RIG-Ⅰ样受体信号传导通路与调控机制研究进展

视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)为RLRs受体家族的成员,是比较关键的细胞质内病原体识别受体,可识别细胞内的单链、双链等RNA病毒成分,被激活的RIG-Ⅰ受体及其CARD在TRIM25的作用下连接泛素链使其寡聚化,通过与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)相互作用,激活MAVS及下游转录因子IRF3和NF-κB,从而诱导Ⅰ型干扰素和炎性因子的表达,最终介导宿主的抗病毒免疫应答。鉴于RIG-Ⅰ持续激活可导致炎性因子对自身细胞的损伤,因此RIG-Ⅰ样受体信号通路受到宿主严格的调控。而某些病毒为逃避宿主细胞的免疫应答,进化出多种机制靶向调节RIG-Ⅰ及MAVS,从而阻断信号通路。论文从RIG-Ⅰ识别病毒机制、激活下游信号传导、宿主细胞对信号传导途径的调控以及病毒逃避机制等方面重点阐述RIG-Ⅰ所介导的天然免疫反应。     

马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备

采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞（PBMC）中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素（Equine interferon-γ，EIFN-γ）基因，将其克隆至载体pCR2．1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒（pCR-EIFN-γ）中扩增马干扰素成熟蛋白（MatureEIFN-γ，mEIFN-γ）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定，将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明，mEIFN-γ基因全长为441b口，含一个开放阅读框，编码146个氨基酸的成熟蛋白；对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，重组蛋白相对分子量约为18Ku，且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下，采用Ni^＋亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体，为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。     

动物干扰素原核表达及其产物制备方法研究进展

文章对重组动物干扰素基因序列的改造、原核表达条件的筛选、原核表达产物制备方法的研究及大规模生产工艺的研发等方面的发展状况进行了概述,旨在为其大规模生产提供一定的理论依据。     

IFN-γR和ER在大鼠下丘脑中的共存

为了探讨神经-免疫-内分泌网络中生物活性物质间相互调节和平衡的关系,本试验应用免疫组化双标记法对成年SD雌性大鼠下丘脑中IFN-γ受体（IFN-γR）和雌激素受体（ER）的共表达进行了研究。结果发现,IFN-γR和ER广泛存在于大鼠下丘脑中,其中在视前交叉上核、视前内侧核、室周核、交叉上核、下丘脑前核、下丘脑内侧核、下丘脑外侧核、乳头体前背侧核、乳头体前腹侧核等13个核团中存在大量的IFN-γR和ER双标记细胞,双标记细胞约占全部阳性标记细胞的60．9％;双标记细胞胞质呈黑褐色、胞核呈棕黄色;ER单标着色细胞以神经胶质细胞居多。研究结果表明,IFN-γ和雌激素可以分别以其各自受体为介质进行信号传递和信息整合,同时也通过在同一细胞中的相互作用而参与机体的神经-免疫-内分泌调节。     

多等温加速试验预测重组鸡α干扰素的稳定性

在3种温度下对大肠杆菌表达重组鸡α干扰素进行了多等温加速稳定性试验和2℃保存的稳定性考察,预测重组鸡α干扰素的稳定性,为制品有效期的确定提供依据。采用多等温加速试验,将制品放在3种不同温度下孵放,定期取出样品,测定效价,根据制品的效价下降情况推算其在有效期内的稳定性。结果显示:用加速降解有关公式可以求出在2℃存放1年后的残余效价为226 492 682单位,下降率为9.9%,与实测值228 000 957单位基本吻合;2年后的残余效价为203 868 551单位,下降率为18.9%。即2℃保存2年后效价保持在80%以上,推算的结果与试验值较吻合,产品稳定性良好。     

重组鸡α-干扰素的表达与抗病毒活性分析

为了表达具有抗病毒活性的重组鸡α-干扰素(IFN-α),试验根据大肠杆菌密码子的偏好性,对鸡IFN-α的成熟肽基因序列进行优化,合成后连接至原核表达载体pET30a-ELP,经体外诱导后表达重组蛋白ELP-ChIFN-α,借助重复可逆相变循环(ITC)法进行纯化;纯化蛋白经过变性、复性处理后进行安全性评价,采用微量细胞病变抑制法在犬肾细胞(MDCK)/水疱性口炎病毒(VSV)系统中进行蛋白抗病毒活性的检测。结果表明：合成的重组鸡IFN-α成熟肽基因能在原核表达系统中成功表达;不同浓度的重组蛋白ELP-ChIFN-α对细胞的生长抑制率为0;重组蛋白ELP-ChIFN-α在MDCK/VSV系统中具有抗病毒活性,活性为1.2×10⁶ IU/mg。说明原核表达的重组鸡IFN-α有较好的抗病毒活性,可作为鸡的抗病毒生物药物进一步开发研究。     

性信息干扰素对棉红铃虫和棉铃虫的控制效果

棉铃虫 [Helicoverpaarmigera (H櫣ｂｎｅｒ) ]、棉红铃虫 [Pectinophoragossypiella (Saun ders) ]仍是目前制约棉花生产的两种重要害虫。应用性信息干扰素防治棉红铃虫、棉铃虫 ,是通过在棉田一次性设置棉红铃虫性信息干扰素 (PB ROPEL ,简称PB ,为短效型线药 )、棉铃虫性信息干扰素 (AB ROPEL ,简称AB ,为空气中散发性信息素 )干扰棉红铃虫、棉铃虫的性信息传递 ,使之迷向、不能交配、降低有效落卵量、减少虫口 ,从而大幅度地减少使用化学农药 ,保护了棉花害虫天敌 ,以益控害[1,2 ] 。 1 998～ 2 0 0 1年安徽省农科院棉花所与日…     

犬a干扰素的基因工程研究进展

干扰素是由脊椎动物细胞产生的一类分泌型蛋白,是由"干扰素诱生剂"诱使动物机体有关细胞所产生的一类特殊"糖蛋白"。这类糖蛋白从其产生细胞产生和释放出来后,又可作用于动物机体的同种其他细胞,并使这些细胞获得相当广泛的"免疫力",具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用。干扰素可与细     

鸡干扰素研究进展

干扰素（Interferon，IFN）是1957年，英国病毒生物学家AlickIsaacs和瑞士研究人员Jean Lindenmann在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时发现的，被病毒感染的细胞产生一种能作用于其他细胞并干扰病毒复制的因子，故将其命名为干扰素。     

干扰素介导的野猪Mx1蛋白可抑制A型流感病毒的复制

脊椎动物Mx1蛋白是一种动力蛋白样的GTP酶,而有些亚型可以阻碍RNA病毒颗粒的内吞转运从而抑制感染。MélaniePalm等发现,野猪Mx1蛋白可以抑制A型流感病毒的复制，并初步研究了其作用机理。