基于宿主诱导的基因沉默技术创制抗拟轮枝镰孢玉米自交系

【目的】拟轮枝镰孢（Fusarium verticillioide）是一种主要的病原真菌,侵染玉米可以导致穗粒腐病、茎腐病、苗期根腐病及引起种子腐烂。由拟轮枝镰孢引起的病害不仅影响玉米的产量和品质,而且其病原菌代谢过程中产生的伏马菌素等多种真菌毒素严重威胁了人畜安全。通过宿主诱导的基因沉默（host-induced gene silencing,HIGS）技术创制抗拟轮枝镰孢的玉米种质,为玉米抗病育种提供新的优异抗源。【方法】通过同源克隆方法克隆可能与拟轮枝镰孢生长发育相关的关键基因,并通过体外转录获得相应的dsRNA片段;将不同基因的dsRNA与拟轮枝镰孢的分生孢子悬浮液预混后,用于后续的体外RNA沉默试验;对感病玉米自交系西502的种子进行消毒与接种,在培养皿中28℃避光培养48 h,调查种子的发病程度;在混有dsRNA的孢子悬浮液中加入葡萄糖,25℃培养24 h后,在显微镜下观察孢子萌发与菌丝生长情况;将三叶期的西502幼苗转移至预混dsRNA的孢子悬浮液中进行培养,7 d后观察苗期根腐病发病状况;通过种子鉴定与苗期鉴定体系,逐步筛选具有显著抑制效果的沉默靶标基因;合成筛选出的重点靶标基因片段,构建沉默载体并转化感病玉米自交系西502;对转基因株系的种子接种鉴定,验证转化玉米株系的抗性;提取接种后转基因种子的总RNA,对拟轮枝镰孢的靶标基因进行荧光定量分析,确定HIGS株系的沉默效果。【结果】从拟轮枝镰孢中克隆出18个与其生长发育相关的候选基因;通过种子接种鉴定,发现11个候选基因被沉默后,种子的发病等级极显著降低;进一步筛选出6个沉默后影响拟轮枝镰孢的孢子萌发和菌丝生长的候选靶标基因deo、Ras2、Dpdc、Hsp90、Frp1和Atg15;通过苗期接种鉴定,最后筛选出3个在体外具有显著抑制效果的沉默靶标基因deo、Atg15和Frp1;进而将3个靶标基因的特异区段人工融合成一段序列并构建沉默载体,获得转基因植株;鉴定发现转基因植株的T₂代种子对拟轮枝镰孢的抗性显著增强,且3个靶标基因的表达量均显著下降。【结论】拟轮枝镰孢基因deo、Atg15、Frp1与其生长发育密切相关,且沉默后能够显著提升玉米对拟轮枝镰孢的抗性。     

猪伪狂犬病防控

<正>伪狂犬病(PR)是由疱疹病毒科伪狂犬病毒引起的一种传染病,猪是本病的自然宿主。1流行病学1.1传染源患病动物及隐性感染动物均可传播本病。病毒随患病动物的分泌物排出,并污染饲料、饮水、垫草、猪舍,病毒也存活在胴体中,可通过肉品传播。本病可通过直接或间接接触引起感染。病毒主要经呼吸道、消化道引起感染,公猪精液也可引起感染,若母猪乳汁带毒,仔猪可因吃乳而感     

湖北钉螺作为一种侧殖吸虫中间宿主的发现

作者在研究血吸虫的过程中,发现湖北钉螺是一种侧殖吸虫的中间宿主,并且该吸虫在螺体内有“早熟现象”。     

马类家畜焦虫病的诊治

马类家畜焦虫病是由焦虫寄生在马类血液红细胞内而引起的马类家畜焦虫病,常常只感染马、驴、骡等,是以临床表现发热、贫血、黄疸、溢血和呼吸困难等急性症状为特征的血液寄生虫病,通过中间宿主蜱而传播,不能接触感染.该病的发生和流行具有明显的地区性和季节性.     

营养素对动物表观遗传的影响及其机制

表观遗传是环境因素和细胞内的遗传物质相互作用的结果.表观遗传学是在DNA碱基序列不变的前提下引起的基因表达或细胞表观型变化的一种遗传现象,具体表现在以下3个既相互独立又相互作用的方面:DNA甲基化、组蛋白修饰和microRNA (miRNA)调控.本文就表观遗传的研究进展及营养素对动物表观遗传的影响及其机制进行综述.     

一例蛋鸡绦虫病的诊治体会

鸡绦虫病是绦虫寄生于肠道内,引起鸡的粪便稀薄、产蛋率下降、蛋壳颜色变浅、蛋重轻、畸形蛋增多的一种寄生虫病。本病一年四季均可发生,以6~11月份多发,绦虫病生活史较复杂,需要一个或两个中间宿主,主要是蚂蚁、甲壳虫、苍蝇及一些软体动物为传播宿主。一旦感染本病,蛋鸡生产性能会受到损害,给广大养殖户造成严重的经济损失。     

也评禽流感的『饥饿疗法』

正现在市场上盛行一种禽流感的"饥饿疗法",且受到一些蛋鸡养殖场和基层兽医人员的推崇。在此笔者也想谈一下自己的观点,与各位讨论。大家都知道禽流感病毒的血凝素HA蛋白裂解为HA1和HA2两个部分是病毒具备感染性和侵入细胞复制的首要条件。流感病毒依靠其HA1吸附到宿主细胞的唾液酸糖蛋白受体上,然后通过受体介导的内吞     

猪弓形体病的预防与治疗

正弓形虫病是一种人畜共患的原虫病,尤以猪为多见。不同年龄、性别猪均可发病。成年猪通常为隐性感染,带虫猪成为传染源。怀孕母猪感染后可引起发热、流产、早产和死胎,也会通过胎盘传给胎儿,引起哺乳仔猪发病。幼年猪、培育猪最易感染,多呈爆发性发病,引起大批死亡。(一)病原弓形体病的病原弓形体是一种原虫。弓形虫在整个发育过程中分5种类型,即滋养体、包囊、裂殖体、配子体和卵囊,其中滋养体和包囊是在中间宿主(人、猪、犬、猫等)     

家禽miRNA研究进展简

microRNA（miRNA）是近年来研究较为广泛的一种短小RNA,主要功能是调节与个体生长、发育、疾病发生过程有关基因的表达,参与生命过程中一系列重要进程,包括早期发育、细胞增殖、细胞凋亡、脂肪代谢、细胞分化等。作者主要概述了家禽miRNA对胚胎发育、性腺发育、肌肉生长、脂肪代谢的调控作用,并对家禽miRNA的研究前景进行了简单探讨,以期为下一步开展相关研究提供参考。     

基于EST和GSS序列的巨桉miRNA研究

应用miRtour在线分析工具对巨桉的EST序列和GSS序列进行分析,预测巨桉的miRNA序列,应用psrobot预测miRNA的靶基因。结果发现205条miRNA前体序列和属于62个不同家族的170条成熟的miRNA序列,最大的miRNA家族为miR399家族,有17个成员;miRNA 5′段碱基存在明显的碱基偏倚,尿嘧啶出现频率高达40.6%;147个miRNA预测到了靶基因,共计预测到巨桉蛋白基因中有967个受到miRNA的调节,同时发现1个miRNA可以调控多个靶基因,同一蛋白质受多个miRNA调控的现象。