角蝇各龄期幼虫体内斯氏副柔线虫的分子生物学鉴定

确定角蝇各龄期幼虫体内的斯氏副柔线虫(Parabronema skrjabini)幼虫。通过大量剖检角蝇各龄期幼虫,收集其体内的线虫幼虫,经扩增测序获得ITS基因序列,利用DNAStar 5.0软件,将其与斯氏副柔线虫成虫的ITS基因序列进行同源性比较。结果表明,角蝇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期幼虫体内的线虫幼虫确为斯氏副柔线虫幼虫。该研究结果不但为鉴定角蝇各龄期幼虫体内的斯氏副柔线虫幼虫提供了简易准确的方法,而且也为弄清斯氏副柔线虫在其传播媒介角蝇体内的发育过程奠定了基础。     

养殖褐牙鲆细胞色素b基因序列的初步研究

对养殖褐牙鲆(Paralichthys olivacews)的线粒体DNACytb基因的部分序列进行测定，测得的目的DNA片段的长度为410bp，其A(104bp)、T(119bp)、C(117bp)、G(70bp)4种碱基平均含量分别为25．4％、29．0％、28．5％、17．1％。在28个褐牙鲆个体中共出现了3种单倍型。白化褐牙鲆出现的第1种和第3种单倍型个体数分别为10尾(占白化褐牙鲆样本数的如90．91％)和1尾(9．09％)；6尾黑化褐牙鲆均出现第1种单倍型(100％)；正常褐牙鲆出现的3种单倍型尾数分别为7尾(占正常褐牙鲆样本数的55．56％)、2尾(22．22％)和2尾(22．22％)；测得的序列与既知序列间在第6bp、第19bp和第402bp碱基处出现差异。由于褐牙鲆Cytb基因的高度同源性，研究其白化、黑化和正常状态时出现的序列差异，对于寻找褐牙鲆白化机理研究的分子标记意义重大。     

白术枯斑病原鉴定、生物学特性及其对不同药剂的敏感性研究

 白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)是浙江省传统中药材“浙八味”之一。近年来在磐安县白术主产区发生一种新的枯斑病。为明确致病菌及其生物学特性和对杀菌剂的敏感性,本研究通过病原菌分离培养、柯赫氏法则验证、形态学特征观察,及ITS、LSU、rpb2和tub2多基因序列分析,发现引起该枯斑病的病原菌为Phoma exigua。生物学特性测定表明:该菌菌丝生长的最适温度为28℃,最适pH为8,最适碳源与氮源分别为可溶性淀粉和蛋白胨;分生孢子萌发最适温度24℃、相对湿度100%;菌丝和分生孢子的致死温度分别为47℃和54℃。不同药剂敏感性测定结果表明:咯菌腈对该菌菌丝生长的抑制作用最强,EC₅₀为0.24 μg·mL^-1;吡唑醚菌酯和嘧菌酯对其分生孢子萌发具有较强的抑制作用,EC₅₀分别为0.10和0.16 μg·mL^-1。由P. exigua 引起的白术枯斑病为国内外首次报道。     

猪蓝耳病和猪瘟流行现状及防控技术

正一、猪蓝耳病(PRRSV)流行现状及其防控技术(一)猪蓝耳病发病标准至少3日体温在41℃以上;出现精神食欲下降,眼结膜炎,咳嗽、喘等呼吸道症状;大体剖检,肺部出现片状实变;1月龄仔猪死亡率90%~100%,2~3月龄育肥猪死亡率40%以上。(二)猪蓝耳病毒株流行特点2009-2010年分离35株HP-PRRSV全基因序列与2006年分离的HP-PRRSV代表株JXA1株全基因序列同源性为97.9%-98.5%;35株分离株之间的同源性达97.6%~100%。遗传进化分析发现2009-2010年分离的35株HP-PRRSV的亲缘关系最近,属于同一个分支。     

内源性禽白血病病毒的RT-PCR检测与基因序列分析

为了解贵州省是否存在内源性禽白血病病毒(ALV)感染情况,试验选取无明显ALV症状的送检病料,采用RTPCR方法对ALV进行扩增。结果:扩增出1条744 bp左右的目的条带。对扩增产物进行测序和基因序列分析,同源性分析结果表明:序列与E亚型ALV中的ev-1、ev-3株同源性最高(99.5%),与J亚型ALV中的HPRS-103株同源性较低(42%)。系统进化树中该序列与内源性ALV中的ev-1、ev-3株属同1个分支,亲缘关系最近,说明其属于内源性ALV。     

犬流感病毒的分离鉴定及部分基因序列分析

使用Vero细胞接种临床症状疑似感染犬流感病毒(CIV)的犬肺组织,盲传3代,观察其病变情况,收集72h培养液进行PCR鉴定、血凝特性及形态学观察,同时进行序列测定和分析,并制作系统进化树。结果表明,从犬肺中成功分离出一株犬流感病毒,该病毒能够凝聚豚鼠、猪、鸡抗凝血,电镜观察病毒呈圆形、长丝状等形态多样、大小不等的颗粒状;序列分析表明,与人源、犬源等10株有代表性的流感病毒基因同源性极高,只有少数地方发生了特异变异。这些数据的分析对于犬流感的防控有一定的参考价值。     

牛源性肠炎沙门氏菌的三型分泌系统基因分析

肠炎沙门氏菌是一类引起人与动物腹泻的病原菌,其致病性与三型分泌系统密切有关.本次试验研究临床上腹泻牛体内分离的一株肠炎沙门氏菌致病性与三型分泌系统的关系,试验选取SipA、SipD的基因序列进行测序分析.本次试验分别运用特异性引物扩增SipA、SipD的基因,连接到T载体上并测定目的片段序列.测出的序列在GeneBank上进行比对,以确定分离菌与其他菌株亲缘关系.试验结果显示该株肠炎沙门氏菌的SipA基因、SipD基因与肠炎沙门氏菌P125109同源性达100％.     

番木瓜环斑病毒海南南瓜分离物全基因组序列分析

【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PRSV,采用分段扩增测序方法拼接获得PRSV-HnPumpkin基因组,利用NC-BI中的BLAST工具、DNAStar和MEGA 6.06软件进行序列分析及系统关系树构建。【结果】DAS-ELISA和RT-PCR检测结果表明,采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中存在PRSV(PRSV-HnPumpkin)。PRSV-HnPumpkin基因组全长为10 327nt,具有典型的PRSV基因组结构特征,含有1个开放阅读框,编码1个含有3 345个氨基酸的多聚蛋白。PRSV-HnPumpkin与已报道的其他PRSV分离物核苷酸和氨基酸之间的相似性分别为80.6%～95.1%和90.7%～97.9%。系统关系分析表明,PRSV-HnPumpkin与亚洲分离物处于同一组中,且与我国台湾分离物亲缘关系较近。【结论】获得了PRSV-HnPumpkin全序列,但其进化来源有待进一步探讨。     

美国加州大学研究分析H5N1病毒的传播

最近，美国加州大学研究人员完成了第一个H5N1流感病毒遗传多样性的统计学分析。这项研究分析了在从欧洲、亚洲和非洲28个地方收集的流感病毒表面上发现的近500个蛋白的血凝素序列一基因序列。发现在印度尼西亚、日本、泰国和越南循环的H5N1亚型病毒株的进化史大部分与中国南方一些省份发现的病毒株相同。但是，在中国南方流行的一些病毒株却没有在相邻的泰国和越南发现。