酶联免疫法检测饲料中己烯雌酚的探讨

己烯雌酚酶联免疫反应测试盒是用于饲料中己烯和其他相关的类固醇残留物如二氢己烯雌酚(hexe-strol)的定量检测。在家禽或鱼类中过量残留会对消费者造成危害,为此己烯雌酚已经被禁止在食品生产中使用。肉类食品中的过量残留,主要是由于被饲喂动物的饲料中含有高含量的己烯雌酚,动物缓慢蓄集所致,所以要想对食品中己烯雌酚得到有效控制,对饲料中的己烯雌酚进行监测至关重要。经实验,酶联免疫法具有操作简单、灵敏度高、时间短、检测成本低廉等优点,检测平均回收率≥98.3%,相关系数(r值)≥0.9992,离散系数(CV值)≤3.4%。     

己烯雌酚对体外培养仓鼠生精细胞毒性作用的研究

为研究己烯雌酚(DES)对仓鼠生精细胞毒性作用机制,试验采用原代培养的仓鼠睾丸生精细胞,用10、30、90μmol/L DES处理,倒置显微镜观察生精细胞生长状况,MTT法测定处理后8 h生精细胞存活率,分光光度法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果贴壁培养的生精细胞用DES处理后,细胞活力显著降低,与正常对照组比较差异极显著(P0.01),随着DES剂量的增加,细胞中SOD、GSH-Px含量显著下降,MDA显著上升。说明DES对体外培养生殖细胞毒性作用与ROS密切相关,DES通过降低抗氧化酶水平,增加ROS含量,干扰生精细胞正常功能,表明氧化损伤可能是环境雌激素生殖毒性的作用机制之一。     

己烯雌酚人工抗原的合成及其抗体制备

以己烯雌酚(DES)、琥珀酸酐和牛血清白蛋白(BSA)等为主要原料,采用混合酸酐反应(氯甲酸异丁酯法)将半抗原己烯雌酚与载体蛋白BSA联接制备成人工免疫原。用此免疫原免疫家兔,并以间接ELISA法测定抗体效价。结果表明,人工合成的抗原具有很强的免疫原性,被免疫兔血清中的抗DES抗体效价高达28。本试验为下一步制备抗DES单克隆抗体及研制快速检测DES残留的免疫试剂盒奠定了基础。     

己烯雌酚和辛基酚对真鲷幼鱼的雌激素效应研究

采用静态暴露方式研究己烯雌酚(DES)和辛基酚(OP)对真鲷幼鱼的雌激素效应.当真鲷幼鱼分别暴露于一定浓度的DES和OP,42 d后,真鲷幼鱼的肥满度均极显著下降;血浆中卵黄蛋白原被诱导产生,肝胰脏指数和血浆蛋白总量极显著升高.试验结果表明,真鲷幼鱼的肥满度、肝胰脏指数、血浆蛋白总量等可作为评估DES和OP等环境雌激素毒性效应的生物指标;真鲷幼鱼血浆中的卵黄蛋白原可作为生物标志物,用于监测海洋水体DES和OP等环境雌激素的污染.     

一种新的酶联免疫法检测水产品中的己烯雌酚

对罗非鱼和对虾样品加标回收试验表明,一种新的己烯雌酚酶联免疫检测试剂盒对水产品中己烯雌酚检测具有简单、快速的特点,检测回收率和精密度均可以满足水产品中己烯雌酚检测的需要,该快速检测方法尚未见国内有文献报道用于水产品中己烯雌酚的检测。     

己烯雌酚残留检测研究进展

己烯雌酚是人工合成雌激素中作用最强的一种,曾一度作为促生长剂应用于畜牧养殖业。研究发现,其在动物性产品中的残留对人体健康和生态环境都会造成严重危害。阐述了己烯雌酚的残留特点及其危害,重点对其残留检测方法的研究进展进行了综述。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)在水产品药物残留检测中存在的问题及对策

酶联免疫吸附试验(ELISA)具有操作简便、灵敏度高、样品容量大、仪器化程度和分析成本低的优点,已成为目前水产品药物残留检测中使用最普遍的方法之一,几乎所有重要的水产品药残检测都已建立或试图建立ELISA,如氯霉素、四环素、链霉素、己烯雌酚等.但ELISA也有影响因素较多,易出现假阳性结果等缺点.现将操作过程中需要注意的问题,作如下探讨.     

己烯雌酚人工抗原的合成及其抗体制备

以己烯雌酚 (DES)、琥珀酸酐和牛血清白蛋白 (BSA)等为主要原料 ,采用混合酸酐反应 ,首先合成己烯雌酚半琥珀酸酯 (DES- HS) ,经质谱分析鉴定后 ,再将 DES- HS结合到 BSA上 ,并用 SDS- PAGE对 DES- HS- BSA进行测定。以DES- HS- BSA免疫家兔 6次 ,用琼脂双扩散试验测定抗体。试验结果表明 ,高分辨质谱测得合成的 DES- HS分子量为36 8;BSA- HS- DES的 SDS- PAGE图谱经相关软件分析表明 ,单个 BSA上结合有 32个 DES- HS;琼脂扩散试验结果证实 ,免疫兔血清中含有抗 DES的抗体。本试验为下一步研制 DES残留免疫检测试剂盒及抗 DES单抗奠定了基础     

动物性食品中己烯雌酚残留量检测方法评定

用于检测动物性食品中己烯雌酚残留量的常用方法有放射免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)、气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)和薄层色谱(TLC)。比较这几种方法，认为RIA法测定的灵敏度较高，测定肝脏中DES的最低检出限可达0．3μg／kg，但对放射防护的要求较高，只能在专门实验室进行。GC法需增加衍生化步骤，检出限为2～10μg／kg。HPLC法用电化学检测器的最低检出限是0．1～0．2μg／kg。TLC法用硅胶作铺板，其最低检出限是0．1μg／kg。EIA法灵敏度高、特异性强，测定中华鳖肌肉中DES的最低检出限0．02μg／kg，是目前用于检测大量样品的首选方法。     

己烯雌酚完全抗原的合成和多克隆抗体的制备

采用混合酸酐法,将己烯雌酚与牛血清白蛋白或卵清蛋白偶联形成完全抗原.经紫外分光光度计扫描鉴定,并通过聚丙烯酰胺电泳实验,推算出牛血清白蛋白与DES-HS的结合比是1:25～1:30.以己烯雌酚-牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,制备出多克隆抗体,经酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验进行鉴定,并采用酶联免疫吸附方法进行效价测定,抗血清效价均超过了1:10 000.