广西猪瘟流行毒株全基因组的克隆与序列分析

参考已发表的猪瘟病毒(CSFV)Shimen株、HCLV株、Paderborn株的核苷酸序列，设计并合成11对引物。应用RT—PcR技术，成功地分11个片段扩增了CSFV广西流行毒株GXWZ02的全基因组，将这11个基因片段克隆，并测定了其核苷酸序列。应用计算机生物软件Vector NT1将11个基因片段进行拼接。确认CSFV GXWZ02株全基因组序列的长度为12296个核苷酸(GenBank收录号AY367767)。将GXXZ02株与国内外已发表的Slhimen、HCLV、39、Brescia、Eystrup、Glentorf、Alfort187、Pader190rn、CS、ALD、GPE、P97、LPC毒株进行全基因组核苷酸序列和推定的氨基酸序列比较，核苷酸同源性分别为85．4％、84．6％、88．7％、85．7％、85．7％、85．3％、85．6％、95．3％、85．7％、85．7％85．4％、83．4％、84．3％，推定的氨基酸同源性分别为92．6％、91．7％、94．2％、93．1％、92．9％、92．3％、93．0％、97．7％、92．6％、93．0％、92．6％、90．5％、90．6％。GXWZ02与Shimen、HCLV的全基因组序列及推定的氨基酸序列有明显差异，表明GXWZ02株在遗传性和抗原性上发生了较明显的变化。系统发育树分析，所比较的14株CSFV被分为2个群：GXWZ02、Paderborn和39这3个毒株被归为群Ⅰ，其余的11个毒株被归为群Ⅱ，GXWZ02与Paderborn的亲缘关系最接近。将GXXZ02与Shimen、HCLV基因组中单个基因分别进行核苷酸及推定的氨基酸序列同源性比较，结果显示，基因E^ms、E2、P7、NS2、NS5A的遗传变异程度大。而NS3、NS4A、NS4B的遗传性则相对保守。     

生物芯片在疾病诊断中的应用

生物芯片技术是20世纪90年代发展起来的分子生物学技术。自1991年，f硐or等提出DNA芯片的概念后，以DNA芯片为代表的生物芯片(Biochip)技术得到了迅猛发展。当然，生物芯片从实验室走向工业化却直接得益于探针固相原位合成技术和照相平板印刷技术的有机结合，以及激光共聚焦显微技术的引入。目前生物芯片技术已应用于分子生物学，疾病的预防、诊断和治疗，DNA序列测定，新药开发，生物武器的研制，司法鉴定，环境污染监测和食品卫生监督等诸多领域。     

广西10个地方优质品种鸡γ-干扰素基因的克隆与序列分析

根据基因库中鸡γ-干扰素的基因序列设计了1对特异性引物，应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，从ConA诱导培养的广西10个地方优质品种鸡外周血淋巴细胞RNA中扩增了γ-干扰素基因，结果，均得到了大小为520 bp的特异性片段。将扩增产物纯化并克隆到pMD18-T载体上，获得重组质粒，经PCR和EcoRⅠ＋SalⅠ双酶切鉴定后测序。序列分析结果表明，广西10个地方优质品种鸡γ-干扰席基因均编码145个氨基酸的成熟蛋白，分子质量约为16．8ku，与哺乳动物和其他品种鸡的核苷酸序列同源性分别为38．8％～39．0％和99．2％～100％，氨基酸序列同源性分别为23．69／6～24．8％和97．6％～99．4％。     

Whole Genome Methylation Variation Analysis of Longissimus Dorsi Between Tan Sheep and Hu Sheep

It aimed to identify the differential methylation region (DMR) and differential methylation gene (DMG) through the analysis of the genome-wide methylation difference of the longest muscle of the sheep's back of different breeds of sheep,and laid the foundation for the analysis of the differences in sheep skeletal muscle development.In this study,one-year-old sheep(Tan sheep and Hu sheep and Tan-Hu F2) were sanned by the whole genome bisulfite sequencing method(WGBS).The degree of methylation and differentially methylated region in the whole genome DNA of longissimus dorsi(LD) muscle were studied to explore the difference of DNA methylation in level in sheep.The results showed that the methylation (mC) rates of cytosine (C) were 3.55%,3.18% and 3.56% in Tan sheep,Hu sheep and Tan-Hu F2,respectively.A total of 97 731 DMRs and 10 784 related DMGs were detected.In CG,CHH and CHG sequences,the methylation levels of the three groups were not significantly different.419 GO terms and 20 related signal pathways were detected by GO and KEGG analysis,respectively,which were showed to be significantly enriched in cellular process,cell part,binding,long-term depression,and so on.Five candidate genes,ACTA2、ROCK1、CALD1、MYH3 and MYH10 were sreened out in muscle tissues.This study provided genome-wide methylation of pattern of three groups (Tan sheep and Hu sheep and Tan-Hu F2).The results provided reference information for the epigenetic study of Tan sheep and screened candidate genes related to muscle development and meat quality.     

亚洲璃眼蜱唾液腺-新基因（GP29）的原核表达及产物鉴定

将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1，转化BL21，表达出一相对质量为53ku的蛋白，其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381．7511”肽段序列两方面的结果证明，SDS-PAGE胶板上相对质量为53ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与Swiss PROT库中的任何蛋白均有较大差别，可能是一个新功能分子。     

二型圆环病毒ORF2基因的序列分析

通过PCR扩增，对两株分离到的2型猪圆环病毒的ORF2基因进行了扩增，将获得的PCR产物分别与T载体连接，获得了两个毒株的ORF2基因阳性克隆。序列分析表明，与其它中国分离株同源性高达99%，同处于一个基因簇，但和中国BF分离株同源性却只有92.3%。而荷兰分离的NL-PMWS-2株与中国分离株的同源性却在99%以上，表明中国流行的PCV-2和国外分离株有密切关系。     

水貂FSH-β基因序列的克隆与测序

从水貂腿部肌肉中分离提取总DNA,经PCR扩增出水貂FSH-β基因DNA序列。PCR产物经凝胶回收纯化,连接到pMD-18T载体上,然后转化到感受态细胞JM109中。在含X-gal和IPTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆菌落,提取质粒作限制性酶切及PCR鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明, PCR 扩增出的DNA片段碱基数为500 bp,通过Blast比对,分析了其与人、牛、猪、绵羊、鼠促卵泡激素核苷酸序列的同源性。     

半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)基因在大鼠睾丸组织中的表达及其序列分析

试验根据大鼠肝脏牛磺酸生物合成关键酶——半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)基因已知核苷酸序列,设计了1对特异的寡核苷酸引物,对提取的睾丸组织总RNA进行RT-PCR扩增,扩增出468 bp的DNA片段,在国际上首次证明CSD基因在大鼠睾丸组织中存在表达,即牛磺酸可在大鼠睾丸组织中生物合成。测定了扩增的睾丸组织CSD基因核苷酸序列,并与已知肝脏CSD基因核苷酸序列及其对应的氨基酸序列作了同源性分析。结果表明:睾丸组织CSD基因核苷酸序列同已知肝脏CSD基因核苷酸序列的同源性为99.8%,其对应氨基酸序列的同源性为100%。     

鸡传染性支气管炎病毒华南分离株核蛋白基因的序列测定及同源 …

根据国外已发表的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）核蛋白基因序列,设计并合成１对引物。应用这对引物,以ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出华南分离株（ＨＮ株）的核蛋白基因,基因产物大小为１．５ｋｂ,与设计相符。对ＨＮ株部分核蛋白基因进行序列测定,并与标准毒株Ｈ５２,Ｍ４１,Ｂｅａｕ和Ｇｒａｙ的核蛋白基因进行同源性比较,结果表明,ＨＮ株与Ｈ５２、Ｍ４１、Ｂｅａｕ和Ｇｒａｙ株的核酸同源性分别为８５％、８４％８４％和８     

CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术及应用研究进展

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白系统(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR/CRISPR-associated nuclease system,CRISPR/Cas)是广泛存在于细菌和古细菌的适应性免疫系统,其中由Ⅱ型CRISPR/Cas系统改造而来的第三代基因组编辑技术——CRISPR/Cas9系统已广泛应用于生命科学研究的多个领域。本文主要从CRISPR/Cas9系统的发现、作用原理、应用进展及与其他新兴的基因组编辑技术的对比等四个方面进行阐述,重点介绍其最新研究进展,并展望了CRISPR/Cas9系统的应用前景。