烈性噬菌体KM104对不同血清型鸡源沙门菌的防治效果评价

【目的】研究烈性噬菌体KM104株对不同血清型鸡源沙门菌雏鸡感染的防治效果。【方法】测定KM104株体外裂解谱及体内安全性，确定攻菌剂量和最佳感染复数(MOI);按噬菌体的不同使用时间、频率和滴度分组，构建白羽蛋鸡3个不同血清型鸡源沙门菌感染防治模型，通过记录试验动物存活数及存活率、生长性能、临床症状及病理变化，测定肛拭子排菌量、脾脏载菌量和脏器系数等指标，综合评价KM104的防治效果。【结果】噬菌体KM104对5个血清型沙门菌的综合裂解率为80.65%(50/62),在体外具有较好的抑菌效果，且对雏鸡无明显致病作用；最佳治疗方式：针对鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的治疗剂量分别为7.96×10⁷、1.26×10⁴和1.68×10⁷ PFU/mL,采用连续3 d灌喂高滴度噬菌体的方式雏鸡存活率最高(分别为90%、80%、90%),与攻菌后不处理对照组相比，有效减轻试验雏鸡的临床症状及脏器损伤，增重显著上升(P<0.05)、肛拭子排菌量、脾脏载菌量及脏器系数显著降低(P<0.05)。【结论】噬菌体KM1...     

裂解性噬菌体内溶酶和穿孔素抗革兰阴性菌的研究进展

随着细菌耐药情况的日益严重，人们开始寻找抗生素的代替物，噬菌体内溶酶(endolysin)和穿孔素(holin)受到了关注。其中内溶酶展现了良好的抑菌潜力，与抗生素和噬菌体制剂相比有着一定的优点。而内溶酶的作用特点决定了其在抑制革兰阴性菌时需要穿孔素的协同，因此有研究利用基因工程把内溶酶和穿孔素进行重组来解决这一问题。此外，在噬菌体-细菌相互作用的研究中，已有研究表明噬菌体基因参与调控细菌间的通讯系统，内溶酶和穿孔素正是其中重要的调控因素。本文通过对噬菌体与噬菌体制剂的研究进展、内溶酶和穿孔素抗革兰阴性菌的研究进展及其应用进行了综述，以期为未来有关噬菌体裂解酶的研究提供思路。     

一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体，对抗多重耐药细菌，试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体，采用双层琼脂平板法纯化、增殖，超速离心法浓缩，利用透射电镜观察噬菌体形态，通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型，同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明：从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体，命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科；核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌，还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌；最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6～11时相对稳定，70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体，宿主谱相对较宽，具有潜在的应用价值。     

弯曲杆菌噬菌体在家禽生产中应用的研究进展

弯曲杆菌是一种常见的食源性人兽共患病原菌，可引起人类肠道疾病和相关并发症，并且因抗生素的滥用导致其耐药性增加。家禽作为弯曲杆菌的储存库和人类弯曲杆菌病的感染源是防控的重点。噬菌体具有感染和裂解细菌的作用，已成为治疗多重耐药细菌的新型抗菌剂。文章通过综述弯曲杆菌噬菌体的分离鉴定及其在家禽生产中的应用，探讨噬菌体治疗面临的问题，并展望了未来噬菌体治疗的方案。     

非洲猪瘟病毒K205R蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定

【目的】利用噬菌体展示技术筛选非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)K205R蛋白的特异性纳米抗体。【方法】将原核表达、纯化的ASFV K205R蛋白免疫双峰驼，采集全血，分离外周血淋巴细胞，提取总RNA并反转录，巢式PCR扩增VHH基因，构建VHH噬菌体文库，利用噬菌体展示技术筛选K205R特异性纳米抗体。【结果】成功构建库容量为5×10⁸的VHH噬菌体文库，然后利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，特异性VHH噬菌体得到明显富集，氨基酸序列比对显示共筛选出5株K205R蛋白的特异性纳米抗体，分别为ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb14、ASFV-K205R-Nb35、ASFV-K205R-Nb64和ASFV-K205R-Nb82。【结论】筛选的5株纳米抗体均具有良好的特异性，其中ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb35和ASFV-K205R-Nb82具有更好的亲和力，为以纳米抗体作为灵敏探针建立的特异性强、灵敏度高、成本低的新型ASFV血清学诊断方法提供依据。     

噬菌体与动物细胞的相互作用

噬菌体是动物体内最丰富的生物群体。噬菌体易获得、宿主特异性强、不易产生耐药性等特点使其在治疗耐药细菌感染方面具有很大优势。随着基因工程和显微镜技术的发展，噬菌体对动物细胞的调节机制逐渐被发现。笔者综述了近年来关于噬菌体进入动物细胞的机制、噬菌体在细胞内的分布及与细胞内受体相互作用的研究进展，强调了噬菌体在协助宿主细胞杀灭细菌过程中的作用，讨论了噬菌体与动物细胞相互作用对噬菌体治疗的意义，旨在为噬菌体治疗耐药细菌的研究提供理论基础。     

噬菌体在无抗养殖领域的应用

噬菌体本质是一种可侵染细菌的病毒,广泛分布在于自然界,医学上常用来控制耐药菌的感染;噬菌体在兽医临床使用具有无药残、安全性好、治疗更彻底的特点,同时也面临血清型要求严格,活性易受影响,体内易被代谢等问题;目前噬菌体技术在无抗养殖领域处于初级应用阶段,主要用在种畜禽病原净化、疾病治疗及解决抗生素耐药问题等方面。     

一株分离自团头鲂的嗜水气单胞菌病原学及其与ST251型菌株的全基因组比较

为确定湖北仙桃一团头鲂(Megalobrama amblycephala)专养池塘的发病病原体及病原特征,并从全基因组层面初步分析该病原菌的毒力和耐药特征,本研究从患病团头鲂的肝脏分离得到一株病原菌LHW39,经理化性状及16S rRNA鉴定,表明LHW39为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).多...     

植物青枯菌噬菌体保存方法的研究

噬菌体可用于防治植物青枯病,但不易保存.本文对青枯病菌短尾噬菌体P1、P2、P3和P4株系的保存方法和条件进行了研究;将各噬菌体原液、噬菌体原液∶青枯菌液=1∶1、噬菌体原液∶青枯菌液∶40％甘油=1∶1∶2、噬菌体原液∶青枯菌液∶80％甘油=1∶1∶2的处理分别置于-75、-25、4℃、室温下保存,再分别于90、18...     

新型鹅星状病毒ORF2蛋白纳米抗体的筛选及鉴定

【目的】由新型鹅星状病毒(novel goose astrovirus, nGAstV)引起的雏鹅痛风病对我国养鹅业造成了重大经济损失。通过构建nGAstV纳米抗体(nanobody, Nb)噬菌体展示文库，获得识别nGAstV ORF2蛋白的特异性Nb，可为建立nGAstV抗体检测方法及研究nGAstV ORF2蛋白结构和功能奠定基础。【方法】使用蔗糖密度梯度离心方法纯化在LMH细胞中增殖的nGAstV,RT-PCR鉴定nGAstV并通过细胞病变测定nGAstV滴度。用0.06%甲醛溶液灭活纯化的nGAstV作为免疫原，免疫两周岁羊驼。首次免疫时用灭活纯化的nGAstV与等量弗氏完全佐剂乳化后免疫，第2—5次免疫用灭活纯化的nGAstV与等量弗氏不完全佐剂乳化。每间隔两周免疫一次，每次免疫剂量均为50μg。第5次免疫14 d后，通过间接ELISA方法测定羊驼血清中针对nGAstV的IgG抗体效价。待IgG抗体效价达到构建噬菌体抗体展示文库标准时，分离羊驼外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte, PBL)，然后提取PBL总RNA将其反转录为cDNA，利用...