噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素（四）

秦生巨老师1979年开始研究以“噬茵蛭弧菌、弧菌噬菌体为主的微生物生态制剂”。至今已经30多年,是我国噬菌蛭弧菌、弧菌噬菌体及其微生物生态制剂研究的创始人。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（三）

1.7蛭弧菌在死的宿主菌中的生长特性蛭弧菌Bd81、Bd98于加热及氯仿处理失活的宿主菌双层琼脂平板上,比在未经处理的活的宿主菌双层琼脂平板上更迅速形成噬菌斑,后者一般需40~48h才可出现噬菌斑。在加热及氯仿处理的宿主菌双层琼脂平板上只需14h,形成噬菌斑的数目也大大增多。例如在100℃加热致死的宿主菌中Bd81增加105倍,Bd98增加约72倍,在80℃加热致死的宿主菌中Bd81增加151倍,Bd98增加73倍。氯仿处理致死的宿主菌上Bd81增加74倍,Bd98增加67倍。     

噬菌体生态防治效果试验初报

采用大肠杆菌E．coli O—78、E．coli LH3-2的噬菌体，进行了自然感染条件下噬菌体制剂对蛋鸡公雏的保护率、噬菌体和常规药物对杂交肉雏鸡的保护率以及生长发育的影响试验。结果表明，噬菌体制剂可明显改善雏鸡的下痢现象；显著提高对雏鸡的保护率，其效果与常规用药相同，但是却降低了药物成本90％以上；在雏鸡饲料中使用噬菌体制剂，     

广东梅州柑橘黄龙病和病毒病的发生调查及其黄龙病菌原噬菌体多样性

【目的】调查柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)和病毒病在广东省梅州市柑橘主产区的危害情况,分析该地区柑橘黄龙病菌(CLas)的原噬菌体多样性。【方法】以16S rDNA为模板设计引物,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测梅州市不同抽检地在2017—2019年3年间柑橘黄龙病的发病情况;同时分别采用已报道的柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)、柑橘裂皮病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)、柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDa V)、柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)和柑橘黄脉病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)的特异性检测引物,提取样品的RNA,反转后以样品的c DNA为模板,通过普通PCR的方法分析梅州市抽检地区柑橘病毒病的发生情况。此外,以基于2种原噬菌体类型(SC1和SC2)对应的超变异基因区域设计的2对引物(Lap-TJ-F/Lap-TJ-R1和La...     

噬菌体对养殖环境中鸡粪的消毒观察

近几年来我国养鸡事业发展非常迅速,但总体水平还处在初级发展阶段,尤其发展集约化养鸡时间还不长,出现了鸡粪在很短时间内造成污染环境和自家污染的问题。传统的鸡粪消毒方法存在着气味难闻、耗时间长等缺点,所以我们试着用噬菌体对鸡场养殖环境消毒,尤其是环境的主要污染对象———鸡粪进行消毒观察试验。     

噬菌体展示技术筛选副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的抗原表位

为了研究副猪嗜血杆菌（HPS）外膜蛋白P5的抗原表位,应用噬菌体展示随机12肽库,以抗HPS外膜蛋白P5的单克隆抗体作为固相分子,进行了3轮筛选。对随机挑选出的10个分离间隔良好的噬菌斑进行ELISA和West—ernblot等检验,最终确定了4个各结果均为阳性的优势短肽。将4个短肽序列与GenBank中HPS外膜蛋白p5的序列进行比对分析,发现这些序列没有同源性或同源性较低,但竞争ELISA结果显示这些短肽与单抗的结合都能够被外膜蛋白P5有效的抑制。以上结果显示,通过噬菌体展示技术成功获得了4个HPS外膜蛋白P5的模拟表位,为后期开展以抗原表位为基础的诊断、表位疫苗等研究提供了依据。     

噬菌体、益生菌、抗菌肽对肉兔生长性能、肠道菌群及屠宰性能的影响

试验旨在研究基础日粮中添加噬菌体、益生菌、抗菌肽对肉兔的生长性能、肠道菌群及屠宰性能的影响.选取体重相近、30日龄断奶、健康的新西兰肉兔350只,随机分成7组,每组5个重复,每个重复10只兔.对照组肉兔饲喂基础日粮,试验1组、2组、3组、4组、5组和6组分别在基础日粮中加入噬菌体、益生菌、抗菌肽、噬菌体+益生菌、噬菌体...     

CSFV囊膜蛋白E2单克隆抗体识别表(拟)位基序的差异性分析

CSFV囊膜糖蛋白E2是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白.本研究应用抗CSFV(Alfort毒株)E2蛋白的单克隆抗体c2410、WH303及M1669,筛选噬菌体展示的12肽随机肽库,进行表位分析.结果发现:c2410、WH303针对同一线性表位,精确定位于E2蛋白的832～837位氨基酸SPTTLR,是CSFV特异性表位.同时发现WH303识别的2个主要拟位基序:(W)NKPxT、AxWPTA,M1669识别的3个主要拟位基序:DxMRLD、(SL)MPPF、MLLHxxPxL,但在E2蛋白中均未查找到与之相同(似)序列.应用ELISA、竞争性ELISA、免疫印迹分析不同表(拟)位对单克隆抗体的免疫反应性差异,结果发现:(1)c2410对WH303的3个噬菌体拟位(WNKPxT,AxWPxATA,SPSxLR)在ELISA、免疫印迹检测中均为阴性;(2)SPTxLR噬菌体拟位能与c2410、WH303发生特异性结合,且此结合能被病毒抗原阻断;(3)M1669的3个噬菌体拟位(DxMRLD,(SL)MPPF、MLLHxxPxL)在ELISA、免疫印迹中能与M1669发生特异性结合,但此结合不能被病毒抗原阻断.     

噬菌体治疗的另一种策略——转基因噬菌体

许多研究已论证噬菌体作抗菌剂使用的可行性,并有一些噬菌体制剂已获批,可用作抗菌性饲料添加剂。但直接采用分离自环境中的天然烈性噬菌体防控细菌感染,面临诸多问题和发展障碍。基因工程和合成生物学技术的发展为解决这些问题提供了新的思路,本文综述了近年来转基因噬菌体治疗相关研究进展。     

分枝杆菌噬菌体CJAUS 5株lysA基因的克隆与表达

为了研究分枝杆菌噬菌体裂解酶lys A的生物学特性及对宿主菌的作用,对分枝杆菌肌尾噬菌体CJAUS5的lys A基因进行PCR扩增、克隆和原核表达,并利用生物信息软件对其序列进行分析。结果显示,CJAUS5-lys A基因与Gen Bank中分枝杆菌肌尾噬菌体的lys A基因具有高度同源性;克隆基因在大肠杆菌BL21中获得了成功表达,重组蛋白以包涵体的形式存在,蛋白分子量约为52 k Da;lys A蛋白保守区域分析结果显示,lys A包含具有酰胺酶活性的肽聚糖识别蛋白(PGRP)超家族,表明Lys A可能具有裂解肽聚糖的能力。本研究克隆表达出分枝杆菌噬菌体CJAUS5裂解酶Lys A,为进一步研究其相关功能奠定了基础。