对理论上易出现影子带的引物,筛选后用31个凡纳滨对虾个体对这些引物进行了评估,结果10对引物中有8对引物能扩增出谱带,其中1对扩增产物出现影子带,1对扩增产物为单态.有6对扩增产物出现多态。 相似文献
36.
用SSR标记初步分析高州普通野生稻的籼粳分化 总被引:3,自引:0,他引:3
利用34对SSR引物对高州普通野生稻(简称"高野",下同)7个自然居群217份个体进行研究,并结合统计软件进行遗传距离和遗传结构分析.通过已明晰籼、粳类型的中国栽培稻微核心种质作对照检测,所用引物能有效区分籼粳亚种,并在高野材料中扩增出籼稻带型、粳稻带型以及野生稻特殊带型.结果表明,高野群体总体比较原始,已经出现了籼粳分化,其中偏粳多于偏籼,但这种分化是初步的.本研究为进一步明确高野在中国栽培稻的起源演化上的地位、并对其有效的发掘利用提供科学参考. 相似文献
37.
DNA直接导入法获得烟草新品系 总被引:2,自引:0,他引:2
为解决烟草栽培品种香气品质低下的问题,选用香料烟品种Ti245、高密度腺毛品种Ti1068、浓香型品系6251为供体,将三者总DNA混合后经花粉管通道导入烟草栽培品种K326;后代产生了广泛变异,经过连续3年的选育,获得了优良品系K809。与受体K326相比,K809田间农艺性状优良、叶片腺毛密度增加、香气物质含量大幅度提高,评吸结果表明香气品质得以改善;RAPD分子检测发现,K809含有来源于受体和供体的所有片段,一些片段仅与某供体特异同源,表明供体Ti245、Ti1068、6251的某些DNA片段在K809基因组中进行有效了整合,并且对烟叶的香气品质具有积极作用。 相似文献
38.
39.
本文以人肝癌SMMC-7721细胞为材料,对水溶性灵芝提取物(EGL)抗癌作用机理进行了研究。结果表明,EGL能明显抑制SMMC-7721细胞的DNA合成:EGL在50ug/ml到300ug/ml范围表现出明显的剂量效应;EGL最小有效作用剂量为100ug/ml,最大有效作用剂量为300ug/ml。结果提示EGL的抗癌机理主要是通过抑制癌细胞DNA合成而起作用的。 相似文献
40.