猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用

本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法.以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒索抗体.经过研究确定抗原包被浓度为0.32 btg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1:2,酶标单抗工作浓度为1:3 200,血清抑制率大于40 %为阳性.应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为33.8%,细胞毒性中和试验检出率为30.9%,两者符合率达88.2 %.试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便.本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值.     

鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗轻、重链可变区基因的克隆与序列测定

将已扩增出的鸡堆型史美耳球虫特异性单抗轻、重链可变区基因进行纯化,并用纯化的2基因片段与pMD-18T载体连接,将重组载体转化于感受态细胞JM109,筛选出阳性重组子,提取阳性重组子质粒并进行测序.得到单抗轻、重链可变区的基因序列.轻链基因为312 bp,重链基因为381 bp,为单链抗体基因的构建及免疫毒素的构建奠定了基础.     

用MAB-ELISA对仔猪母源猪瘟抗体的试验

用猪瘟兔化弱毒苗4头份免疫后的母猪3头，分别于分娩后定期日龄采血分离24头份血清样品，初生仔猪16头，分别于出生后定期日龄前腔静脉采血分离128头份血清样品，用单抗酶联免疫吸附试验检测血清猪瘟抗体滴度，结果表明，母猪猪瘟抗体效价持续较高，达100％保护率，哺乳前仔猪抗体效价为0，吃初乳后抗体水平不断提高，但抗体总体效价较低，仅有57．89％的保护率；仔猪20日龄前平源抗体水平差异较大，与母猪抗体水平不呈正相关。     

检测流感病毒H5亚型抗体竞争ELISA方法的建立及初步应用

本研究采用灭活的H5亚型禽流感纯化病毒包被ELISA反应板,以辣根过氧化物酶标记的HA蛋白单克隆抗体作为竞争检测抗体,建立了检测H5亚型流感病毒抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法.实验结果表明:抗原最佳包被浓度为8.27ug/mL(1:800),酶标抗体最佳稀释倍数为1:800,待检血清最佳稀释倍数为1:10.对已知阳性样品的检测结果表明,本研究中所建立的竞争ELISA方法的敏感性高于经典的血凝抑制方法(HI).特异性试验表明该ELISA方法仅能检测H5亚型流感病毒抗体,具有良好的特异性.对临床样品检测表明C-ELISA与HI 方法的符合率达到93%以上.该方法可以对不同种属动物血清H5亚型流感病毒抗体进行快速定量的检测,为H5亚型流感病毒流行病学调查与抗体的检测提供了一种快速、方便、敏感的方法.     

检测犬瘟热病毒的单克隆抗体胶体金试纸条的制备

将从水貂中分离的犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）HB株经培养和纯化后免疫小鼠,制备分泌抗CDV-HB的杂交瘤细胞株,分别命名为2E1和7F3,ELISA测定腹水效价均大于107。亚类鉴定结果表明单抗2E1的分子亚类为IgM,7F3的分子亚类为IgG1,间接免疫荧光试验表明,这两株单抗均可以与CDV-HB特异性结合。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒并标记2E1单克隆抗体,获得检测貂犬瘟热病毒抗原的胶体金免疫层析试纸,且鉴定证明制备的检测CDV的胶体金试纸条具有良好的的特异性。     

CMAB008单抗阳离子交换层析介质寿命确认

建立CMAB008单抗阳离子交换层析介质寿命确认方案，采用实际生产的工艺参数进行缩小模型试验，以考察Nuvia S层析介质循环到100次后性能指标是否还满足层析需要。按试验方案对Nuvia S层析介质循环到100次，分别在使用前和循环使用20、40、50、70、90次后对层析柱进行柱效测试，以考察随循环次数的增加，层析介质对层析柱对称因子、理论塔板数的影响；对循环1、50、51、100次的层析柱进行动态载量测试，以考察洗脱峰的ProteinA残留、HCP残留、DNA残留、毛细管电泳纯度、SEC-HPLC纯度、活性、得率；以不同上样量20 g/L(循环8、48、88次)、40 g/L(循环9、49、89次)、80 g/L(循环61、62、63次),不同流速110 cm/h(循环10、50、92次)、149 cm/h(循环61、62、63次)、170 cm/h(循环11、59、93次)上样以考察阳离子交换层析洗脱峰SEC-HPLC纯度、得率。结果表明，使用前和循环使用20、40、50、70、90次后柱效测试中，所有对称因子、理论塔板数均在可接受的标准范围内；循环1、50、51、100次的层...