单毛囊RT-PCR技术在哺乳动物毛囊基因表达研究中的应甩

为了研究单毛囊RT-PCR技术在哺乳动物的毛发基因表达中的应用,试验以人的毛发为研究对象,利用单毛囊RT-PCR技术体系在1根头发的毛囊相关基因表达中成功地获得目的基因片段,经测序证实为目的基因片段.结果表明:该技术体系在研究毛囊相关基因的表达中取得了理想的结果.试验体系可以用于活体微创条件下研究毛囊相关基因的表达分析...     

加减三黄汤对耐药大肠杆菌acrA mRNA表达水平的影响

为了解加减三黄汤对大肠杆菌耐药性的影响,采用实时荧光定量方法检测了外输泵acrA mRNA表达水平的变化。将100只昆明系小鼠分为阳性组(感染耐药性大肠杆菌2 751株和2 952株),阴性组,攻毒治疗组(2 751株+加减三黄汤,2 952株+加减三黄汤),8d后将鼠随机剖杀,取肝组织抹片培养大肠杆菌,做药敏试验,同时提取质粒,检测大肠杆菌外输泵基因acrA的mRNA表达量。结果显示,经加减三黄汤在体治疗后的大肠杆菌耐药性下降了,每μL中mRNA拷贝数为2 751株最高达1016,2 952株1015;用药后各菌株均有下降;相差极显著(P≤0.01),耐药性越大的拷贝数越多。表明加减三黄汤对耐药大肠杆菌外输泵基因acrA的mRNA表达水平影响与耐药性有一定的相关性。     

梅山猪垂体中GH、PRL及TSHβ基因发育性表达规律的研究

生长激素(GH)、催乳素(PRL)及促甲状腺激素β亚基(TSHβ)是动物生长发育过程中的重要调控因子。本研究我们通过RT-PCR检测了GH、PRL及TSHβ基因在不同生长阶段梅山猪垂体中mRNA的表达水平。结果发现:GH和TSHβ基因在公、母猪的生长发育过程中的表达量总体上都呈现先升高后降低的趋势;而PRL在公猪中的表达量在不同发育阶段相对稳定,而在母猪中呈现先下降后升高的趋势。总体上GH、PRL及TSHβ3个基因在公、母猪的生长发育过程中的表达呈现性别二相性。其中GH基因的表达在1、30、90和150日龄公、母猪间呈现出显著差异(P0.05);而PRL基因的表达在1、60和90日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05);而TSHβ基因的表达在60和150日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05)。     

边界病病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的RT-PCR方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3′-UTR基因为靶基因,设计了特异扩增BDV的引物。通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的RT-PCR检测方法。进一步优化该方法的反应条件,并进行特异性、敏感性及临床样品检测。结果显示,该方法在退火温度48～60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性,表明其特异性良好;同时,该方法具有良好的敏感性,最低检出限可达10¹拷贝/μL,敏感性极高。利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊,发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3～7 d的血液和淋巴结...     

防治禽流感8项国家标准发布

“牛眼上膜”是牛的一种常见病,多发生于夏秋农忙季节,轻者双眼流泪,结膜暗红,视力障碍,重则失明,影响劳役。自1997年以来,笔者应用插枝方法试治耕牛149头,痊愈114头,占76．5％,好转28头,占18．8％,无效7头,仅占4．7％,且该法具有简便易行、安全可靠、无毒副作用等优点。现介绍如下,供与同仁们探讨。     

动物产品沙门氏菌污染情况调查

2007—2009年,应用荧光定量PCR方法对1669份分批采自屠宰场和冻肉库的动物产品增菌后进行沙门氏菌检测,共检出沙门氏菌阳性169份,总阳性检出率为10.13%;其中冻肉库检测样品264份,沙门氏菌阳性55份,鸡肉检出率为25.93%,猪肉检出率为11.76%,鸭肉检出率为30.95%,羊肉检测出率为15.38%,牛肉检出率为12.5%;屠宰场检测1405份猪肝,沙门氏菌阳性114份,阳性检出率为8.11%。结果表明,屠宰场和冻肉库的动物产品都有不同程度的沙门氏菌污染。     

盐胁迫下棉花叶绿素荧光参数的变化

通过对比耐盐和盐敏感棉花材料在盐胁迫下的叶绿素荧光参数的变化,探究棉花在盐害下的自我保护机制及筛选鉴定棉花耐盐性的生理生化指标。以耐盐材料中棉所35和盐敏感材料中棉所12为试验材料,设置梯度分别为0(对照)、100、200、300及400 mmol/L的NaCl溶液处理四叶期的棉花幼苗,测定叶绿素荧光参数。结果表明,耐盐棉花材料和盐敏感棉花材料在叶绿素荧光参数变化趋势上具有明显差异。叶绿素荧光参数可作为鉴定棉花耐盐性的生理生化指标,进一步研究将综合其他多种生理生化指标构建数学模型,定量衡量棉花的耐盐性强弱。     

遮荫对茄子幼苗叶片叶绿素荧光特性的影响

研究了不同遮荫处理对茄子幼苗叶绿素荧光参数的影响。结果表明,与全光照条件下相比,遮荫处理使非光化学猝灭系数(NPQ)和光系统激发能压力(1-qP)降低;最大荧光(Fm)、PSII最大光化学效率(Fv/Fm)、PSII潜在活性(Fv/Fo)、PSII实际光化学效率(ФPSII)、天线转化效率(Fv’/Fm’)、光化学荧光猝灭系数(qP)和电子传递速率(ETR)增加。光化学反应的能量(P)在叶片所吸收的光能中所占的比例也逐渐增加,天线色素耗散的能量(D)表现出和P相反的趋势,非光化学反应耗散的能量(E)变化不稳定。以上结果表明,茄子对弱光胁迫有一定的自我调节能力和适应能力,一层遮阳网处理下,茄子幼苗光系统II光化学效率最高,可在育苗生产中应用。     

利用RT-PCR对病料中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测

本试验对枣庄市中区6个乡镇及周边地区的54个不同规模猪场及散户所采集的172份临床疑似＂猪高热病＂样品进行了检测,结果发现,枣庄地区检出高致病性PRRSV阳性占56.4%（97/172）,CSFV阳性占31.4%（54/172）。PRRSV和CSFV的混合感染占12.2%（21/172）,说明枣庄地区大部分猪场已经普遍存在PRRSV感染。     

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis) miR-223的表达特征及免疫应答分析

microRNA(miRNA)是一类内源性、长度约为22个核苷酸的非编码小单链RNA分子,由具有发夹结构的70-90个碱基的单链RNA前体经过Dicer酶加工而成.本研究使用荧光实时定量PCR (Quantitative Real-Time PCR, qRT-PCR)方法,研究了miRNA-223(miR-223)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)各健康组织、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后各时间点的免疫组织以及不同病原类似物刺激后头肾细胞中的表达模式.结果显示,miR-223在半滑舌鳎各组织中均有表达,在头肾中表达量最高,在脑和血液中的表达量极低.鳗弧菌感染3组样品4种免疫组织,miR-223表达变化显著,感染后20 h内,鳗弧菌诱导miR-223上调表达.鳗弧菌感染后半滑舌鳎免疫组织miR-223表达变化规律显示,鳗弧菌感染2、6、12、24、48、72、96和168 h后,miR-223在肝、肠、脾、头肾4种组织中出现差异表达.其中,miR-223在半滑舌鳎肝、脾、头肾中表达上调,在肠中表达下调.用LPS、poly I:C、PGN、RGNNV感染半滑舌鳎头肾细胞后,发现经LPS、RGNNV诱导后miR-223上调表达,poly I:C、PGN诱导后miR-223下调表达.研究结果表明,miR-223参与了半滑舌鳎免疫应答过程.本研究结果有助于了解miRNA在半滑舌鳎对病原刺激免疫应答过程中的作用以及半滑舌鳎与病原相互作用中miRNA参与调控的机制.