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31.
应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA 总被引:1,自引:0,他引:1
运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。 相似文献
32.
33.
CHENXiu-hua LIUQiao-quan WuHsin-kan WANGZong-yang GuMing-hong 《水稻科学》2004,11(3):81-85
Two starch-branching enzyme (SBE) in rice, is known to be a key enzyme in amylopectin biosynthesis. The cDNA of two SBE(starch-branching enzyme) genes SheI and Shed encoding SBE Ⅰ and SBE Ⅲ (two major isoforms in rice) were cloned by an improved RT-PCR technique, from a template cDNA libray, derived from the total mRNAs extracted from the immature seeds of a japonica rice Wuyunjing 7. DNA sequence analysis showed that the size of the cloned SheI and Shed cDNAs were 2490 and 2481 bp long, respectively, including their entire coding sequences. Comparison analysis indicated that the nucleotide sequence of She3 was the same as that of shed (Genbank Accession No. D16201) as reported previously. There were only four base-pairs difference,which resulted in changes of two deduced amino acids between the cloned She1 cDNA and the reported she1 (Genbank Accession No. D11082). The cloned SheI and Shed cDNAs make it possible to improve rice starch quality through genetic engineering. 相似文献
35.
采用样线与样方相结合的调查方法,根据点相关系数及X^2值连续性较正公式,测定了小兴安岭凉水自然保护区具有环境梯度的7个森林类型内主要蕨类植物的种间联结。结果表明:各林型均有其适生的蕨类类群,与该类群呈正联结的蕨类种其数量分布也多,反之刚少;具有环境梯度的不同林型序列,反映出蕨类植物适生生境的不同,据此,将本区主要蕨类植物分为4种生态类型。 相似文献
36.
参考 Genbank收录的 TGEV- Miller株的基因序列 ,自行设计合成 1对引物 (TGEVP5 /P6 ) ,对不同代次的 TGEV疫苗弱毒 STC3及种毒 、种毒 进行了 RT- PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,均出现 1条大约 12 6 2 bp的目的条带 ,经 Eco R 酶切 ,都产生了 871bp和391bp左右的两个片段 ,与预期大小相符。将种毒 RT- PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18- T载体中 ,转化宿主菌 DH5 α,挑选阳性克隆 (命名为 PTs) ,提取重组质粒 ,用 Hpa 、Eco R 对重组质粒进行酶切鉴定以及 PCR扩增 ,然后进行序列测定 ,并进行了序列分析 ,证实与国外标准毒株 Miller、Fs772 / 70、Purdue、TO14等有较高的同源性 相似文献
37.
应用RT-PCR和3′RACE技术,本研究从猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪CD3ε基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,猪CD3εcDNA序列长1241nt,其中5′非翻译区80nt,3′非翻译区570nt,开放阅读框591nt,该开放阅读框编码196个氨基酸残基的CD3ε前体蛋白(无糖基化位点);在猪CD3ε蛋白的胞外区,Cys49、Cys91、Cys108和Cys111为保守性氨基酸残基,它们与CD3ε免疫球蛋白样结构的形成有关。在猪CD3ε蛋白胞浆区,存在免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)、内质网潴留基序和1个SH3结合基序,其中ITAM基序含有2个SH2结合基序和2个潜在酪氨酸磷酸化位点Tyr177和Tyr188,这些基序是猪CD3分子参与T细胞活化信号转导和TCR-CD3复合体装配的结构基础。推导氨基酸序列分析结果表明,猪与人、鼠、狗、牛和绵羊CD3ε蛋白的氨基酸同源性分别为61.2%、58.7%、58.7%、65.1%和65.6%。 相似文献
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39.
40.
月季切花乙烯受体ETR1 cDNA克隆及其序列分析* 总被引:6,自引:0,他引:6
根据乙烯受体基因ETR1 保守区设计引物, 分别以瓶插寿命差异显著的月季切花品种‘德克萨斯’和‘维亚蒂’为材料, 通过RT-PCR 从花瓣中扩增出了797 bp 的cDNA 片段, 它编码265 个氨基酸。测序和序列分析表明,‘德克萨斯’重组质粒中插入片段的核苷酸序列之间完全相同, 命名为pRT-ETR1。而‘维亚蒂’所获得的重组质粒中插入片段的核苷酸和氨基酸序列之间存在差异, 同源性分别为85. 2 %和92. 1 % , 分别命名为pRV-ETR1-V4 和pRV-ETR1-V5。pRV2 ETR12V5 的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT2 ETR1 的同源性均达99 %以上; pRV-ETR1-V4 中的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT-ETR1 的同源性分别为85. 0 %和92. 5 %。上述插入片段与桃、苹果、天竺葵、拟南芥等植物的ETR1相应区域高度同源, 其氨基酸同源性均大于90 %。 相似文献