抗人整合ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体的构建和表达

为构建抗人整合素ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面表达,采用PCR方法从整合素ανβ3单抗E10ScFv载体中,扩增重链可变区VH和轻链可变区VL基因。将VH基因与人重链恒定区CH1基因连接,VL基因与人CK基因连接,分别构建了鼠/人嵌合重链FD基因和轻链基因,将其克隆入pComb3,构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,用辅助噬菌体VCSM13超感染,间接ELISA及竞争抑制ELISA检测鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体活性。结果成功构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面展示了可结合人整合素ανβ3抗原的鼠/人嵌合Fab抗体。     

低能重离子对T1噬菌体和T1 dsDNA的影响及与紫外线效应的比较

以大肠杆菌噬菌体Ｔ１为材料,探讨了４０ｋｅＶＰ＋和Ｎ＋离子注入及３０ｋｅＶＮ＋离子脉冲式注入后,噬菌体的失活（以空斑形成能力即ＰＦＡ丧失为指标）及Ｔ１ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳图谱的变化,并同紫外线（２５３．７ｎｍ）引起的相应效应进行了比较。结果表明：（１）离子注入组噬菌体的存活率低于对照组,其失活效应随剂量升高而提高;高剂量组的ＤＮＡ电泳图谱比对照组多一条分子量略小的弱带,且主带有明显拖尾现象,提示Ｔ１ＤＮＡ分子经离子注入后发生了部分主链的断裂;（２）紫外线照射对噬菌体的失活效应比离子注入组强烈得多,但其ＤＮＡ电泳图谱与对照组相比未见任何差异;（３）离子束的束流密度对噬菌体的失活效应也有一定影响。     

短沟对虾和凡纳对虾溶菌酶cDNA的克隆与序列分析

溶菌酶是生物体内重要的非特异免疫因子之一，能催化细菌细胞壁肽聚糖中的β-1，4糖苷键的水解，导致细菌溶解死亡。同时在引发和维持机体防御免疫过程中起重要作用。按溶菌酶进化地位和氨基酸序列差异可分为5类：鸡蛋清溶菌酶(c-型)、鹅溶菌酶(g-型)、噬菌体溶菌酶(p-型)、植物溶菌酶和细菌溶菌酶。     

牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库的构建与鉴定

通过构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)驼源重链抗体文库,并鉴定抗体文库的多样性,为筛选抗BVDV特异性重链抗体奠定基础。利用灭活的BVDV免疫双峰驼,多次免疫后测定血清抗体滴度,采集免疫后的血液并分离其外周淋巴细胞,抽提RNA,用RT-PCR法扩增重链抗体可变区(VHH)片段;将其克隆至载体pCANTAB5E,电转大肠杆菌TG1获得VHH抗体基因库,检测抗体库库容量,随机挑取克隆测序验证抗体文库多样性。结果表明,所构建的抗体文库的库容量为4.32×105;测序和聚类分析表明,抗体文库多样性丰富。利用辅助噬菌体救援后,得到噬菌体展示文库,测定滴度达1.3×1012 cfu/mL。     

猪轮状病毒VP7蛋白模拟表位的噬菌体展示技术筛选与鉴定

猪轮状病毒(Po RV)是引起仔猪腹泻的重要病原之一,其主要结构蛋白衣壳蛋白VP7可诱导机体产生中和抗体。文章以制备的抗Po RV VP7单克隆抗体(MAb)3B6作为靶分子,利用噬菌体十二肽库展示技术对其模拟表位进行筛选。四轮筛选后随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定,同时提取其基因组DNA测序,10个阳性噬菌体亲和肽拥有共同的外源肽序列"VPLGTDNGDIWV",而且与靶分子有很高亲和力。阳性噬菌体亲和肽与VP7蛋白进行序列比对,结果表明,十二肽中有4个氨基酸(第167位P、第178位T、第179位D和第184位W)与VP7蛋白167~184位氨基酸有一定的相似性。竞争抑制ELISA证明亲和多肽降低Po RV与抗VP7单克隆抗体之间的作用,病毒竞争抑制试验表明亲和多肽可以竞争性地抑制Po RV感染细胞。因此由这4个氨基酸构成的基序很有可能作为猪轮状病毒VP7蛋白的一个模拟表位。     

抗猪脂肪细胞膜抗体库的构建

通过免疫方法降低猪脂肪含量、提高胴体品质成为人们研究的一个新课题,噬菌体展示技术的完善与发展为实现这一研究目的提供了条件,成为制备高亲和性抗体的有力工具。用猪脂肪细胞免疫小鼠,提取mRNA,反转录成cDNA。通过PCR扩增出重链可变区基因VH和轻链可变区基因VL,再用编码(Gly4Ser)3的Linker将VH、VL连接在一起,克隆入pCANTAB5E中,转化大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染,构建噬菌体抗体库并进行筛选。     

噬菌体治疗研究进展

随着致病性细菌耐药性的加剧,以及患免疫抑制病人的伴发症发生率增高,人类正面临着严峻的现实--重新回到"抗生素发现以前的时代".目前寻找有效的抗菌制剂已成为现代医药工业中的紧急问题.在这样的时代背景下,噬菌体治疗的研究重新进人人们的视野[1].     

应用属特异单抗和分属噬菌体鉴定沙门氏菌分离株的比较研究

本研究应用属特异单抗和分属噬菌体对１０２株疑似沙门氏菌分离株进行了鉴定，并以标准程序作验证，结果表明，属特异单抗ＥＬＩＳＡ反应阳性的７７株菌株中，７６株为沙门氏菌１－株为弗劳地氏柠檬酸杆菌，而分属噬菌体Ｏ－Ｉ裂解阳性的７４株细菌中，７２株为沙门氏菌，２株大肠杆菌，同时出现了漏检。这预示着属特异单抗试剂的沙门氏菌鉴定和快速检验中有很广泛的应用前景。     

利用噬菌体随机肽库筛选胰腺癌特异性血清标志物

目的探讨利用噬菌体随机肽库筛选胰腺癌特异性血清标志物的可行性。方法纯化40例正常人和40例首次确诊的胰腺癌患者的血清免疫球蛋白,进行3轮噬菌体随机肽库的亲和筛选,并随机挑选20个克隆进行阳性鉴定,对阳性克隆进行DNA测序和对比分析。结果通过正常对照的阴性排除和3轮亲和筛选,噬菌体随机12肽回收率提高了500倍。随机挑选的20个克隆中有10个阳性克隆,经DNA测序分析获得4条多肽。阳性克隆的敏感性为100%,特异性为95%,阳性预测值为95.2%,阴性预测值为100%,准确性为97.5%。结论利用噬菌体随机肽库能够成功筛选出胰腺癌患者特异性血清标志物。