细菌活载体疫苗的研究进展

随着重组DNA技术的发展和应用，基因工程疫苗的研究取得了快速的进展。其中，最有发展前景的研究领域之一，是以细菌为活载体的疫苗。细菌活载体疫苗的优点．可将保护性抗原在细菌的质粒、基因组的某些部位或细菌表面表达。     

猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达

用RT-PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株(Shimen)、近期地方流行的属于第1群毒株的新疆毒株(XJ)和第2群代表毒株甘肃临洮(LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增，均得到约561bp的基因片段；经克隆测序及序列分析，该基因编码187个氨基酸残基，预计蛋白分子质量为21.7ku。将这4个基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中，阅读框是正确的，从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中，用异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达，对表达的蛋白用SDSPAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明，E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达，表达的蛋白多以包涵体形式存在，表达产物的分子质量约为50．0ku，与理论推测的分子质量一致；薄层凝胶扫描分析表明。表达蛋白约占菌体蛋白总量的20．1％；免疫印迹结果证明，表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。     

微量元素氨基酸螯合物在养猪业上的研究概况

微量元素氨基酸螫合物是一种新型的有机矿物饲料添加剂，是由可溶性金属盐中的金属元素同氨基酸按一定摩尔比(1～3)，以共价键结合而成的新一代微量元素——氨基酸营养性添加剂，水解氨基酸的平均分子量约为150，所生成螫合物的分子量不超过800。可同时补给动物所必需的高效微量元     

猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM-T easy载体上，测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域，切出目的基因，将目的基因克隆到表达质粒pProEX—HTb中，获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因抗原结构域插入的位置、大小和读码框均正确，SDS—PAGE检测表明受体菌经IPTG诱导后能表达E2基因抗原结构域蛋白，Westernblot检测表明受体菌诱导表达E2基因抗原结构域蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性反应。     

云南省部分地区山羊痘流行病学及血清学调查研究

2002年8月以来云南省富源县及部分地区的山羊发生一种以体温升高,眼结膜潮红,眼鼻有大量浆液性或粘液性分泌物,口腔流涎,在无毛及少毛部位皮肤出现红斑及痘疹为特征的急性、接触性的地方传染病。其发病率为18.5%~100%,死亡率7.3%~67.0%。自制山羊痘凝胶抗原,应用琼脂扩散试验(AGID)方法,对云南省的11个地、县、乡的疫点进行抽样调查,阳性率为72.3%。免疫保护率为91.2%,以山羊痘发病羊血清及组织病料进行抗体及PCR检测,在抗体阳性病例中,PCR检测结果亦为阳性,说明该抗原具有严格的特异性。     

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达

根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物，用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后，克隆至质粒表达载体pET-32a( )，成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3)，并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10．8％，其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后，用E．necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析，结果为阳性。     

HBV/HAV复合抗原基因在CHO细胞中的表达

为探讨HBV／HAV复合疫苗的可行性，利用DNA重组技术将HBsAg与HAW复合多表位抗原基因VPX进行融合，插入到真核表达质粒pVAX1多克隆位点，构建成核酸表达疫苗pVAX1／SVPX，将其转染CHO细胞。转染细胞培养48h后，进行RTPCR、Western-blot、ELISA分析，结果表明HBV／HAV复合抗原基因SVPX能够在CHO细胞内转录、表达，融合蛋白具有HBV和HAV抗原的特性。     

伊氏锥虫多种克隆群体的采集及血清学检测

针对伊氏锥虫抗原变异，国内外学者对抗原变异规律进行了研究，对其抗原变异程序、变异数量、变异频率等有了一定的了解，在此基础上进行免疫学研究进而寻求防治锥虫病的免疫学手段。但多局限于某种动物个体感染锥虫后的一小段有限的时间进行，所获得的抗原变异型数量较少，因而很难澄清如：一个虫株究竟能有多少变异机会，是以怎样的程序变异的等问题。     

不同产地马生产破伤风抗毒素血浆对比试验

破伤风抗毒素马血浆是精制破伤风抗毒素的生产原料。张家川县每年投入200多匹马生产破伤风抗毒素血浆。在生产中，为了提高经济效益，我们用张家川、华亭、礼县三个产地的马进行破伤风抗毒素血浆生产对比试验，比较结果得知，不同产地的马经破伤风抗原免疫后生产破伤风抗毒素血浆，产生的结果不同，现将对比试验结果报告如下。     

动物预防用DNA疫苗的研究进展

动物预防用DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒DNA(有时也可是RNA)，它可经一定途径进入动物体内，被动物宿主细胞摄取后能转录和翻译表达出抗原蛋白，此抗原蛋白能够刺激机体产生非特异性和特异性两种免疫应答反应，从而起到免疫保护作用。