禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端添加了终止密码子。用限制性内切酶SnaB和Not将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His Muts。将重组菌株在1%甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76 000,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。     

鸡减蛋综合征病毒Hexon基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

用PCR方法扩增出鸡减蛋综合征病毒（EDSV）Hexon基因保守片段,经琼脂糖凝胶电泳及序列测定分析扩增产物的特异性。以构建的阳性重组质粒作为标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应的扩增曲线和溶解曲线,并绘制标准曲线。结果表明,建立的EDSV荧光定量PCR标准曲线Ct值与1×10^1～1×10^6拷贝/μL的基因拷贝数呈现良好线性关系,灵敏度可达10拷贝,且特异性及重复性良好;说明本试验建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法可用于EDSV的诊断及病原的定量分析。     

当前须防小反刍兽疫

正小反刍兽疫又称羊瘟、小反刍兽瘟,是由小反刍兽疫病毒引起的山羊、绵羊的高度接触传染性疾病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。2013年12月份以来,我国新疆、甘肃、内蒙古、宁夏等省区先后发生小反刍兽疫疫情,给养羊业造成了重大经济损失。1病原及流行特点小反刍兽疫病毒是有囊膜的病毒,自然环境下抵抗力较弱,50℃的温度60分钟     

当前鸡传染性法氏囊病的流行、诊断及防治

2010-2012年,笔者临床接触本市多家鸡场,发现鸡传染性法氏囊病(IBD)的发病率较高,占所有发病鸡的35%左右,并且在逐年演变。1流行现状鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)在体内及外环境中存活时间延长,耐抗性极大的增强,耐酸,耐碱,耐高温,耐紫外线,不易被常规消毒剂杀灭;55℃高温作用5小时仍有活力,0.5%酚类1小时内不能将其灭活;被污染的鸡舍内可存活100天以上,在垫料、饲料中可存活60天以上,一般禽舍中可存活时间更长。     

2014年-2016年广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2和ORF5基因的遗传多样性分析

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传进化情况,对2014年-2016年来自广西各地的部分PRRSV阳性病料进行Nsp2和ORF5基因的扩增和测序分析.结果获得34个Nsp2基因序列和45个ORF5基因序列,均属于美洲型毒株.Nsp2基因间核苷酸序列的同源性为91.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为81.3％~84.3％、88.9％~92.1％、94.3％~99.3％和73.5％~75.1％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为51.5％~53.2％.ORF5基因间核苷酸序列的同源性为82.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为83.7％~99.5％、85％~95％、83.8％~99.7％和83.2％~86.4％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为62.4％~64.5％.基于Nsp2和ORF5基因推导的氨基酸序列绘制的遗传进化树中,广西地区的毒株主要分布在以JXA1为代表的Ⅳ亚群.表明当前广西PRRSV流行毒株以JXA1株为代表的高致病性美洲型毒株为主,各毒株Nsp2和ORF5基因序列存在一定的差异,尚未发现欧洲型毒株和美洲型NADC30类毒株.     

伪狂犬强毒S株TCID50与LD50毒价对比试验

伪狂犬病(Pseudorabis PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabis virus PRV)又名猪疱疹病毒Ⅰ型引起的一种急性传染病。该病对全世界养猪业危害极大，造成巨大经济损失。安全有效的疫苗是预防和控制该病的关键所在。伪狂犬病活疫苗具有安全、免疫效果好、使用简便等特点，已在全国广泛推广使用。伪狂犬病活疫苗在进行效力检验时，需使用伪狂犬强毒攻击实验动物，且每次攻毒前均要用兔进行强毒的毒价测定，即LD50测定，较为繁琐。由于伪狂犬强毒也可以使鸡胚成纤维细胞发生明显病变，     

鸡新城疫检测技术研究概述

新城疫 (ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅ ,ＮＤ)是由副粘病毒属新城疫病毒 (Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ)引起的一种高度接触性、急性、致死性传染病 ,最常侵袭家鸡和珠鸡 ,也能感染许多其它家禽、野禽和观赏鸟。自 192 6年在印度尼西亚的巴塔维亚和     

鹅细小病毒VP3蛋白B细胞线性表位的精确定位

本试验旨在利用获得的4株抗鹅细小病毒(GPV)VP3的单克隆抗体,进一步对GPV VP3 B细胞线性抗原表位精确定位。根据笔者实验室已鉴定的线性抗原表位区结果,筛选出单抗所针对的优势抗原表位区。设计并合成互相重叠5 aa的10 aa短肽寡聚核酸片段,退火后,连入pET-32a载体,经转化鉴定,诱导表达后,获得相应的小片段融合蛋白,并利用单抗通过Western blot进行抗原性鉴定。同样方法进行短肽片段两端氨基酸的逐个缺失设计,进一步精确定位,结果鉴定出2个抗原表位,分别为430-435 aa和643-647 aa。     

规模化猪场猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

20 0 1年 11月至 2 0 0 2年 8月 ,对北京、天津、广东、深圳、山东、山西等地 12个规模化猪场猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染发病群猪进行了临床发病情况调查 ,并采用 PCR方法对所收集的 5 5份组织病料进行 PCV2的检测 ,结果表明 ,12个猪场中有 11个猪场发病猪群表现为断奶后多系统衰竭综合征 ,1个猪场表现为皮炎和肾病综合征。由此可见 ,PCV2感染在我国规模化猪场已普遍存在