Immune Efficacy of a Recombinant Fowlpox Virus Co-Expressing HA and NA Genes of Avian Influenza Virus in SPF Chickens

A recombinant fowlpox virus co-expressing Haemagglutinin (HA) and Neuraminidase (NA)named as rFPV-HA-NA was produced by HA and NA gene of A/Goose/Guangdong/3/96 (H5NI)isolate of avian influenza virus recombined into the genome of fowlpox virus. In this study, to evaluate its ability of protecting chickens against challenge with a lethal dose of highly pathogenic isolates of avian influenza virus, eight-week-old specific-pathogenic-free (SPF) chickens were vaccinated with recombinant virus or the wildtype fowlpox virus by wing-web puncture. After challenge 4 weeks with i0 LD50 highly pathogenic avian influenza virus HSNI and H7NI isolate, all chickens vaccinated with recombinant virus were protected, while the chickens vaccinated with the wildtype fowlpox virus or unvaccinated controls experienced 100% mortality respectively following challenge. This complete protection was accompanied by the high levels of specific antibody response to the respective components of the recombinant virus.     

内蒙古白绒山羊编码HGT-I型蛋白的特征分析

对内蒙古白绒山羊毛囊兴盛期的表达序列标签(EST)进行生物信息学方法的分析，通过在Genbank核酸数据库的Blastn相似性检索后发现有22个ESTs与小鼠的HGT protein type I E5 mRNA基因有很高的同源性，进一步地分析发现这22个ESTs可分为两种不同的序列。经ORF(开放读码框)的预测共编码2种不同的蛋白质。这2个蛋白质的氨基端和羧基端的氨基酸残基都十分得相似，其甘氨酸、酪氨酸的含量达到了71．93％，而苯丙氨酸的含量达到了10.18％。并对其进行了二级结构的预测，发现它们在二级结构上有着很高的相似性。这2个蛋白质家族成员与小鼠的HGT蛋白质在氨基酸的组成和结构上都有很高的保守性。     

柑橘衰退病毒柚类分离物CP基因的克隆及原核表达分析

以来自湖北省的HB柚柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)分离物(CTV-HB1)为材料,利用RT-PCR技术对其CP基因进行克隆,序列分析结果表明:CTV-HB1与典型茎陷点分离物SY568和NUagA的核苷酸和推定氨基酸的序列相似性均在97%以上,而与CTV速衰分离物T36和弱毒分离物T385和T30的核苷酸和氨基酸序列相似性较低,均在95%以下。将CP基因片段连接到表达载体,转化大肠杆菌后诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE和Westen-blot分析结果表明,经IPTG诱导后产生了预期大小的重组蛋白,该蛋白可与CTV-L5提纯病毒制备的多克隆抗体发生特异性免疫反应。     

源于马铃薯Y病毒CP基因的dsRNA原核表达及提取

以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)为基础构建了含PVY CP基因3’端253bp反向重复片段的双链RNA(dsRNA)原核表达载体,并转化大肠杆菌HT115(DE3),经IPTG诱导产生dsRNA,用LiCl沉淀法提取,获得了高质量的dsRNA。     

以听带动说,培养英语思维与表达——《商务英语听力》教学探析

听力课在英语基础阶段教学中占有重要地位,但是如何才能上好听力课,本文结合英语听力课的特点进行分析,以听带说,培养学生的思维与表达,使听力课充分发挥其功效达到进行得体交流的目的。     

猪TGFβ1基因及其受体组织表达特性的研究

以妊娠母猪为研究材料,采用RT-PCR半定量方法对猪转化生长因子β1(TGFβ1)及其3种受体组织表达特点进行研究。结果表明:TGFβ1在11种组织中的表达量,由高到低依次为肾上腺、下丘脑、肌肉、卵巢、脾、大脑、肾、子宫、肺、肝和心脏。3种受体的表达,总体上来说在子宫中相对较高。TGFβ1及其受体在肾上腺和子宫等组织中有相对较高的表达量,提示其在繁殖过程中可能发挥作用。     

circADAMTS16的表达谱分析及其对牛脂肪细胞分化的影响

旨在探究 circADAMTS16在牛不同组织和前体脂肪细胞中的表达水平及其对牛脂肪细胞分化的影响，为进一步研究circRNA在细胞分化和脂肪组织发育过程中的调控作用提供依据。采用组织块法分离培养牛原代前体脂肪细胞并诱导分化，模拟牛脂肪组织生长发育过程；通过qRT-PCR检测 circADAMTS16在牛不同组织（心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪）和脂肪细胞分化不同阶段（0 d、2 d、4 d、8 d、10 d）的表达水平；构建 circADAMTS16的过表达载体（pCD2.1- circADAMTS16），设计合成 circADAMTS16的小干扰RNA （si- circADAMTS16），采用（Lipofectamine3000）转染试剂将pCD2.1- circADAMTS16和si- circADAMTS16转染牛前体脂肪细胞，利用qRT-PCR法检测转染效果，同时检测脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα和 C/EBPβ的表达量变化，并进行油红O染色，综合分析干扰和过表达 circADAMTS16对牛脂肪细胞分化的影响。结果如下：①qRT-PCR检测结果表明 circADAMTS16在心脏中表达量最高，肝脏次之，脾最低；②在牛原代前体脂肪细胞分化过程中， circADAMTS16在第2天显著高表达，随后逐渐降低，在第8天时达到最低。③在牛前体脂肪细胞中过表达circADAMTST16后，脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ的表达量显著下降；油红O染色结果显示，过表达后脂滴形成数量明显少于对照组；而干扰 circADAMTS16表达后，脂肪分化标志基因PPARγ和C/EBPα表达量显著上升。综上所述， circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞的分化过程具有显著的调控作用，过表达 circADAMTST16可抑制牛原代前体脂肪细胞分化进程，而干扰 circADAMTS16表达可以促进牛原代前体脂肪细胞分化进程，探明 circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞分化的具体调控作用。     

肉鸡吸收不良综合症新进展

在肉鸡中,吸收不良综合症是一种由不同传染病原体感染胃肠道引起的小肠营养物质吸收不良的综合症。虽然从感染吸收不良综合症的鸡体内分离到一些病毒,但是由于这些传染性病原体单独存在时都不能导致吸收不良综合症,因而其具体的致病机制还不清楚。肉鸡吸收不良综合症主要表现在     

高温干燥对诱导伴性赤蚁蚕表达差异蛋白的影响*

以温敏性的伴性赤蚁蚕(Bombys mori)S伴为材料，用高温干燥(30℃、RH60％)与常温常湿(25℃、RH80％)的条件对蚕卵进行催青处理，测定了胚胎各发育阶段的可溶性蛋白含量，结果均发现催青前期变化不明显，而催青后期急剧下降，且在后期高温干燥区低于常温常湿区。另外，通过对这两个处理区的蚕卵可溶性蛋白进行SDS-PAGE筛选，寻找到孵化后期(胚胎发育到第8天时)的胚胎有明显差异蛋白带，并对这两条差异蛋白带进行扫描分析，发现一些蛋白含量发生变化；对这两个处理区较大差异蛋白区带进行分离提纯，经氨基酸组分测定表明，氨基酸的种类基本相同，而含量上存在差异，且氨基酸总含量常温常湿区低于高温干燥区。     

鸡软骨细胞体外分离培养鉴定以及过表达miR-15a对软骨细胞的影响

为分析miR-15a在肉鸡不同组织中的表达情况,并探究过表达miR-15a对体外培养鸡软骨细胞的影响。本研究首先通过倒置显微镜观察、PCR、凝胶电泳和甲苯胺蓝染色对体外分离培养的软骨细胞进行鉴定。通过实时荧光定量PCR检测miR-15a在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity, VVD)组和健康组肉鸡中(各3只)各组织的表达量。之后通过CCK8和EDU方法分析软骨细胞过表达miR-15a后细胞增殖情况。软骨细胞转染miR-15a mimics后,通过qPCR检测软骨细胞的标志基因Collagen-2、Aggrecan、Collagen-10,成熟分化基因Runx2、Sox9、VEGF、MMP9,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β3以及凋亡基因Fas、FasL、Bcl-2的表达量。并构建FKBP5 3'UTR的野生型载体和突变型载体,通过双荧光素酶检测报告检测miR-15a与FKBP5的靶向关系。结果表明,本研究所用的胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法成功分离得到状态良好的软骨细胞。荧光定量结果显示,miR-15a在各组织中均有表达,与健康组相比,miR-15a在VVD组的肝(P < 0.01)、脾(P < 0.05)、胸腺(P < 0.01)中的表达量显著升高,在心和胸肌组织中的表达量显著降低(P < 0.01)。CCK8与EDU分析结果显示,与NC组相比,过表达miR-15a组软骨细胞增殖速度显著降低(P < 0.01),增殖细胞数量显著减少(P < 0.01)。qPCR结果显示,与mimics NC组相比,miR-15a mimics组的软骨细胞标志基因Aggrecan、成熟分化基因Sox9、Runx2表达量显著降低(P < 0.05),Fas基因表达量极显著上升(P < 0.01),FasL基因和抗凋亡基因Bcl-2极显著下降(P < 0.01)。成功构建了FKBP5 3'UTR野生型和突变型载体,双荧光素酶检测报告结果显示预测的靶基因FKBP5与miR-15a没有靶向关系。本研究成功分离并鉴定了鸡软骨细胞,过表达miR-15a抑制鸡软骨细胞增殖、成熟和分化并促进细胞凋亡。