含粘质沙雷氏菌几丁质酶SchiA基因的植物转化质粒pBGll12构建和水稻遗传转化

将一个2．8kb的CaMV35S启动子／SchiA编码区／Nos终止区融合基因插入到植物转化载体pCAMBIAl301的多克隆酶切位点,得到1个14．6kb的新植物转化质粒pBGlll2,用花器介导法转化水稻(Oryza sativa),经PCR检测,初步证实已将目的基因整合到受体植物的基冈组中。一部分转基因T3代潮霉素抗性阳性植株对水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)和稻瘟病(Pyricularia oryzae)的抗性较非转化对照增强。RT—PCR表明抗病性植株为阳性,而不抗病的植株为阴性。将RT—PCR产物测序后,用BLAST软件分析序列可知,该序列为细菌几丁质酶基因核苷酸序列而不是植物几丁质酶基因的核苷酸序列。T4代转基因水稻的几丁质酶活力高于对照未转基因植株,表明转入的外源几丁质酶基因能正常表达。     

盾壳霉寄生核盘菌过程中葡聚糖酶、几丁质酶及电导率的变化

为了解盾壳霉寄生核盘菌的生化机理,采用了紫外分光光度法测定了盾壳霉寄生菌核过程中,葡聚糖酶和几丁质酶的变化,并用电导率仪测定了这个过程中电导率的变化。结果表明:从被盾壳霉寄生的活菌核检测到(处理)葡聚糖酶和几丁质酶活性明显高于活菌核和被盾壳霉寄生的死菌核,其中处理的葡聚糖酶活性从15 d以后就明显高于菌核自身也高于盾壳霉本身的酶活性,处理的几丁质酶活性从10 d起就维持在较高水平,处理的电导率从10 d以后明显高于活菌核。在这个过程中这两种酶活性提高,电导率增大,膜透性增强。     

几丁质/壳聚糖及其衍生物在食品工业中的应用

几丁质/壳聚糖由于其独特的分子结构而具有很多特殊功能。几丁质/壳聚糖及其衍生物在食品、纺织、印染、造纸、医药、农业、环保、化工等行业有着广阔的应用。在食品工业中,可作为保健食品基料、抗菌剂、果蔬保鲜剂、液体食品的澄清剂、食用包装膜、食品废水处理、饮用水净化剂、固定化酶载体、食品加工剂、霉菌污染检测、肉制品抗氧化剂等。     

亚洲玉米螟幼虫膜结合海藻糖酶基因RNAi效应

海藻糖是昆虫的血糖,为昆虫提供能量;海藻糖酶催化海藻糖分解为葡萄糖,是几丁质生物合成的原料。围食膜（peritrophic membranes,PMs）是昆虫消化道特有结构,对昆虫消化食物、保护肠道表皮细胞具有重要作用;几丁质是PMs的重要组分。海藻糖酶（trehalase,Tre）和几丁质合成酶（chitin synthase,CHS）是几丁质合成途径的第1个和最后1个酶。本研究通过饲喂亚洲玉米螟（Orstrinia furnacalis,Asian corn borer,ACB）膜结合海藻糖酶（OfMT）基因特异的干扰dsRNA,研究RNAi对ACB幼虫中肠CHSB（OfCHSB）基因表达及幼虫发育的影响。发现处理48 h后,OfMT基因和OfCHSB基因表达量分别下降了52%和53%,幼虫发育迟缓。通过对处理及对照ACB幼虫中肠石蜡切片进行苏木精-伊红染色（hematoxylin-ethanol,HE染色）和几丁质标记,发现血腔内脂肪体组织减小、中肠围食膜组织中几丁质含量减少。推测OfMT基因有可能成为ACB的生物防治的靶标基因。     

几丁质酶编码基因FolCTS3参与调控尖孢镰刀菌几丁质酶活性和致病力的研究

番茄枯萎病是一种由尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici, Fol)引起的土传植物病害,严重影响番茄农业生产。几丁质酶(CTS)在丝状真菌中保守存在,在真菌细胞壁形成过程中起着关键作用,但是否参与尖孢镰刀菌的致病过程目前尚未见报道。在Fol中鉴定到2个几丁质酶编码基因FolCTS2和FolCTS3,利用基因敲除方法研究其在病原菌致病中的功能。结果表明:缺失FolCTS3不影响Fol菌丝生长及对非生物胁迫的耐受能力,但显著影响几丁质酶活性和致病力,其缺失突变体的几丁质酶活性和致病能力显著下降;而缺失FolCTS2对Fol生物学表型无显著影响。这一研究提示几丁质酶编码基因FolCTS3参与调控尖孢镰刀菌的几丁质酶活性和致病过程,为解析尖孢镰刀菌的致病分子机制及番茄枯萎病防治策略的制定提供了理论依据。     

定虫脲(Chlorfluazuron)对粘虫幼虫(Mythimna separata L.)杀虫作用的研究

定虫脲(CFU)系苯酰基苯脲类系列药剂中有较高药效的一个品种,它对三龄粘虫幼虫的毒效作用较其第一代杀虫剂除出脲(Diflubenzuron)高约70倍,对六龄粘虫幼虫,用点滴、胃毒和注射方法处理,最终毒效相若。根据粘虫六龄幼虫表皮几丁质含量的动态变化,在不同时龄时用点滴法施药,发现试虫的死亡时间和受药时间有明显相关。以72时龄为界,在此以前受药者试虫多数不能变态,死亡于化蛹之前。而72时龄以后施药者,试虫则多数可变态,但在蛹期陆续死亡。因此,72时龄是表皮几丁质沉积的分界线,但并未发现施药后的原位反应(insi-tu)或几丁质厚度和药效之问的相关。     

蜂蛹营养成分分析

为促进蜂蛹资源的开发利用,对蜂蛹的主要营养成分进行了研究。结果表明,蜂蛹干物质中含蛋白质46.21%、脂肪26.09%、碳水化合物20.34%、灰分4.46%、总糖0.73%、几丁质4.37%、黄酮类化合物45.31 mg/100g。蛋白质中含有18种氨基酸,总量为44.01 g/100g,人体必需的8种氨基酸种类齐全,含量为17.34 g/100g,占氨基酸总量的39.39%;蜂蛹脂肪含有棕榈酸、硬脂酸、肉豆蔻酸、油酸和亚麻酸5种脂肪酸,分别占脂肪酸总量的38.14%、14.52%、2.64%、43.27%和1.43%;在已测定的19种矿质元素中,镁的含量最高,为1 500.51μg/g,钙的含量次之,为886.25μg/g,锌和镍的含量也较高,分别为139.59μg/g和112.69μg/g;蜂蛹中含有维生素A 172.42 IU/100g、维生素C 584.36 mg/100g、维生素D 17140 IU/100g。     

抗逆生防木霉筛选及其相关因子诱导

对供试各木霉菌株经303、5、404、55、0℃保温24 h后,于28℃培养6~7 d,进行耐高温菌株筛选。结果表明,耐高温生防木霉菌株T-30经热激后可产生抗逆蛋白,且表达量较大。对高温抗逆蛋白进行DEAE-32及Sephadex G-100柱层析得到单一蛋白洗脱峰。SDS-PAGE电泳发现该抗逆蛋白含有2个亚基,分子量分别为30和42 kD。酶学检测发现,该高温抗逆蛋白有几丁质酶活力,其最适pH值为5.0,最适温度为50℃,Km值为0.91 mg/ml,对Na+有较强的耐受性。     

盾壳霉寄生核盘菌过程中胞壁降解酶的变化及对核盘菌的影响

通过测定盾壳霉寄生核盘菌过程中几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的变化及对核盘菌菌丝和菌组织的影响,结果表明:盾壳霉在寄生核盘菌初期其几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性均会明显的升高,具有明显的诱导酶特征,同时盾壳霉对照在没有核盘菌存在时,也能检测到几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性,说明盾壳霉产生的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶都有组成酶存在。核盘菌菌丝和菌核组织的大量消解都出现在这两种酶活性达到高峰之后,表明两种酶协同作用更有利于核盘菌菌丝和菌核组织的消解腐烂。