转基因体细胞克隆奶山羊成功

青岛森淼实业有限公司与中国科学院遗传与发育生物学研究机构经过两年共同开展乳腺生物反应器项目研究。２００２年９月至１０月７日出生４只带有医用蛋白转基因体细胞的克隆奶山羊，目前仍有３只成活。经过DNA检测，证明已获得了预期的转β－干扰素基因和转抗凝血酶素Ⅲ基因克隆羊。这标志着功能基因转基因羊在国内的首次成功，其中该项目采用的基因打靶技术应用在山羊上为国际先例。（）□转基因体细胞克隆奶山羊成功$新华社     

基因打靶技术及其应用

基因打靶技术是通过将外源DNA的同源序列和活细胞内的染色体DNA发生同源重组，达到定点修饰染色体上某一特定基因的一种分子生物学技术。它与克隆技术的结合发展为畜牧生产中的动物育种工作开辟了广阔的前景，为人类带来更多、更好的食物和药物，人类健康将获得更好的保障。     

基因打靶克隆山羊制备中影响受体妊娠的若干因素

在基因打靶克隆山羊制备过程中，重构胚的制备须经去核、移核、融合、激活、体内培养，发育成桑椹或囊胚回收等过程，重构胚移人受体后是决定最终能否产生克隆后代和提高生产效率的关键步骤。而在非牧区开展山羊基因打靶克隆羊的研制工作中受到场所、环境、羊群体等因素的限制，不可能在质量和数量上得到任意选用的保证。基因打靶体细胞作供核产生的重构胚是十分珍贵的，在移植时如何保证每天     

以重复序列为靶位点的鳜鱼多位点基因打靶载体的构建

以鳜鱼(Siniperca chuatsi)为研究对象，以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点构建多位点基因打靶载体，为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料。先构建含TK和Neo基因的通用打靶载体pCTKNeo。采用LA Taq高保真酶扩增获得左、右同源重组引导臂HRDS1、HRDS2，经T质粒克隆后，分别插入到pCTKNeo载体Neo基因的上下游，构建成鳜鱼专用的多位点打靶载体pCTKNeo-HRDS1／2。同样将干扰素基因hIFN插入到pCTKNeo-HRDS1／2载体的Neo基因与HDRS2之间。每次克隆均经PCR、酶切和测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向，最终构建成多位点基因打靶载体pCTKNeo-HRDS1／2-hIFN。目前的基因打靶技术存在打靶效率低、安全性等问题，以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术将部分解决这些问题。     

绵羊FecB基因打靶载体构建

利用peGFP-C1,pRET.IL.PGK-TK和pMD19-T Simple等基本质粒,构建绵羊FecB基因打靶载体。以克隆载体pMD19-T Simple为载体骨架,插入一个正选择标记eGFP基因、一个负选择标记基因HSV-tk基因,并在eGFP基因两侧各添加一个同源长臂和同源短臂,从而构建绵羊FecB基因打靶载体。结果:经多个限制性内切核酸酶酶切鉴定和测序证实,所构建的基因打靶载体符合设计要求,表明成功构建了绵羊FecB基因打靶载体。     

四膜虫基因打靶载体的构建及其在虫体内的转化

 【目的】构建一个适于嗜热四膜虫（Tetrahymena thermophila）的基因打靶载体，并分析转化四膜虫的特性。【方法】以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子，利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂，并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA，中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo，从而构建一个基因打靶载体。将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内，使其同源重组到四膜虫H4-I基因上。通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定。光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化。【结果】成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体，将其电击转化到四膜虫体内，抗性虫株的生长速度明显高于普通四膜虫，显微镜观察抗性虫株形态变小，大约是正常形态的1/20～1/30，抗性虫株表面光滑，未见纤毛。【结论】利用基因打靶载体将neo基因定向整合到四膜虫H4-Ⅰ基因内部，为今后在嗜热四膜虫体内表达外源蛋白奠定了基础。     

广州：世界首例内源性基因敲除猪诞生

近日,从中科院广州生物医药与健康研究院获悉,该院研究员赖良学研究团队与美国密歇根大学心血管研究中心陈育庆团队合作,首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究,成功敲除了猪内源性PPARγ基因。这项研究在世界上首次建立了PPARγ基因敲除猪模型,对糖尿病和心血管并发症的研究有重要应用价值。     

牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定

本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。基于已发布的MSTN基因序列,选取第3外显子约600 bp作为靶位点,在其上、下游设计2条同源臂,分别为4.4和1.4 kb。以pPNTⅢ为骨架载体,在其2个多克隆位点处插入同源臂,构建出置换型打靶载体MSTN-KO-pPNTⅢ。结果显示,经DNA测序及酶切鉴定证实1.4 kb同源短臂和4.4 kb同源长臂均正确插入基础载体中。结果表明,成功构建出牛MSTN-KO-pPNTⅢ打靶载体。