猪伪狂犬病PCR诊断方法的建立

根据伪狂犬病病毒(PRV)gB基因的序列,设计并合成了一对引物,以闽A株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测PRV的PCR方法,应用本方法对分离的病毒进行基因扩增,获得了217bp的特异性DNA片段,证明了对分离病毒检测的特异性和敏感性,为伪狂犬病的快速诊断提供了条件。     

鹿口蹄疫抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的口蹄疫病毒作为包被抗原,建立了检测鹿口蹄疫抗体的间接酶联免疫吸附测定（ELISA）。最佳反应条件是：抗原包被质量浓度为40μg/mL,血清稀释度为1：100,检测的灵敏度为1：400。     

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒IgY的制备

利用猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）疫苗超量免疫母鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法分离纯化IgY抗体,并用间接ELISA方法测抗体效价。结果表明：母鸡初次免疫后10d即有抗体产生,初次免疫75d后IgY效价可达1：10000,最高可达1：12800并能持续7-10d。IgY蛋白含量为10．64mg／mL蛋黄。IgY纯度达90％以上。     

猪链球菌2型人源分离株EF单克隆抗体的制备与鉴定

为了解猪链球菌2型（SS2）菌株毒力相关因子的致病机理,建立高效的免疫学检测方法,将SS2胞外因子（EF）抗原性强的区域通过基因克隆、原核表达,经亲和层析纯化的EF蛋白免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫细鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗EF蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶128～1∶512,诱生腹水的抗体效价为1∶104～1∶105。4株McAb腹水的Western blot鉴定表明McAb能特异性的识别EF。以2G1单抗腹水与和EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。     

Screening and Identification of Protease-producing Bacillus amyloliquefaciens from Pig's Intestines and the Preliminary Study of Its Enzymatic Properties

A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation, biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison, biolog identification. In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease, the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle, effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated. The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation which began in the early stage of the exponential growth phase. The optimum conditions for the protease was 40℃ and pH 7.0,Ca²⁺ and Mn²⁺ had a intensive effects on the protease activity, PMSF could completely inhibit the activity of protease, indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fish protein, soybean protein, corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively. In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion.     

ELISA试剂盒与我国动物兽药残留检测

ELISA方法以其灵敏度高、特异性强．仪器化程度低、检测速度快、样本前处理相对简单、价格低和适于开发成携带方便的试剂盒等优点．已成为国内兽药残留检测现场监控、大量样本筛查的主要方法，本文就其应用进展作一简单概述。     

大肠杆菌(O157)酶联免疫检测及注意事项

1材料与方法 1.1材料 抗原为Eae-Stx1/2B纯化蛋白;EHEC O157标准菌株(EDL933).抗体为单抗2H9纯化腹水,蛋白浓度为4.16毫克/毫升. 1.2方法 EHEC O157检测方法的建立.抗原包被浓度和抗体工作浓度的初步选择,用PBS调整Eae-Stx1/2B纯化蛋白浓度为8、4、3、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06微克/毫升,纵向包被1小时,封闭,洗涤,单抗从1:1000开始进行倍比稀释,横向加入各孔内,37℃反应1小时,加酶标二抗,洗涤,加底物液显色后终止,测定OD值.以OD值接近1.0,且前后稀释度出现较大变化时,该孔的包被浓度初步确定为最佳包被浓度,该孔抗体的稀释倍数为单抗的初步工作浓度.抗原的最佳包被温度和包被时间的确定.取5块酶标板,用初步确定的Eae-Stx 1/2B纯化蛋白的最佳包被浓度包被酶标板,分别于37℃0.5小时、37℃1小时、37℃2小时、37℃3小时、37℃4小时温育和4℃过夜;以初步确定的单抗工作浓度进行间接ELISA检测,测定其OD值.OD值最大最稳定的为最佳包被温度和时间.     

家畜日本血吸虫病血清学诊断方法浅析

笔者多年从事家畜日本血吸虫病的实验室诊断工作，近十几年来，随着科技的进步，在家畜日本血吸虫病的诊断方面涌现出许多血清学诊断方法。这些血清学诊断方法有什么异同，如何选择适合本地使用的方法，笔者根据多年的实践，以及对部分诊断方法的选用，积累了一定的经验，在此作一浅析，谨供家畜血防工作者参考。