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应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA 总被引:1,自引:0,他引:1
运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。 相似文献
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RP-HPLC测定消炎醌中隐丹参酮和丹参酮IIA的含量 总被引:1,自引:0,他引:1
消炎醌是中国农科院兰州畜牧与兽药研究所以甘西鼠尾草根的生物活性成分研制成功的兽用抗菌消炎新药 ,临床上用于治疗牛乳房炎、子宫内膜炎等 ,疗效显著、安全、无毒副反应。本实验采用反相高效液相色谱法对本品中隐丹参酮和丹参酮 IIA 的含量测定进行实验研究 ,结果表明 ,该法操作简便、快速、重现性好 ,可用于消炎醌的质量控制。1 仪器与试药美国 Waters6 0 0 E高效液相色谱仪 ,Waters2 4 87紫外检测器 ,Millennium32色谱工作站 ,KQ- 10 0型超声波清洗器。乙腈 (色谱纯 )、磷酸 (分析纯 )、水 (超纯水 )、隐丹参酮对照品 (中国药品生… 相似文献
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为推动我区种猪性能测定工作的开展,进一步了解我区种猪群体性能状况,2001年由自治区水产畜牧局组织开展了我区首次种猪性能现场测定工作,结果表明我区种猪群体性能相互间仍存在较大差异。因此建立健全种猪性能测定体系,加强种猪选育工作是当务之急。 相似文献
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