以森林南川为载体 创新林业城乡统筹

由于重庆市大城市带大农村的特点,因而被中央确定为全国城乡统筹的试点市。所以,重庆市各级各地、各行备业都有搞好城乡统筹的义务和责任。     

1株吉式库特菌噬菌体vb＿KgiM＿P1的生物学特性及全基因组分析

吉式库特菌在自然界普遍存在,有的作为机会致病菌可引起动物疾病。本研究发现了1株吉式库特菌(Kurthia gibsonii)噬菌体vb＿KgiM＿P1 (简称MP1),并对其生物学特性和全基因组进行研究。透射电镜观察显示MP1具有典型的二十面体结构的头部和可收缩的尾部,属于肌尾病毒科(Myoviridae)。生物学特性研究表明,MP1的最佳感染复数为1,裂解周期在50 min左右,潜伏期约为15 min,暴发期约为50 min,平均暴发量约为83 PFU/cell,表明该噬菌体有高效的杀菌活性。MP1的稳定性良好,在25～50℃之间和pH值3～11之间保持稳定的裂解活性。全基因组测序显示该噬菌体基因组全长为15 855 bp, G+C含量为32%,有20个开放阅读。系统发育分析结果表明MP1与葡萄球菌噬菌体和肠球菌噬菌体属于共同起源的不同进化分支,且相似性较低,证明MP1是1株全新的烈性噬菌体。     

鸡缩胆囊素(CCK)在T4噬菌体表面的展示及免疫原性研究

采用T4噬菌体表面展示系统，将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面，并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ФT4-Z1重组，获得重组噬菌体CT-4CCK和西T-8CCK。SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明，CCK多串联体蛋白已经成功展示在T4噬菌体表面，其融合蛋白分子量约30ku和41ku，能够与CCK标准阳性血清发生特异性反应。以重组噬菌体为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡后，抗体浓度显著升高，肉鸡的体重、采食量都有所提高，而料肉比有所下降。结果说明，鸡CCK蛋白展示在T4噬菌体表面具有良好的免疫原性。     

2型鸭疫里默氏菌42 000外膜蛋白的克隆与表达

利用PCR技术扩增了标准血清2型鸭疫里默氏菌的42000外膜蛋白基因片段（OmpA-2）1045bp,将其克隆到pGM-T-Easy克隆载体和pGEX-4T-1原核表达载体中,分别构建了pGM-OmpA-2和GST-OmpA1-2重组子,并进行了测序和表达。对表达产物做了SDS-PAGE和Western-blotting检测。结果表明,扩增获得的外膜蛋白基因序列与Gen-Bank中已发表的鸭疫里默氏菌外膜蛋白序列的同源性为95.4%,氨基酸序列间仅存在点置换,无插入或缺失变异,证明重组子构建正确。SDS-PAGE和Western-blotting检测表明,获得的融合表达蛋白GST-OmpA1-2的相对分子质量约为65000。     

产地批发市场是促产业发展和农民增收的重要载体

米易县位于四川安宁河下游,农业人口占全县总人口的89%。作为四川早春蔬菜的主产区,蔬菜是米易县农业生产的一大支柱和特色。2011年全县蔬菜面积6500hm2,比2001年增长95%,其中设施蔬菜面积增长近5倍。     

动脉炎病毒属病毒的传染性cDNA克隆及其作为疫苗载体的研究进展

作者根据病毒反向遗传学的基本原理、动脉炎病毒的基因结构和亚基因mRNA的合成，就动脉炎病毒传染性cDNA克隆的构建及基因工程操作的研究进展作一综述。以期利用传染性cDNA克隆作为工具，构建出安全、有效的新型疫苗。     

山羊痘病毒ORF8～ORF18缺失重组毒株的构建和鉴定

本研究旨在通过敲除山羊痘病毒(GTPV)大段基因组片段尝试构建安全性更好的基因工程减毒株和病毒表达载体.采用PCR方法,克隆了GTPV AV41株基因组ORF7～ORF8间1 242 bp的基因片段,以及ORF18～ORF19间1 355 bp的片段.接着分别以上述2片段作为左、右侧同源重组臂,构建了包含报道基因EGFP和抗性基因gpt的GTPV重组转移载体pCF-Eg.然后采用脂质体介导法,将重组转移载体pCF-Eg与GTPV AV41株共转染原代羊睾丸细胞,通过空斑纯化筛选阳性重组病毒,并鉴定重组病毒的遗传稳定性和生长特性.结果成功获得1株敲除掉ORF8～ORF18间9个ORF、长达7 kb基因组片段的重组病毒vCF-Eg.该重组病毒能稳定表达绿色荧光蛋白至少10代,并且其增殖滴度与亲本毒株基本相同.表明上述区域是GTPV的复制非必需区.     

自身启动子控制的卡那霉素抗性基因在哺乳动物细胞中表达的检测

为了研究卡那霉素抗性(KanR)基因能否在哺乳动物细胞中表达以及用含相同抗性基因重组质粒防治奶牛乳腺炎的安全性,用PCR从重组质粒p215C3LYZ中扩增得KanR基因,将其克隆入原核表达载体pQE-31,用含卡那霉素(Kan)琼脂平板筛选得KanR重组菌,经IPTG诱导成功表达了预期大小的Kan抗性融合蛋白;用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了Kan抗性蛋白抗血清,经Western blotting证明免疫血清特异性良好;分别用重组质粒pQE-Kan和p215C3LYZ转染COS-1细胞,在不含抗生素培养液中培养后分别收集细胞上清和细胞裂解物;将转染细胞上清分为添加和不加Kan组,接种Kan敏感菌DH5α大肠杆菌,培养物的OD600检测结果显示,添加组的指示菌生长被抑制,转染细胞上清中无Kan抗性蛋白表达;以Kan抗性蛋白免疫血清进行的Western blotting结果显示,转染细胞内无Kan抗性蛋白表达;将p215C3LYZ注射奶牛乳腺,用脱脂和浓缩奶样进行Western blotting检测,结果显示试验牛乳中也无Kan抗性蛋白表达。这些试验结果提示,来源于原核大肠杆菌的KanR基因启动子在动物细胞中无转录活性,乳腺注射含KanR基因的重组质粒不会表达对奶牛和人体有害的Kan抗性蛋白。     

减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗诱导对新城疫病毒的免疫保护

探讨了以减毒鼠伤寒沙门氏茵为栽体传递新城疫病毒DNA疫苗的安全性、免疫原性和可行性。将含新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pcDNA3-F的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株(ZJ111／pcD-NA3一F菌株)，以10^8CFU进行首免，2周后二免，三免后4周攻击强毒株F48E9，观察其安全性和免疫原性，同时设只含空载体pcDNA3的ZJ111／pcDNA3菌株对照及口服PBS对照。结果表明：重组ZJ111／pcDNA3-F菌株具有良好的安全性。对强毒株攻击的保护率达64．7％。重组ZJ111／pcDNA3-F菌株不仅能诱导雏鸡产生NDVELISA抗体，而且诱导产生的法氏囊B淋巴细胞和胸腺T淋巴细胞增殖反应显著高于ZJ111／pcDNA3时照组。这些结果提示，减毒沙门氏菌为载体不仅可直接将NDVF基因呈递给鸡体细胞进行表达，产生抗NDV的体液免疫，而且还可诱导细胞免疫应答。