现代猪分子育种技术

简要介绍了影响猪主要经济性状的主效基因和QTL,阐述了标记辅助选择和基因打靶技术的基本方法，探讨了分子育种技术在猪品种繁育中的应用。     

Neuritin条件性基因打靶载体的构建和同源重组胚胎干细胞克隆鉴定

Neuritin(Nrn1)是神经营养因子家族的成员,能够维持神经元的存活和突起的生长,在神经系统发育和再生中起重要作用。为了解Neuritin基因在整体动物水平的系统生物学功能,通过PCR扩增Neuritin基因片段,将该片段用In-fusion无缝克隆技术连接至用限制性内切酶Asc1酶切后线性化的CTVIRES-EGFP质粒,转化至Stellar感受态细胞后,对酶切和测序鉴定正确的阳性克隆子进行大量提取质粒,酶切使之线性化后将其电转导入小鼠胚胎干细胞细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,用PCR方法鉴定出同源重组的ES细胞DNA。结果表明,成功构建了CTV-Nrn1-IRES-EGFP基因打靶载体载体并筛选出阳性同源重组胚胎干细胞,为制备Neuritin条件性基因打靶小鼠模型奠定了实验基础。     

2000年动物克隆及相关领域研究进展

1　猪的克隆成功与异种器官移植　　继 1 997年绵羊 Dolly克隆成功后[1 ] ,1 998年克隆了牛和小鼠 [2 ,3 ] ,1 999年克隆了山羊[4] 。我国科研人员在1 999年和 2 0 0 0年也成功克隆了山羊[5 ,6] 。在 2 0 0 0年 3月1 4日 ,PPL公司宣布通过体细胞核移植技术产生了 5头克隆猪 [7] 。 5头小猪与作细胞核供体的母猪一样全是雌性。之后 ,Polejaeva等 [8] 和 Onishi等[9] 2个研究组分别在《Science》和《Nature》上报道了通过体细胞核移植技术克隆猪的研究。克隆猪不像克隆绵羊和牛 ,其困难是植入母猪子宫中至少要有 4个以上胚胎才能保证成功…     

基因打靶技术的研究概况

基因打靶是通过外源DNA与染色体DNA同源序列之间的重组来改造基因组特定位点,从而改变生物遗传特性的方法。它可以纠正染色体特定位点上的自发突变,恢复细胞正常的生理功能;也可以把理想突变引入到基因组的某一位点,使之稳定地遗传下去。本文从基因打靶的基本原理、打靶载体、打靶策略、筛选策略、条件性打靶及其实际应用等方面做了详细的综述。     

动物乳腺生物反应器研究进展

乳腺生物反应器在生产基因工程药物、营养保健品、改变奶成份和基因功能鉴定等方面具有广阔的应用前景,然而,乳腺生物反应器技术还存在诸如基因定点整合率低、动物扩群慢、成本高等不足,与动物克隆和基因打靶等高新生物技术的结合,有望进一步完善和提高该技术,促使其大规模的应用。     

山羊胎儿成纤维细胞中基因打靶的初步研究

为评估在山羊胎儿成纤维细胞中通过同源重组进行基因打靶的可行性,构建打靶载体pTargetl,分别以山羊β-酪蛋白基因的5’、3’侧翼区为2条同源臂,中间插入正筛选基因(Neo’),外侧插入负筛选基因(HSV-tk)。将该载体线性化并纯化后电转染人30日龄的山羊胎儿成纤维细胞中,转染细胞系分别用G418和丙氧鸟苷进行正负药物筛选,存活细胞经PCR检测证明发生了同源重组事件。     

类基因组研究概述

本文概述了近些年鱼类基因组研究的进展状况，鱼类基因组研究起步比较晚，但目前在鱼类遗传连锁图谱的构建、功能基因的筛选与克隆，胚胎干细胞和基因打靶技术的研究上已经取得很好的进展。具体研究在淡、海水鱼类中都有所体现，并且对与鱼类密切相关的藻类的基因组也进行了研究。     

世界首例内源性基因敲除猪诞生

近日,从中科院广州生物医药与健康研究院获悉,该院研究员赖良学研究团队与美国密歇根大学心血管研究中心陈育庆团队合作,首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究,成功敲除了猪内源性PPARγ／基因。这项研究在世界上首次建立了PPARγ／基因敲除猪模型,对糖尿病和心血管并发症的研究有重要应用价值。     

科技

<正>定制基因猪成为可能新华网消息,我国科学家成功培育出世界首例ROSA26定点基因打靶猪模型,这让科学家培养定制基因猪成为可能。该研究成果发表于著名学术期刊《细胞研究》上。这项研究是由吉林大学动物医院学院教授、中科院广州生物医药与健康研究院研究员赖良学博士与美国密西根大学王忠教授合作开展的。     

基因打靶技术及其应用

基因打靶技术是通过将外源DNA的同源序列和活细胞内的染色体DNA发生同源重组，达到定点修饰染色体上某一特定基因的一种分子生物学技术。它与克隆技术的结合发展为畜牧生产中的动物育种工作开辟了广阔的前景，为人类带来更多、更好的食物和药物，人类健康将获得更好的保障。